ARN polimerasas Eucariotas

Transcripción

1 Transcripción

2 ARN polimerasas Eucariotas

3 ARN polimerasa II Eucariota Factor Subunidades Peso Función TFIID TBP TAF s kda kda Reconocimiento TATA (promotor) Reclutamiento de TFIIB Regulación positiva y negativa TFIIA 3 12, 19, 35 kda Estabilización de la unión TBP Estabilización unión TAF-ADN TFIIB 1 35 kda Reconocimiento de ARN pol II-TFIIF Selección lugar inicio de la ARN pol II TFIIF 2 30, 74 kda Direccionamiento de la pol II al promotor Desestabilización de las interacciones inespecíficas RNA pol II-ADN RNA pol II kda Síntesis de ARN Reclutamiento de TFIIE TFIIE 2 34, 57 kda Reclutamiento de TFIIH Modulación de las actividades helicasa, ATPasa y quinasa de TFIIH TFIIH kda Fusión del promotor

4 ARN polimerasas Eucariotas Holoenzima de la ARN polimerasa II TFIID

5 ARN polimerasas Eucariotas El primer paso es la unión del factor general de transcripción TFIID a la secuencia TATA. La TBP se une a un segundo factor de transcripción general (TFIIB) formando un complejo TBP- TFIIB en el promotor.

6 ARN polimerasas Eucariotas El TFIIB a sirve de puente para la ARN polimerasa, que se une al complejo TBP- TFIIB en asociación con un tercer factor, TFIIF. Tras la unión de la ARN polimerasa II al promotor, se produce de la unión de otros dos factores adicionales (TFIIE y TFIIH).

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8 Maduración del ARN

9 Maduración del ARNm 1. Splicing 2. Capping 3. Poliadenilación transcrito primario o ARNm precursor el producto de la transcripción no es el ARNm funcional

10 Splicing el ARNm precursor tiene segmentos que no codifica proteínas pre-arn eliminación de intrones y unión de los exones o regiones codificantes se elimina la información del ARN que no se traduce a proteínas

11 Splicing en la mayoría de los pre-arnm el 25% de la información no codifica proteínas las secuencias no codificantes tienen 4-10 veces la longitud de las codificantes

12 Spliciosoma los intrones son eliminados por un complejo macromolecular

13 Splicing el proceso de splicing se realiza en dos pasos

14 Spliciosoma 5 ARNsn proteínas el spliciosoma contiene moléculas de ARNsn

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16 Intrones Autoempalmantes

17 Corte y empalme alternativo del ARNm

18 Capping protege el ARNm de las propias enzimas del citoplasma permite que el ARNm pueda ser transportado hacia el citosol sirve para que el ribosoma pueda reconocer al ARNm el capping es un nucleótido inusual, la 7-metil-guanosina

19 Poliadenilación sirve para proteger a la molécula de ARN de algunas enzimas que podrían dañarlo en el citoplasma en algunos ARNm, tiene la función de darle mayor estabilidad a la molécula la poliadenilación no se produce en todos los ARNm

20 Maduración del ARNt Molécula de ARNt en 2 dimensiones

21 Maduración del ARNt Molécula de ARNt en 3 dimensiones

22 Maduración del ARNt los ARNt llevan los aminoácidos a los ribosomas durante la síntesis proteica

23 Maduración del ARNt unidad repetitiva precursor cortado modificación Número de Repeticiones Levaduras = 300 Drosophila = 850 Hombre = 1300 los 61 ARNt se sintetizan juntos en una misma unidad de transcripción

24 Maduración del ARNt una vez cortados adquieren estructura secundaria y sufren la modificación de bases

25 Maduración del ARNt una vez cortados adquieren estructura secundaria y sufren la modificación de bases

26 Maduración del ARNt en el citoplasma cada ARNt es cargado con un aminoácido específico según la secuencia del anticodón los aminoácidos se unen por enlaces covalentes al extremo 3' del ARNt por medio de la enzima aminoacil-arntsintetasa las sintetasas son específicas de cada a.a. y tienen la capacidad de reconocer al aminoácido y unirlo en forma específica a su ARNt cada ARNt está cargado con un aminoácido particular que depende de la secuencia que tenga el loop anticodón finalmente los ARNt son cargados con un aminoácido específico

27 Maduración del ARNt 1. En la primera reacción, el aminoácido se une a ATP para formar aminoacil-amp. 2. En la segunda reacción se transfiere el aminoácido al extremo CCA 3 del ARNt receptor. reacción de unión del aminoácido a un ARNt específico

28 Maduración del ARNt cómo identifican las ARNt sintetasas a sus ARNt? las sintetasas reconocen un pequeño número de bases (de 1 a 5) por lo general reconocen una de las bases del anticodón a menudo se reconoce uno de los tres últimos pares de bases del tallo aceptor reconocen una base ubicada entre el tallo aceptor y el extremo CCA reconocimiento de los ARNt por las ARNt sintetasas

29 Maduración del ARNr el ARNr forma parte de los ribosomas que realizan la síntesis proteica

30 Maduración del ARNr los ARNr se sintetizan en una única unidad de transcripción

31 el ARNr adquiere estructura secundaria por apareamiento interno de las bases

32 Composición del Nucleolo en el nucleolo se ensamblan con proteínas para formar las subunidades ribosómicas

33 Composición del Nucleolo satélite constricción secundaria brazo 1 segmento proximal centrómero brazo 2 cromosomas humanos con ADNr los genes que codifican el ARNr están repetidos cientos de veces

34 Composición del Nucleolo Región Fibrilar está formada por las moléculas de ARNr que se encuentran sintetizando Región Granular está formada por la subunidades de los ribosomas en diferentes etapas de maduración en interfase las regiones con genes ribosómicos se agrupan formando el nucleolo

35 Tinción de Nucléolos con Nitrato de Plata

36 Identificación de Genes Ribosomales mediante FISH