MACROPROCESO SERVICIO PROCESO PRESTACIÓN DEL

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1 MACROPROCESO SERVICIO PROCESO PRESTACIÓN DEL SERVICIO INSTRUCTIVO USO DE LA CENTRÍFUGA REFRIGERADA EPPENDORF 5810R REVISADO POR Asistente de Investigación APROBADO POR Director Instituto de Errores Innatos del Metabolismo

2 1. OBJETIVO Describir las instrucciones generales para el adecuado manejo, mantenimiento y limpieza de la Centrífuga refrigerada Eppendorf 5810R utilizada para la centrifugación de las muestras procesadas el Instituto de Errores Innatos del Metabolismo. 2. CONDICIONES GENERALES Este equipo es de manejo exclusivo de personal capacitado y autorizado para su uso, previo entrenamiento respectivo. Dicho personal, esta en la obligación de cumplir las instrucciones descritas en el presente documento. 3. DEFINICIONES Cámara: espacio de la centrífuga donde se encuentra el rotor. Eje: soporte metálico en el cual se atornilla el rotor. Está unido a la transmisión del motor de la centrífuga y es el que imprime el movimiento giratorio al rotor. Rotor: soporte metálico giratorio en el cual se ponen los tubos para centrifugarlos. La centrífuga refrigerada 5810R cuenta con 2 tipos de soportes: uno pequeño para viales de 1,5ml que puede girar hasta una velocidad máxima de rpm y un soporte más grande que gira a una velocidad máxima de 4000 rpm de 4 brazos del cual cuelgan 4 dispositivos suspensores metálicos y puede centrifugar tubos de mayor volumen (usualmente tubos cónicos de 15 y 50 ml). Canastilla o contenedor: soporte plástico que va insertado en el dispositivo suspensor del rotor grande, donde se insertan los tubos cónicos. Las canastillas son intercambiables de acuerdo al tamaño del tubo que se desee centrifugar. Página 2 de 12

3 4. DESARROLLO DEL INSTRUCTIVO CENTRIFUGAR POR UN TIEMPO DEFINIDO 1. Enciende el equipo, mediante el botón de encendido localizado en la parte lateral derecha de la centrífuga. Las características de centrifugación de la última corrida aparecerán en el display frontal. 2. Abre la tapa de la centrífuga presionando la tecla OPEN en el panel frontal del equipo. 3. Coloca el rotor indicado para los tubos que va a centrifugar. 4. Carga el rotor simétricamente con respecto al eje, asegurándolo con la llave diseñada para esta actividad y cierra la tapa de la centrífuga. La luz verde de la tecla Open debe encenderse si la tapa quedó bien ajustada. 5. Presiona la tecla Temp para ajustar la temperatura a la que va a centrifugar las muestras y selecciona el valor deseado con las flechas. Siguiendo esta instrucción es posible regular la temperatura durante el proceso de centrifugado. 6. Ajusta la velocidad de rotación de acuerdo a la necesidad del ensayo, presionando la tecla Speed en el panel de control frontal y las flechas reguladoras. La velocidad máxima de rotación dependerá del rotor que esté utilizando. 7. Presiona repetidamente la tecla Speed, si desea cambiar la unidad en las que se da la velocidad de rotación. Para centrifugar en rcf, presiona la tecla Speed hasta que aparezca el símbolo a la izquierda del display de velocidad e ingresa en el programa de la centrífuga el radio mayor del rotor que esté usando, para esto, presione nuevamente el botón Speed hasta que el símbolo aparezca a la izquierda del display de velocidad y con las flechas seleccione el valor del radio deseado. El nuevo valor de rcf aparece tres segundos después de que el radio del rotor ha sido ingresado. 8. Presiona la tecla Time repetidamente hasta que el símbolo (aceleración) o el símbolo (desaceleración) aparezcan al lado del display del tiempo para cambiar las velocidades que maneja automáticamente la centrífuga. Selecciona con las flechas el nivel de aceleración o desaceleración deseado. El nivel de desaceleración 0 es equivalente a una desaceleración libre en la cual la centrífuga no frena el rotor. 9. Presiona la tecla Time en el panel frontal y las flechas para seleccionar el tiempo de centrifugación (en min.). Esta actividad puede ser realizada en el recorrido de la centrifugación. Página 3 de 12

4 10. Presiona la tecla Start para empezar a centrifugar. El símbolo aparece intermitentemente y en el display se observa la velocidad a la que se encuentra girando el rotor en ese momento. Si desea interrumpir la centrifugación antes de que se haya acabado el tiempo, presiona la tecla Stop. Cuando la centrífuga se detenga pitará 3 veces y la luz verde del botón Open se encenderá. Cuando se acabe el tiempo de rotación y la centrífuga se detenga, el equipo pitará 3 veces y la luz verde de la tecla Open se prenderá. 11. Presiona la tecla Open para abrir la tapa de la centrífuga, saca los tubos, cierra la tapa y apaga el equipo presionando el botón Off. Registra en el Formato de Uso Centrífuga Refrigerada (SE-P31-F15) las condiciones y parámetros de control del equipo. Página 4 de 12

5 CENTRIFUGAR MUESTRAS POR UN CORTO TIEMPO (SHORT SPIN) 1. Enciende el equipo utilizando en botón de encendido localizado en la parte lateral derecha de la centrífuga. Las características de centrifugación de la última corrida aparecerán en el display frontal. 2. Abre la tapa de la centrífuga presionando la tecla OPEN en el panel frontal del equipo y levántela. 3. Verifica que el rotor sea el indicado para los tubos que esté utilizando. 4. Carga el rotor simétricamente con respecto al eje y cierra la tapa de la centrífuga. La luz verde de la tecla Open debe encenderse si la tapa quedó bien ajustada. 5. Ajusta el programa de rotación presionando la tecla Prog y las flechas en el panel de control frontal hasta que aparezca SH en el display de la centrífuga. 6. Presiona la tecla Start durante todo el tiempo de centrifugación requerido para el ensayo. Cuando deje de presionar este botón el corrido se detendrá, el equipo pitará 3 veces y la luz de la tecla Open se prenderá. 7. Presiona la tecla Open para la tapa de la centrífuga y saca los tubos. 8. Presiona la tecla Prog y con las flechas el programa 0 para regresar al estatus estándar, apaga el equipo presionando el botón Off y registra en el Formato de uso Centrífuga refrigerada (SE-P31-F15) las condiciones y parámetros de control del equipo. CENTRIFUGAR DE MANERA CONTINUA Esto sólo es necesario si se va a centrifugar más de 99 minutos. 1. Encienda el equipo utilizando en botón de encendido localizado en la parte lateral derecha de la centrífuga. Las características de centrifugación de la última corrida aparecerán en el display frontal. 2. Presiona la tecla Open para abrir la tapa de la centrífuga y verifica que el rotor sea el indicado para los tubos que esta utilizando. 3. Carga el rotor simétricamente con respecto al eje y cierra la tapa de la centrífuga. La luz verde de la tecla Open se enciende si la tapa quedó bien cerrada. Página 5 de 12

6 4. Ajusta el tiempo de rotación de la centrífuga a oo presionando la tecla TIME en el panel de control frontal y las flechas. 5. Presiona la tecla Temp y las fechas para ajustar la temperatura requerida para el ensayo. 6. Presiona la tecla Start para iniciar la centrifugación. Durante el corrido en el display se mostrará la velocidad del rotor en ese momento y el tiempo que lleva la centrifugación. Si la centrífuga dura en funcionamiento más de 99 segundos, en el display de tiempo se mostrará Presiona la tecla Stop para detener la centrífuga. Cuando esta se detiene, pita 3 veces y la luz verde de la tecla Open se enciende. 8. Presiona la tecla Open para abrir la tapa, saca los tubos, cierra la tapa y presiona la tecla Off para apagarla. Registra en el Formato de Uso Centrífuga Refrigerada (SE-P31-F15) las condiciones y parámetros de control del equipo. REFRIGERACIÓN 1. Enciende el equipo utilizando en botón de encendido localizado en la parte lateral derecha de la centrífuga. Las características de centrifugación de la última corrida aparecerán en el display frontal. 2. Presiona la tecla Open para abrir la tapa de la centrífuga y verifica que el rotor sea el indicado para los tubos que esta utilizando. 3. Cierra la tapa de la centrífuga. La luz verde de la tecla Open debe encenderse si la tapa quedó bien cerrada. 4. Presiona la tecla Temp para ajustar la temperatura requerida en el ensayo. Selecciona el valor deseado por medio de las flechas. 5. Presiona la tecla Fast Cool sin cargar el rotor. El rotor empezará a girar a velocidad constante y la temperatura irá bajando rápidamente. En el campo de programa del display aparecerá FC, y se oirá una señal a intervalos regulares. Cuando alcance la temperatura del rotor deseada y esta se mantenga por 5 minutos la centrífuga se parará automáticamente. Puede también pararla oprimiendo la tecla Stop.Presiona la tecla Open cuando el rotor se detenga completamente y levante la tapa. 6. Carga el rotor simétricamente con respecto al eje y cierra la tapa de la centrífuga. Presiona la tecla Star para iniciar la centrifugación de las Página 6 de 12

7 muestras en las condiciones requeridas. La centrifuga se detiene automáticamente de acuerdo a la programación definida para el ensayo, pita 3 veces y la luz verde de la tecla Open se enciende. Cuando la tapa de la centrífuga se encuentra cerrada, la cámara se mantiene refrigerada a la temperatura seleccionada, a condición de que esta sea menor a la temperatura ambiente, así el rotor no esté girando. Si la centrífuga no se usa por más de 6 horas o si la tapa no se abre durante este tiempo la refrigeración automática se apagará y el mensaje Standby off aparecerá en el display al igual que la temperatura real de la cámara. 7. Presiona la tecla Open para abrir la tapa y saca las muestras. 8. Limpia la bandeja de agua de condensación que se encuentra debajo del equipo en la parte frontal inferior después de centrifugar. Deja un tiempo la tapa de la centrífuga abierta para descongelarla y limpia la cámara removiendo el hielo y el agua de condensación utilizando un paño suave húmedo. 9. Cierra la tapa y apaga el equipo presionando el botón OFF. Registra en el Formato de Uso Centrífuga Refrigerada (SE-P31-F15) las condiciones y parámetros de control del equipo. CAMBIAR EL ROTOR 1. Desmonta el rotor que está en la cámara desatornillándolo con la llave hexagonal (girándola en el sentido contrario de las manecillas del reloj). 2. Limpia la parte del nuevo rotor que va a entrar en contacto con el eje y el eje mismo con un paño limpio antes de ajustarlo. 3. Verifica que la temperatura del rotor y del eje en el momento de ajustar el nuevo rotor está entre10 C y 30 C. 4. Coloca el rotor en el eje de manera que ajuste bien y quede horizontal. 5. Atornilla el rotor utilizando la llave hexagonal, girándola en el sentido de las manecillas del reloj. 6. Verifica que el rotor haya quedado atornillado al eje. 7. Ajusta la tapa del rotor y cierre la tapa de la centrífuga. La luz verde del botón Open debe encenderse si la tapa quedó bien cerrada. Página 7 de 12

8 8. Presiona la tecla Start del panel frontal para poner en funcionamiento la centrífuga durante 1 min sin haber cargado el rotor. La velocidad máxima a la que puede girar el rotor instalado se ajustará automáticamente. En el display frontal aparece un letrero diciendo Max. Speed. 9. Presiona la tecla Stop cuando la velocidad máxima se haya ajustado. El equipo esta listo para su uso. CREAR, SELECCIONAR Y BORRAR UN PROGRAMA DE LA CENTRÍFUGA 1. Enciende el equipo utilizando en botón de encendido localizado en la parte lateral derecha de la centrífuga. Las características de centrifugación de la última corrida aparecerán en el display frontal. 2. Ajusta los parámetros de la centrífuga (velocidad, temperatura, tiempo de corrido, etc.) 3. Presiona 2 veces la tecla Prog para guardar un programa nuevo, con lo cual el display del programa titila. El primer número de programa libre esta indicado en el display de la centrífuga después de la letra P. 4. Selecciona el número que desea asignarle al programa que acaba de crear con las flechas del panel frontal. 5. Presiona la tecla Prog por 2 segundos hasta que aparezca Ok en la pantalla. El programa ha sido guardado exitosamente. 6. Selecciona el programa que desea utilizar mediante la tecla Prog y las flechas de la siguiente forma: 1..9, A Z para los programas creados por los usuarios. SH para los parámetros de centrifugaciones cortas (Short Spin). Presiona la tecla Start para empezar la centrifugación. 7. Selecciona el programa 0 ó modifica los parámetros de centrifugación para salir del programa seleccionado. 8. Presiona Prog una sola vez para borrar un programa creado por los usuarios. Selecciona con las flechas el programa que desea borrar y la tecla Stop por 10 segundos hasta que aparezca Cleared en la pantalla. 9. Presiona la tecla Prog y selecciona con las flechas el programa 0 para regresar al estatus estándar. Página 8 de 12

9 CÁLCULO DE LA FUERZA CENTRIFUGA RELATIVA La fuerza centrífuga relativa es la medida de la fuerza aplicada a una muestra en una ultracentrífuga. Esta puede ser calculada a partir de la velocidad del rotor (RPM) y el radio rotacional del rotor (cm). Donde g es la fuerza centrífuga relativa, r es el radio rotacional del rotor usado y N es la velocidad de rotación. LIMPIEZA Y MANTENIMIENTO Solamente se deben usar agentes neutros para la limpieza y desinfección del equipo. 1. Abre la tapa de la centrífuga y la desconecta de la fuente de poder principal. Desatornilla el rotor con la llave hexagonal y lo limpia por separado. 2. Limpia la superficie exterior de la centrífuga y la cámara del rotor con detergente neutro. 3. Limpia la parte interior del rotor con un limpión humedecido en la solución de jabón neutro y agua. Retire el jabón neutro con un limpión humedecido en agua y engrase con glicerina las juntas de goma situadas en la cámara interior del rotor. 4. Seca con un paño absorbente suave la condensación de agua en la cámara del rotor después de utilizarla en refrigeración. 5. Limpia la cámara de la centrífuga usando un paño húmedo y una solución suave de jabón neutro cuando se derramen sustancias. Página 9 de 12

10 5. PRECAUCIONES GENERALES El rotor debe ser cargado simétricamente con respecto al eje. De lo contrario el rotor se quedará atorado, se afectará la velocidad de centrifugación y las partes tenderán a dañarse. Por razones de estabilidad mecánica todos los dispositivos suspensores del rotor grande deben ser cargados con canastillas del mismo tipo. Las canastillas están marcadas en la parte lateral con una categoría de peso. Las canastillas y dispositivos suspensores opuestos deben ser de la misma categoría de peso. No mueva o golpee la centrífuga cuando esta se encuentre en funcionamiento. No utilice canastillas ni dispositivos suspensores que muestren señas de deterioro, corrosión o defectos mecánicos. Revise los accesorios periódicamente. Cuando cambie de rotor asegúrese que el rotor que acaba de instalar no quede ladeado y quede bien atornillado en el eje. Cuando use el rotor pequeño debe asegurarse de ajustar bien la tapa del rotor. Asegúrese que los rotores no estén sometidos a daños mecánicos, dado que estas partes están sometidas a fuerzas de deformación, un rasguño leve puede causar un daño interno severo en el material. La centrífuga no debe ser manejada en un ambiente inflamable y no debe ser usada para centrifugar sustancias explosivas o muy reactivas. No se deben centrifugar a la máxima velocidad soluciones cuya densidad sea mayor a 1,2g/cm. En centrifugaciones por largo tiempo los tubos tienden a calentarse. Tenga en cuenta los datos de manufactura de los tubos cuando vaya a centrifugar. El uso de solventes orgánicos como el cloroformo puede tener un efecto adverso en la estabilidad de los tubos. Manéjelos con cuidado. Las muestras y reactivos centrifugados deben manejarse usando la protección necesaria para el analista y para el equipo. En el evento de una contaminación por impurezas o agentes agresivos las partes de la centrífuga deben ser limpiadas inmediatamente con un limpiador neutral (e.j. Extran Página 10 de 12

11 neutral o RBS neutral), especialmente los contenedores, las canastillas y los bornes del rotor y el eje. Para abrir la centrífuga en caso de fallo del suministro eléctrico desconectar el interruptor principal y esperar hasta que el rotor se haya detenido completamente. Introducir la llave hexagonal en la tuerca debajo del orificio situado en el centro de la parte frontal de la centrífuga y girar en el sentido contrario a las manecillas del reloj. Después de abrir la tapa, la llave hexagonal debe ser sacada. En caso de observarse algún mensaje de error en el display, remitirse al manual del equipo. Página 11 de 12

12 6. RELACIÓN DE REGISTROS NOMBRE Formato de uso Centrífuga refrigerada Eppendorf 5810R CÓDIGO SE-P31-F15 Página 12 de 12