MICROSCOPIO ELECTRONICO DE TRANSMISION

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Transcripción:

MICROSCOPIO ELECTRONICO DE TRANSMISION Alberts et al., 2002

MEGACARIOCITO QUE MUESTRA LA ESTRUCTURA FINA DE UNA CELULA EUCARIÓTICA Citoplasma -Fijación con glutaraldehído -Post fijación tetróxido de osmio -Embebido en resina Epoxy -Sección ultrafina: 50-60 nm -Tinción con metales de alto número atómico Núcleo Rhodin, 1963

TROZO DE UN MUSCULO DE LA VOLACION DE INSECTO PREPARADO POR CONGELACION-FRACTURA Y GRABADO Filamentos de miosina, actina y sitios de interacción Alberts et al., 2008

MICROSCOPIO ELECTRONICO DE BARRIDO Alberts et al., 2002

MICROFOTOGRAFIAS ELECTRONICAS DE BARRIDO DE CELULAS EN CULTIVO -Fijación glutaraldehído -Postfijación tetróxido de osmio -Secado al punto crítico de CO2 -Sombreado con oro Kessel y Shih, 1976

MICROFOTOGRAFIA ELECTRONICA DE BARRIDO DE LA BLASTULA DEL PEJERREY Vila y Fernandez, 1990

SEPARACION DE MOLECULAS (PROTEINAS) POR CROMATOGRAFRIA DE COLUMNA Matriz solida de celulosa u otros polimeros en un solvente Alberts et al., 2002 Transporte de diferentes proteinas a distinta velocidad

MATRICES PARA CROMATOGRAFIA Purificación de proteínas Derivados de celulosa Dextrano, Agarosa Acril amida Polisacáridos Cromatografía de intercambio iónico Alberts et al., 2002 Cromatografía de filtración de gel Cromatografía de afinidad

ELECTROFORESIS EN GEL DE POLIACRILAMIDA SDS-PAGE Desnaturación, unión al detergente y migración por peso molecular Alberts et al., 2002 GEL SDS (10 μg) Carril 1: Proteína total Carriles 2-5: Purificaciones sucesivas

ELECTROFORESIS BIDIMENSIONAL Proteínas de Escherichia coli 1.Separación por enfoque isoléctrico 2. Migración en SDS Separación por peso molecular Alberts et al, 2002

ELECTROFORESIS BIDIMENSIONAL Y WESTERN BLOT GEL DE SDS TRANSFERENCIA A NITROCELULOSA PROTEINAS DE CELULAS DE LA PLANTA DEL TABACO EN DIVISION PROTEINAS FOSFORILADAS EN TREONINA DURANTE LA MITOSIS Alberts et al., 2002

SINTESIS DE cdna Híbridación para construir partidor de poli T Copia del RNAm con Transcriptasa reversa Degradación del RNA con RNAasa H Síntesis de cadena complementaria de DNA con DNA polimerasa Síntesis de un partidor en 5 para la polimerización de DNA Doble hélice híbrida Permanencia de un partidor de RNA en 5 Sintesis de una doble hélice de cdna Alberts et al., 2002

INSERCION DE DNA CLONADO EN UN PLASMIDIO BACTERIAL Alberts et al., 2002

AMPLIFICACION DE UNA SECUENCIA DE DNA EN UN PLASMIDIO BACTERIANO Alberts et al., 2002

AMPLIFICACION IN VITRO DEL DNA POR LA TECNICA DEL PCR Alberts et al., 2002

ULTRACENTRIFUGACION Separación de componentes celulares por tamaño y densidad por fuerzas muchas veces la gravedad Cámara al vacío y a 4 C HOMOGENEIZADO Alberts et al., 2002 G x1000 x 10 min G x 20.000 x 20 min G x 80.000 x 1 h G x 150.000 x 3 h PELLET 1 Y SOBRENADANTE (Núcleos, citoesqueleto) PELLET 2 Y SOBRENADANTE (Mitocondrias, lisosomas) PELLET 3 Y SOBRENADANTE (Microsomas, vesículas) PELLET 4 (Ribosomas, virus, macromoléculas)

ORGANIZACION Y DIVERSIDAD CELULAR PROFESOR JUAN FERNANDEZ 2011

MICOPLASMA GENITALIUM MICROSCOPIA ELECTRONICA DE BARRIDO MICROSCOPIA ELECTRONICA DE TRANSMISION Alberts et al., 2002

BACTERIAS DE VARIOS GRUPOS 1.- Clostridium 2.- Staphylococcus 3., Streptococcus 4.- Escherichia coli 5.-Escherichia coli 6.- Escherichia coli Kessel y Shih, 1976

MICROFOTOGRAFIA ELECTRONICA DE TRANSMISION DE ESCHERICHIA COLI Ribosomas Nucleoide No hay membranas internas Alberts et al., 2002

ALGA AZUL-VERDE (CIANOFICEA) Tienen: -DNA disperso sin envoltura -Membrana celular y envoltura -Tilacoides para la fotosíntesis ( membranas internas?) -Ribosomas -Gránulos de pigmento Kessel y Shih, 1976

TIPOS CELULARES 1-.CELULA HEPATICA DE SALAMANDRA: Mitocondrias e inclusiones proteicas 2.- CELULA HEPATICA DE CONEJO: mitocondrias e Inclusiones proteicas 3.- CELULA HEPATICA DE RATA :glicógeno y grasa 4.- CELULA EPITELIAL DE SALAMANDRA: vitelo y pigmento 5.- MACROFAGO DE RATA: fagosomas 6.- FIBROBLASTO DE RATA: mitocondrias 7.- CELULA PIGMENTARIA DE SALAMANDRA 8.-CELULA GLANDULAR DE SALAMANDRA: Complejo de Golgi Maximow y Bloom, 1957

CELULA DE UNA GLANDULA INTESTINAL -Complejos de Golgi -Secresión -Retículo endoplásmico Citoplasma Núcleo Fawcett. 1966

MUSCULO ESTRIADO: MIOFIBILLAS, RETICULO SARCOPLASMICO, MITOCONDRIAS Y GLICÓGENO

MUSCULO CARDIACO: MIOFIBRILLAS, DESMOSOMA, CONTACTO GAP, MITOCONDRIAS, RETICULO SARCOPLASMICO

Rhodin, 1963 CELULA DEL FASCICULO DE HIS DEL CORAZON DE BUEY

ESTRUCTURA DE LAS CELULAS DE LOS TUBULOS NEFRITICOS Tub.Proximal Tub. Distal Región apical Ribete en cepillo Acumulación de vesículas RegiónBasal Invaginaciones Invaginaciones profundas Rhodin, 1963

TUBULOS DEL NEFRON Polaridad Ribete en cepillo vs microvellosidades Tub. Proximal Posición del núcleo Forma de las mitocondrias Tub. Distal Rhodin, 1963

CELULA VEGETAL CON CLOROPLASTOS

HEMOPOYESIS MIELOIDE: DIFERENCIACION CELULAR Maximow y Bloom, 1957

Pennak, 1953 PROTOZOOS CILIADOS

Kessel y Shih, 1976 PROTOZOO CILIADO (Didinium)