APROXIMACIÓN AL METABOLISMO DEL DINUCLEÓTIDO DE NICOTINAMIDA Y ADENINA (NAD+) EN LEISHMANIA. APPROACH TO THE NICOTINAMIDE ADENINE DINUCLEOTIDE (NAD+) METABOLISM IN LEISHMANIA Luis E. Contreras R 1* 2 2 1. 2. RESUMEN Leishmania - - - L. braziliensis, L. major y L. amazonensis Escherichia coli - Leishmania. Palabras clave: Leishmania - 97
Revista de la Asociación Colombiana de Ciencias Biológicas ABSTRACT Leishmania - braziliensis, L. major and L. amazonensis Escherichia col Leishmania Keywords: Leishmania INTRODUCCIÓN - en Saccharomyces cerevisiae, Caenorhabditis elegans y Drosophila melanogaster (13). 98 de novo de novo
Figura1. Biosintesis del NAD + - - 1 de novo 2) Leishmania braziliensis, L. infantum y L. major Leishmania Leishmania PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES Búsqueda de Candidatos y Diseño de Primers. Leishmania - Análisis Filogenéticos. Leishmania - 99
Revista de la Asociación Colombiana de Ciencias Biológicas Parásitos y Condiciones de Cultivo. L. (L) amazonensis, L. (L) braziliensis y L. (V) major Extracción de ARN y Síntesis de ADN complementario. - LbNMNAT, LmNMNAT y LaNMNAT. LbNMNAT LmNMNAT y LaNMNAT Clonación del producto LbNMNAT. LbNMNAT Escherichia coli Extracción del Plásmido Recombinante pet100/d- Topo-LbNMNAT. Expresión e Inducción de la Proteína Recombinante LbNMNAT. E. coli 100
Análisis de la Inducción por SDS-PAGE. Análisis de la Proteína Recombinante LbNMNAT mediante Western Blot. - Determinación de la Solubilidad de la Proteína Recombinante LbNMNAT. nantes. Ensayo Enzimático Acoplado. + a NADH, RESULTADOS La NMNAT es Altamente Conservada dentro del Genero Leishmania. L. braziliensis, L. infantum y 101
Revista de la Asociación Colombiana de Ciencias Biológicas L. major Tabla 1. Similaridad entre las secuencias-candidato para la NMNAT de Leishmania. L.major L.infantum L.braziliensis - - Especie No Acceso Tipo de Secuencia Porcentaje de Identidad L.braziliensis L. infantum L.major L.infantum L.major L.braziliensis L.major L.braziliensis L.infantum Homo sapiens, Leishmania Figura 2. La NMNAT es altamente conservada dentro del género Leishmania - H. sapiens, HsNM- - - 102
Leishmania melanogaster Leishmania Trypanosoma Leishmania in silico S. cerevisiae G. lambia Leishmania. NMNAT de los parásitos. L. braziliensis y L.major Leishmania L. braziliensis, L. major y L. Infantum Viannia y Leishmania eishmaniasis 103
Revista de la Asociación Colombiana de Ciencias Biológicas Las - Especie Primer Sentido Primer Antisentido L. braziliensis L. major Leishmania sp. Figura 4. Expresión de la NMNAT en Leishmanía - 2 - - L. (V) amazonensis L. major. LaNMNAT NMNAT en L. amazonensis - MNAT. - - Expresión de la Proteína Recombinante LbNMNAT. Leishmania L. braziliensis LbNMNAT, 104
- Figura 7. Determinación de concentración optima de IPTG.- - - Figura 6. Expresión de la proteína Recombinante LbN- MNAT. - - Figura 8. Inducción de la proteína recombinante LbNM- NAT a distintos tiempos. - - 105
Revista de la Asociación Colombiana de Ciencias Biológicas Figura 9. Inducción de la proteína Recombinante LbN- MNAT durante cortos intervalos de tiempo - Detección de la Proteína Recombinante LbNMNAT mediante Western Blot. 106 Figura 10. Inducción de la proteína Recombinante LbN- MNAT mediante Western Blot - - - - E. coli Evaluación de la solubilidad de la Proteína Recombinante LbNMNAT.
Actividad Enzimatica de la Proteína Recombinante LbNMNAT. + Figura 11. Evaluación de la solubilidad de la Proteína Recombinante LbNMNAT. - - E. coli NAD + - - T [ - DISCUSION + 107
Revista de la Asociación Colombiana de Ciencias Biológicas + de novo Leishmania L. braziliensis + in silico rea- Leishmania LaNMNAT, LbNMNAT LmNMNAT NAD + in Vitro Leishmania + Leishmania 108 in vivo + entre Leishmania Leishmania Leishmania. Leishmania
- - Leishmania + - - para la LaNMNAT L. major L. amazonensis Leishmania E. coli - E. coli rne131 E. coli lacuv5 - lac. laci laco lac lacuv5 + 109
Revista de la Asociación Colombiana de Ciencias Biológicas Leishmania + BIBLIOGRAFÍA 1. Trends in Biochemical Sciences 2. - Current Opinion in Cell Biology 3. Annu. Rev. Biochem Annu. Rev. Microbiol 5. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol Trends Biochem. Sci et al Trends Pharma. et al - Science et al - 11. et alpnas 12. Annu. Rev. Biochem 13. Current Opinion in Cell Biology et al Cellular and Molecular Life Sciences 15. et al se. BBRC et al et al - 110
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