UNIVERSIDAD NACIONAL DE CORDOBA FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS ESCUELA DE GRADUADOS INSTITUTO DE REPRODUCCION ANIMAL CORDOBA USO DE LA GnRH EN VAQUILLONAS BRANGUS AL MOMENTO DE LA INSEMINACION EN UN PROTOCOLO CLASICO DE IATF M.V. Máximo Tomás Arzeno Trabajo Final Para optar al Título de Especialista en Reproducción Bovina Córdoba, 2012.-
INTRODUCCIÓN El principal objetivo de implementar la Inseminación Artificial en los establecimientos de cría para la explotación de carne vacuna es producir un impacto e ingreso al rodeo general de consistente y comprobada genética superior al rodeo. Teniendo en cuenta que la inseminación es una de las Biotecnologías más antiguas y la que mas crecimiento tiene en el futuro, su ejecución en forma masiva es reciente debido a la utilización de los protocolos de inseminación a tiempo fijo (I.A.T.F) (Vasconcellos et al., 1994). También ha ayudado a realizarlo en forma más masiva la posibilidad de incluir a estos protocolos la categoría de vacas con cría al pie, que años anteriores solamente se podía realizar únicamente en vaquillonas o vacas secas.- Durante los últimos años se ha producido un gran avance en el desarrollo de programas de inseminación artificial a tiempo fijo (I.A.T.F.), lo cual incrementó notablemente la cantidad de animales incluidos en estos programas (Bó et al., 2000a; Bó et al., 2002b; Bó et al., 2005c; Baruselli et al., 2003). Datos de análisis de resultados de programas de I.A.T.F. indican que es posible obtener porcentaje de preñez promedio del 50% a primo inseminación, tanto en vacas con cría al pie como en vaquillonas Bos Taurus de dos años de edad (Cutaia et al., 2003a, Cutaia et al., 2007b). Sin embargo, los resultados de preñez obtenidos en vaquillonas han sido más inconsistentes e impredecibles, sobre todo en vaquillonas cebú o cruza cebú y en vaquillonas Bos Taurus de 15 meses de edad.- El índice de preñez de los protocolos de I.A.T.F. tiene una incidencia directa sobre el resultado económico de los programas. Inciden sobre los porcentajes de preñez variables como: la selección de los animales para incluir a estos protocolos, sanidad, manejo y nutrición de los mismos. También podríamos incluir la estructura y organización del equipo de trabajo haciendo mucho hincapié en la experiencia y habilidad de los técnicos. La inversión de lo que sería honorarios, drogas y material descartable tiene relativamente baja incidencia en el costo total de un programa de inseminación pero si una elevada relevancia en los resultados del mismo.- El desafío de estos momentos es intentar aumentar las tasas de preñez de protocolos clásicos de I.A.T.F. con el uso de dispositivos intravaginales impregnados de progestágenos, benzoato de estradiol y prostaglandina PGF e inseminación a las 54 hs. de retirado el dispositivo. Basados en estos protocolos y mediante la Página 2
utilización de distintas hormonas como en este caso la GnRH al momento de la inseminación, se plantea el desafío de lograr incrementar los promedios de preñez.- La GnRH sintética estuvo disponible en la década de 1970 como tratamiento para quistes foliculares (Drost ythatcher, 1992). En bovinos con un folículo dominante en crecimiento (al menos 10 mm en diámetro), el tratamiento con GnRH induce la ovulación con la emergencia de una nueva onda folicular aproximadamente dos días después del tratamiento (Thatcher et al., 1993a, 1996b; Pursley et al., 1995; Martinez et al., 1999).- De acuerdo a todos estos conceptos citados anteriormente y teniendo en cuenta otras variables como vía de aplicación, absorción, vida media, metabolismo que ya han sido analizados y estudiados en distintos trabajos, podríamos decir que para enfrentar los desafíos presentados se tienen las herramientas técnicas necesarias.- Hipótesis Con la aplicación de la GnRH en el momento de la inseminación artificial se podría inducir la ovulación en vaquillonas que no la harían o lo harían más tarde. Por ende se tendría una mayor sincronía de la ovulación y un mayor porcentaje de preñez total.- Objetivo Evaluar el efecto de la aplicación de GnRH al momento de la Inseminación Artificial (54 hs. de retirado el dispositivo intravaginal) en un protocolo clásico de I.A.T.F con dispositivos intravaginales.- MATERIALES Y MÉTODOS Ubicación del establecimiento: El trabajo se realizó en un establecimiento ubicado sobre la ruta provincial n 52 (Juana Azurduy) a 50Km. de la cuidad de Las Lajitas, provincia de Salta, departamento de Anta, a 250 km. de la cuidad de Salta, es un campo mixto de 6.000 hectáreas, donde se realiza ganadería y agricultura a secano y con riego. Los animales están en potreros con desmonte agrícola de más de 5 años, bajo una implantación de gatton panic con cortinas de monte de 100 metros Página 3
de ancho y con potreros de 250 has. con tanques australianos con perforaciones de aproximadamente 100 metros donde tiene un promedio anual de lluvias de 600 mm.- Lote de Vaquillonas: Un rodeo general de vaquillonas de raza Brangus, de 24 meses de edad y con un promedio de kilos mayor 300 Kg. por animal. Las vaquillonas que fueron seleccionadas se encontraban con una Condición Corporal entre 5 y 7 utilizando la escala del 1 al 9 y de acuerdo al Score Genital de Andersen con clasificación de 1 al 5, únicamente se incluyeron al protocolo de inseminación las que se encontraban entre 4 y 5 de la escala antes mencionada.- Métodos de Sincronización: El protocolo de sincronización de IATF son los clásicos con dispositivos de diferentes marcas de Syntex (DIB 0.5g.) y Biogénesis- Bago (Cronipres M-24, con 558mg.), colocados el día 0 con la inyección de 2 mg.de Benzoato de Estradiol (Bioestrogen, Biogénesis-Bago) y (Benzoato de estradiol, Syntex) y sacados el día 8 con la aplicación de Prostaglandina D-Cloprostenol (Enzaprost D-C, Biogénesis-Bago) y (Ciclase DL, Syntex) y el día 9 se coloca una inyección de 1 mg.de Benzoato de Estradiol (Bioestrogen, Biogénesis-Bago) y (Benzoato de estradiol, Syntex) respectivamente, siempre respetando el mismo laboratorio.- La inseminación artificial se ejecutó en un lapso de 53 hs. y 55 hs. de retirado el dispositivo. - Tratamientos: Al momento de la Inseminación Artificial los animales fueron divididos en dos grupos en forma aleatoria: el grupo de tratamiento recibió la aplicación de 2ml.de GnRh (Gonadorelina 0, 005mg., Ovarelin, de Laboratorio Vetanco) vía intramuscular (I.M.) y el grupo control sin la aplicación de ninguna inyección.- Toros: El semen que se utilizó para la Inseminación Artificial fue de dos toros de la raza Brangus uno negro Yas y otro colorado Don Ciríaco, ambos aprobados para el uso en vaquillonas. Las pajuelas de dicho semen fueron revisadas y aprobadas a la prueba de la termo resistencia (TTR).- Inseminador: Para un mejor manejo de la hacienda y de los tiempos para la I.A.T.F y fundamentalmente para que sea el mismo Inseminador los trabajos se dividieron en dos lotes.- Página 4
Diagnóstico: El diagnóstico de preñez se realizó por ultrasonografía transrectal (Chison 500 VET con una sonda lineal de 5 MHz) a los 35 días y por medio de tacto rectal a los 60 días post-inseminación respectivamente.- Análisis estadísticos Para analizar los datos se utilizó el software de estadística Infostat de la Universidad Nacional de Córdoba. Para establecer las diferencias entre el lote tratado y el lote control se utilizó la prueba de Chi cuadrado.- RESULTADOS Resultados generales El porcentaje total de vaquillonas inseminadas que resultaron preñadas es del 42,54% (97/228), que podemos observar en el gráfico n 1. En el caso de aquellas inseminadas en el grupo GnRH el porcentaje de preñez fue del 43,54 % (54/124) y para las inseminadas en el grupo Control el porcentaje de preñez fue del 41,34% (43/104).- Grafico n 1: Porcentaje de preñez.- En la tabla n 1 y en el gráfico n 2 se dividen las vaquillonas inseminadas en dos grupos: el grupo de tratamiento donde se aplicó la dosis de GnRH al momento de la inseminación y el grupo control con su respectivo porcentaje de preñez.- Página 5
Tabla n 1: Relación del porcentaje de preñez respecto del uso de la GnRH.- GnRH Con Sin Total Condición Preñada Recuento 54 43 97 % 55.7% 44.3% 100.0% Vacia Recuento 70 61 131 % 53.4% 46.6% 100.0% Total Recuento 124 104 228 % 54.4% 45.6% 100.0% Se sometió a una prueba estadística de Chi cuadrado para establecer la relación entre la droga y la condición, obteniéndose que la aplicación de la droga es independiente de la condición de preñez obtenida (χ2= 0,112; p=0,738).- Grafico n 2: Porcentaje de preñez y el uso de la GnRH.- Resultados por laboratorios En la Tabla n 2 y Gráfico n 2 se observan los protocolos de acuerdo a cada Laboratorio, con el uso de la GnRH y la frecuencia en su condición de vacías y preñadas. No existen diferencias entre los dos dispositivos utilizados en estos protocolos (χ 2 = 0,504; p=0,478).- Página 6
Tabla n 2: Relación entre laboratorio del Dispositivo intravaginal y el uso de la GnRH.- GnRH Con Sin Total LABORATORIO BIO-BAGÓ Recuento 64 52 116 % 55.2% 44.8% 100.0% SYNTEX Recuento 60 52 112 % 53.6% 46.4% 100.0% Total Recuento 124 104 228 % 54.4% 45.6% 100.0% Gráfico n 2: Relación entre laboratorio del Dispositivo intravaginal y condición.- Resultados por toros En la tabla n 3 y en los gráficos n 3 y n 4 se muestran los porcentajes de preñez de acuerdo al uso de cada toro. No hubo diferencias significativas entre los mismos (χ 2 = 1,023; p=0,599).- Tabla n 3: Relación entre el Toro utilizado, uso de la GnRH y porcentaje de preñez.- CANTIDAD Preñada Vacia Total TORO Don Ciriaco Recuento 44 64 108 % 40.7% 59.2% 100.0% Yas Recuento 53 67 120 % 44.2% 55.8% 100.0% Total Recuento 97 131 228 % 42.5% 57.5% 100.0% Página 7
Gráfico n 3: Porcentaje de Preñez del toro Don Ciriaco.- Gráfico n 4: Porcentaje de Preñez del toro Yas.- Distintos trabajos sustituyeron el benzoato de estradiol a las 24 hs de retirado el dispositivo por GnRH a las 48 hs en el momento de la inseminación incluyendo distintas dosis de análogos de GnRH sin tener diferencias significativas (Menchaca et al., 2007ª, Menchaca et al., 2007b; De Nava et al., 2009). De la misma manera se sustituyo el cipionato de estradiol al momento de extraer el dispositivo obteniendo el mismo resultado. Dichos trabajos se repitieron tanto en vacas como en vaquillonas y hasta en algunos detectando celos (Callejas et al., 2009; Vater et al., 2009).- CONCLUSIONES Evaluando los dos grupos mencionados no se encuentran diferencias estadísticamente significativas ni comercialmente relevantes. También se calculó la incidencia de los diferentes dispositivos utilizados y los toros asignados, destacando, que tampoco se encontró diferencias significativas.- Página 8
Así mismo, se cree que otros estudios deberían ser realizados evaluando la aplicación de GnRH, fundamentalmente, en diferentes momentos previos a la inseminación artificial para verificar el efecto en la tasa de preñez lograda y se debería además aumentar el tamaño de la muestra.- BIBLIOGRAFÍA Baruselli, P. S.; Marques, M. O.; Nasser, L. F; Reis, E. L. y Bo, G. A. 2003. Effect of ecg on pregnancy rates of lactating zebu beef cows treated with cidr b devices for timed artificial insemination. Theoriogenology 59(1): 214.- Bó, G.A.; Medina, M.; Tegli, J.C.; Costamagna, A. y Brogliatti, G.M. 2000. Fixed-time artificial insemination in CIDR-B treated cows induced to ovulate with Estradiol benzoate or GnRH. Proc. 14 th. International Congress on Animal Reproduction (ICAR), Stockholm, Sweden; 14: 2-45.- Bó, G.A.y Baruselli, P.S. Programas de Inseminación a Tiempo Fijo en el Ganado Bovino en Regiones Subtropicales y Tropicales. 2002. Capítulo XXXl. En: Avances en la ganadería doble propósito, C. Gonzalez-Stagnaro, Eleazar Soto Belloso Y Lílido Ramírez Iglesia (Editores); Fundación Girarz, Maracaibo, Venezuela; 499-514.- Bó, G.A; Cutaia, L.; Chesta, P.; Balla, E.; Pincinato, D.; Perez, L.; Marana, D.; Moreno; D.; Veneranda; G.; Mapletoft, R.J.; Baruselli, P.S. 2005. Aplication of fixed-time arficial insemination and embryo transfer programs in beef cattle operations. In Proceedings of the Joint Convention of AETA y CETA, Minneapolis, MN, USA, Savory. IL, AETA pp 37-59.- Callejas, S.; De Dominicis, O.; Madero, S.; Cantallops, F.; Catalano, R. y Daglio, C. 2009. Control del ciclo estral en vaquillona Angus con un dispositivo intravaginal con progesterona administrando cipionato de estradiol al retiro y/o GnRH en la I.A.T.F. VIII Simposio Internacional de Reproducción Animal, IRAC, Córdoba; CD pdf6.- Cutaia, L.; Tribulo, R.; Moreno, D. y Bo, G. A. 2003. Pregnancy rates in lactating beef cows treated with progesterone releasing devices, estradiol benzoate and equine chorionic gonadotropin (ecg). Theriogenolgy; 59:216.- Cutaia, L.; Ramos, M.; Castilla, F.; Bó, G.A. 2007. Efecto de la utilización de Estradiol o de GnRH y de la aplicación de PGF en Vaquillonas Brangus tratadas con dispositivos intravaginales con P4 sobre los porcentajes de preñez a la I.A.T.F. VII Simposio Internacional de Reproducción Animal, IRAC, Córdoba; 255.- De Nava,G.; Rodríguez Sabarrós, M.; Corti, M; Tutt, D.;Martínez, M.F. 2009. Efecto de diferentes fuentes de progesterona y análogos de GnRH sobre la fertilidad de vaquillonas en un programa de inseminación a tiempo fijo. VIII Simposio Internacional de Reproducción Animal, IRAC, Córdoba; CD pdf19.- Página 9
Drost, M.; Thatcher; W.W. 1992. Application of gonadotrophin releasing hormone as a therapeutic agent in animal reproduction. Animal Reproduction Sciences, 28: 11-19.- Martinez, M.F.; Kastelic, J.P.; Adams, G.P.; Cook, R.B.; Mapletoft, R.J. 1999. Synchronization of ovulation for fixed-time insemination in heifers. Theriogenology, 51: 412.- Menchaca, A.; Guzman Lopez. 2007. Tasa de preñez con la administración de GnRH 48 Hs. luego de un tratamiento con estradiol, progesterona y ecg en vaquillonas de dos años. VII Simposio Internacional de Reproducción Animal, IRAC, Córdoba; 259.- Menchaca,A.; Vilariño,M.; López, G.;Martínez-Cal,H.; Marquizá, L; Rivero, G.; De Castro; T. 2009.La administración de Cipionato de Estradiol al retiro del Dib ó GnrH 48 hs. más tarde resultan en similares tasas de preñez con I.A.T.F.en vaquillonas de carne. VIII Simposio Internacional de Reproducción Animal, IRAC, Córdoba; CD pdf35.- Menchaca, A.; Vilariño, M.; Bonino, R.; Peñagaricano, A.; López, G.;De Castro, T. 2009. Tasa de preñez con 50 vs. 25 μg de Lecirelina administrada 48 hs luego de retirar el Dib en tratamientos de inducción de la ovulación en vaquillonas en anestro. VIII Simposio Internacional de Reproducción Animal, IRAC, Córdoba; CD pdf36.- Pursley, J.R.; Mee, M.O.; Wiltbank, M.C. 1995. Synchronization of ovulation in dairy cows using PGF2a and GnRH. Theriogenology, 44: 915-923.- Stahringer, R.C.; Vispo, P.E.; Prieto, P.N. 2009. Uso de ecg o GnRH en protocolos de inseminación artificial a tiempo fijo en vaquillas y vacas secas cruza cebú. VIII Simposio Internacional de Reproducción Animal, IRAC, Córdoba; CD pdf50.- Thatcher, W.W.; Drost, M.; Savio, J.D., Macmillan, K.L.; Entwistle; K.W.; Schmith, E.J.; De la Sota, R.L.; Morris; G.R. 1993. New clinical uses of GnRH and its analogues in cattle. Animal Reproduction Science; 33: 27-49.- Thatcher, W.W.; Schmitt, E.J.P.; De la Sota, R.L.; Burke, J.; Risco, C.; Staples, C.R.; and Drost, M. 1996. Sincronización del estro en rodeos lecheros: manejo del desarrollo folicular con GnRH, inseminación a tiempo fijo, conceptos de sincronización. II Simposio Internacional de Reproducción Animal, IRAC, Carlos Paz, Córdoba; 109-130.- Vaca, R.J.A.; Prando, A.; Baldo, A.; De la Sota, R.L. 2007. Tasa de preñez luego de la utilización de Benzoato de Estradiol 24 horas antes o GnRH en el momento de la I.A.T.F. en vacas multíparas para carne.. VII Simposio Internacional de Reproducción Animal, IRAC, Córdoba; 268.- Página 10
Vasconcellos, J.L.M.; Prusley, J.R.; Wiltbank, M.L. 1994. Effects of Syncro-Mate-B combined with GnRH on follicular dynamics and time of ovulation. Journal Animal Science; 72 (supplement 1):174 abstract.- Vater, A.; Rodríguez Aguilar, S.; Otero Illia, M; Cabodevila, J. y Callejas, S. 2009. Efecto de la ecg sobre el porcentaje de preñez en vacas con cría sincronizadas con un dispositivo intravaginal con progesterona, Cipionato de Estradiol al retiro y GnRH en la I.A.T.F. VIII Simposio Internacional de Reproducción Animal, IRAC, Córdoba; CD pdf54.- Página 11