CT-416 EEA Bariloche. 2002. 1 EFICIENCIA DE LA INSEMINACION ARTIFICIAL CON SEMEN CONGELADO EN OVINOS Cueto, M.I.; Gibbons, A.E. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria, EEA Bariloche. CC: 277-8400- Río Negro. RESUMEN En el campo experimental Pilcaniyeu del INTA Bariloche, se ha implementado en la estación reproductiva durante 11 años, la sincronización de los estros (MAP, 60 mg y ecg 200-300 UI) y la inseminación artificial intrauterina por laparoscopía con semen congelado en ovinos. Esta técnica ha sido aplicada sobre un total de 6015 ovejas Merino, para la evaluación genética de 71 carneros mediante una prueba de progenie. El porcentaje medio de preñez durante los 11 años fue del 49%. Se registró una mayor tasa de preñez mediante la inseminación artificial sobre el celo retorno de animales sincronizados hormonalmente respecto a la inseminación artificial sistemática. (60±2 horas post tratamiento progestacional) (65% vs. 47%). La tasa de prolificidad varió entre el 100% y 120%. La implementación de esta técnica reproductiva ha brindado la posibilidad de comparar el nivel genético de carneros de cabañas nacionales y australianas. Palabras clave: inseminación artificial, semen congelado, sincronización de estros, ovinos. INTRODUCCION La evaluación genética de reproductores ovinos en centrales de prueba comenzó en Sud áfrica y Australia a mediados de la década del '80, y en Argentina en 1991 mediante el convenio INTA-Asociación Argentina de Criadores de Merino (Mueller, 1991; Mueller, 2002). La inseminación artificial (IA) con semen congelado es el único medio para evaluar carneros en centrales de prueba, sin necesidad de transportarlos y aún cuando estos no sean contemporáneos. A nivel internacional se recomienda para la IA con semen congelado ovino, emplear la técnica laparoscópica y el uso de la sincronización de estros mediante progestágenos intravaginales y la administración de Gonadotrofina Coriónica equina (ecg). La IA sistemática (a tiempo fijo post tratamiento progestacional) permite inseminar 55 a 70 ovejas por hombre durante un período de cuatro horas. Los valores de referencia para esta técnica indican tasas de preñez del 50% (revisión de Salamon y Maxwell, 1995). No obstante, los estros sincronizados con progestágenos presentan menor fertilidad respecto a los estros naturales (Robinson, 1965; Van Der Westhuysen y Van Niekert 1971; Salamon y Maxwell, 1995). En este trabajo se presentan los resultados de la IA laparoscópica realizada en la prueba de progenie para carneros de la raza Merino. Se evaluó la eficiencia reproductiva entre la IA sistemática y la IA con detección de estros sobre el celo retorno post tratamiento hormonal. MATERIALES y METODOS La presente experiencia se realizó durante 11 años en el Campo Experimental del lnta Bariloche, ubicado en la región de Sierras y Mesetas Occidentales en la provincia de Río Negro.
CT-416 EEA Bariloche. 2002. 2 a) Animales de ensayo Años 1991-2000: Cada año una majada de 300 a 700 ovejas adultas Merino fue dividida al azar en lotes de inseminación de 110 a 140 hembras cada uno. En la estación reproductiva (otoño, mayo HS), los lotes de ovejas fueron tratados con esponjas intravaginales con progestágenos (60 mg de acetato de medroxiprogesterona, Lab. Syntex, Argentina) durante 14 días. Finalizado el tratamiento progestacional, se suministró por vía intramuscular 200 UI (1991-1995) y 300 UI (1996-2000) de Gonadotrofina Coriónica equina (ecg) (Novormon 5000, Lab. Syntex, Argentina). Cada lote fue inseminado en forma sistemática por laparoscopía, a las 60±2 horas post retiro de las esponjas. Se realizó la inseminación artificial (IA) de un lote por día, con la participación de uno o dos inseminadores, una persona en el descongelamiento de semen y asistentes para el manejo de los animales. Año 2001: En la estación reproductiva (otoño, mayo HS), ovejas adultas Merino se distribuyeron al azar en dos grupos según los tratamientos que se detallan: Grupo A (IA post detección de estro): Un grupo de 395 ovejas fue sincronizado en sus estros mediante esponjas intravaginales con progestágenos (60 mg de Acetato de Medroxiprogesterona, Lab. Syntex, Argentina) durante 14 días y una aplicación intramuscular de 100 UI de ecg (Novormon, Lab. Syntex, Argentina) al final del tratamiento progestacional. A partir del día 18 luego del retiro de las esponjas y durante 4 días, los estros retornos fueron detectados cada 12 horas mediante capones marcadores androgenizados. Se les realizaron 3 aplicaciones de 100 mg de propionato de testosterona (Testonort, Lab. Nort, Argentina) cada 7 días, coincidiendo la última aplicación con el inicio de la detección de estros. La proporción de capones en la majada fue del 8%. Machos y hembras pastorearon siempre juntos. Durante el día, pastorearon a campo. Durante la noche, permanecieron encerrados en un corral grande. El aparte de hembras marcadas se realizó dos veces por día: a la mañana (9 horas) y a la noche (18 horas). Grupo B (IA sistemática): Un grupo de 210 ovejas fue sincronizado en sus estros mediante esponjas intravaginales con progestágenos (60 mg de Acetato de Medroxiprogesterona, Lab. Syntex, Argentina) durante 14 días. Los animales se dividieron en dos subgrupos que recibieron 300 UI (n= 107) y 200 UI (n= 103) de ecg, respectivamente. Las ovejas fueron inseminadas en forma sistemática a las 60±2 horas post tratamiento progestacional. Año 2002: Se realizó IA laparoscópica en 321 ovejas. La metodología fue similar a la empleada en el grupo A en el año 2001. b) Evaluación de la calidad seminal Se empleó semen congelado de 71 carneros (5 a 11 carneros/año), pertenecientes a 20 cabañas argentinas y australianas.
CT-416 EEA Bariloche. 2002. 3 Para cada partida seminal se determinaron los siguientes valores de calidad seminal al descongelamiento: Motilidad individual progresiva: evaluación microscópica subjetiva individual del vigor de movimiento progresivo de los espermatozoides de una muestra de semen descongelado a 36 C (mímino= 0; máximo= 5). Porcentaje de espermatozoides vivos: evaluación microscópica subjetiva del porcentaje de espermatozoides vivos de una muestra de semen descongelado a 36 C. Número de espermatozoides por dosis de inseminación: concentración espermática en millones de espermatozoides totales por dosis. El recuento de espermatozoides se realizó en cámara de Neubauer. A fines de octubre se realizó el control individual de parición, con identificación de las crías y tipo de nacimiento. A partir del año 1997, a los 30 días post IA, se realizó el diagnóstico de preñez por ecografía (Aloka SSD 500, Japón) con transductor lineal de 5 MHz. RESULTADOS y DISCUSION El 86% y 93% de las ovejas manifestó celo retorno en los años 2001 y 2002, respectivamente. El 88% (2001) y 90% (2002) se concentraron entre los días 19 y 21 post retiro de las esponjas (figura 1). Figura 1: Frecuencia diaria de ovejas en celo retorno post tratamiento progestacional (años 2001 y 2002) Los parámetros de calidad seminal de las partidas de semen al descongelamiento presentaron los siguientes valores mínimos y máximos: Motilidad individual progresiva: 2-5. Porcentaje de espermatozoides vivos: 15-75%. Nú mero de espermatozoides totales por dosis de inseminación: 60-260 millones.
CT-416 EEA Bariloche. 2002. 4 En los años 1991, 1993 y 2001 se presentó un 10% de las partidas seminales por debajo de los valores mínimos de referencia de aceptación (Corteel, 1981), en el año 1999, un 20% y en el año 2000, un 40%. Estas partidas de semen igualmente se utilizaron en la inseminación artificial. El porcentaje medio de parición de 6015 ovejas inseminadas en 11 años fue del 49% (tabla 1). Tabla 1. Eficiencia reproductiva anual de la inseminación artificial por laparoscopía con semen congelado en ovejas Meríno. Año Dosis ecg Hembras insemin Hembras paridas Parición (UI) (n) (n) (%) 1991 200 538 234 43 1993 200 568 305 54 1994 200 564 257 46 1995 200 588 247 42 1996 300 696 332 48 1997 300 585 371 63 1998 300 645 269 42 1999 300 611 304 50 2000 300 294 94 32 2001 200 107 55 51 2001 300 103 38 37 2001* -- 395 257 65 2002* -- 321 208 65 TOTAL 6015 2971 49 * Inseminación artificial sobre celo retorno post tratamiento progestacional Se presentó una amplia variación en el porcentaje de preñez entre años (32-65%). Esta variación estaría supeditada a la gran cantidad de factores que determinan la eficiencia reproductiva de la IA, entre ellos se destacan los fármacos utilizados en la sincronización de estros, el estado nutricional de los animales y la variabilidad en la capacidad fecundante de cada partida seminal (Evans y Maxwell, 1987; Hafez, 1996). La eficiencia reproductiva por carnero (datos no presentados) manifestó una variación del 21% al 75%. Esta variabilidad en la mayoría de los casos no se relacionó con los valores de calidad seminal post descongelamiento. Sólo en el año 2000, la presencia de varias partidas seminales por debajo de los valores mínimos de aceptación, podría haber determinado las menores tasas de preñez por carnero, registrándose el menor porcentaje anual promedio de preñez. Las ovejas inseminadas 12 horas post detección de celo retorno, con capones androgenizados, presentaron una preñez del 65% (465 ovejas preñadas/716 inseminadas). Este valor fue superior al obtenido mediante la implementación de la IA sistemática (47%;
CT-416 EEA Bariloche. 2002. 5 2506 ovejas preñadas/5299 inseminadas). La diferencia en la tasa de preñez podría explicarse principalmente por la mayor fertilidad que presentan los estros naturales respecto a los estros sincronizados con progestágenos (Robinson, 1965; Van Der Westhuysen y Van Niekert, 1971; Salamon y Maxwell, 1995), así como al hecho de que mediante la detección de estros sólo se inseminan las ovejas en celo. En el año 2001, se registró una mayor tasa de preñez al emplear la dosis de 200 UI de ecg en relación a la dosis de 300 UI (51% y 37%, respectivamente) (P<0.05). La disminución de la eficiencia reproductiva al emplear una mayor dosis de ecg podría deberse a una alteración en la maduración final del oocito (Hill et al., 1998). La tasa de prolificidad varió entre el 100% y 120%. No se establece una relación significativa entre la prolificidad y la dosis de ecg (103% para 200 UI y 111% para 300 UI de ecg, respectivamente). CONCLUSIONES La metodología empleada para la sincronización de estros e inseminación artificial por laparoscopía con semen congelado en la central de prueba de Pilcaniyeu permitió la evaluación de carneros no contemporáneos y de diferentes orígenes. Se registró una mayor tasa de preñez mediante la inseminación artificial sobre el celo retorno de animales sincronizados hormonalmente respecto a la inseminación artificial sistemática. AGRADECIMIENTOS Al director del proyecto Dr. Mueller, J.P.; así como a la Ing. Bidinost, F. BIBLIOGRAFIA Corteel, J.M. 1981. Collection, processing and artificial insemination of goat semen. In: Goat Production. Ed. Gall, C. Academic Press. Inc., London. Pp: 171-191. Cueto, M. y Gibbons, A. 1997. Efecto de la dosis de PMSG en la inseminación artificial intrauterina sistemática o con detección de celos. ITEA. Asociación Interprofesional para el Desarrollo Agrario 18: 2. 440-442. Cueto, M.; García Vinent, J.C.; Gibbons, A.; Wolff, M.; Taddeo, H.; González, R. 1993. Efecto de la dosis de gonadotrofina de suero de yegua preñada (PMSG) y momento de inseminación artificial intrauterina con semen congelado sobre la fertilidad de oveja Merino Australiano. Rev. Arg. Prod. Anim. 13: 277-281. Evans, G.; Maxell, W.M.C. 1987. Salamon's artificial insemination in sheep and goats. Butterworths Pty. Ltd. Sydney. 189 pp. Hafez, E.S.E. 1996. Reproducción e Inseminación Artificial en Animales. Interamericana McGraw -Hill. México. 542 pp. Hill, J.R.; Thompson, J.A.; Perkins, N.R. 1998. Factors affecting pregnancy rates following laparoscopic insemination of Merino ewes under commercial conditions: a survey. Theriogenology 49: 697-709.
CT-416 EEA Bariloche. 2002. 6 Maxwell, W. 1984. Current problems and future potential of artifical insemination programms. In: Reproduction in Sheep. Eds. Lindsay, D. and Pierce, D. Canberra, A.C.T.; Australian Academy of Science and Australian Wool Corporation. Pp. 291-298. Mueller, J.P. 1991. Evaluación de carneros Merino en centro de prueba Pilcaniyeu. Comunicación Técnica Producción Animal-INTA Bariloche N 178. Mueller, J.P. 2002. Evaluación genética de carneros Merino. Informe 8, marzo 2002. INTA- MCM. Comunicación Técnica Producción Animal-INTA Bariloche N 404. Salamon, S.; Maxwell, W. 1995. Frozen storage of ram semen II. Causes of low fertility after cervical insemination and methods of improvement. Review. Anim. Reprod. Sci. 38: 1-36. Robinson, T. 1965. Used of progestagen impregnanted sponges inserted intravaginally or subcutaneously for the control of the oestrus cycle in the sheep. Nature. London 206: 39-41. Van Der Westhuysen, J.; Van Niekert, C. 1971. Synchronization of oestrus sheep early in the breeding season. The vaginal environment and fertility. S. Afr. J. Anim. Sci. 1: 58.