INFORME DE ESTUDIO. MATERIAL QUE PRESENTA 1 Muestra con referencia: Tecofix (Ref. interna: 025/14).

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Antonia Hernández Villalba
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INFORME DE ESTUDIO EMPRESA SOLICITANTE LAND-FIX, S.L. C/ Bruc, 21 pral.2ª 08010 BARCELONA (Barcelona) MATERIAL QUE PRESENTA 1 Muestra con referencia: Tecofix (Ref. interna: 025/14).

1 INFORME DE ESTUDIO EMPRESA SOLICITANTE LAND-FIX, S.L. C/ Bruc, 21 pral.2ª BARCELONA (Barcelona) MATERIAL QUE PRESENTA 1 Muestra con referencia: Tecofix (Ref. interna: 025/14). FECHA DE RECEPCIÓN DEL MATERIAL 3/03/14 ESTUDIO QUE SOLICITA Determinación de la Ecotoxicidad en plantas, según OCDE 208. FECHA DE INICIO 10/03/14 FECHA DE FINALIZACIÓN 31/03/14 Los resultados de este informe conciernen exclusivamente a las muestras, productos o materiales entregados al LABORATORIO e indicados en el apartado "material que presenta". La reproducción de este informe solo es autorizada si se hace en su totalidad. Este documento consta de 12 páginas de las cuales 10 son anexos. 1.12

El estudio consiste en la determinación de la inhibición de la germinación de semillas y la inhibición de la biomasa en las especies Lolium perenne, Brassica rapa y Trifolium pratense, que ha sido

2 El estudio consiste en la determinación de la inhibición de la germinación de semillas y la inhibición de la biomasa en las especies Lolium perenne, Brassica rapa y Trifolium pratense, que ha sido llevada a cabo según el MO 09 basado en el método OCDE 208 (2006) (Terrestrial Plant test: Seedling Emergence and Seedling Growth Test). Los resultados obtenidos son los siguientes: Inhibición de la Germinación CE 50 (mg/kg ss)* 21 días Muestra (Ref) L.perenne B.rapa T.pratense Tecofix >1000 >1000 >1000 Muestra (Ref) *: mg/kg suelo seco Inhibición de la Biomasa CE 50 (mg/kg ss)* 21 días L.perenne B.rapa T.pratense Tecofix >1000 >1000 >1000 Responsables del Informe Terrassa 2 de Abril de 2014 Fdo. Dra. Mª Carmen Riva Directora del CRIT (UPC) Fdo. Dra. Bettina Vallès Dirección Técnica 2.12

3 ANEXOS 3.12

4 INDICE: 1. Resumen 2. Objetivo del Estudio 3. Sustancia / Producto de Ensayo 4. Organismo de Ensayo 5. Condiciones de ensayo 6. Desarrollo del ensayo 7. Resultados 7.1. Datos Primarios 7.2. Observaciones 8. Conclusión 9. Validación 10. Referencias 4.12

5 1.-Resumen Se ha realizado el Estudio de la inhibición de la germinación y la inhibición de la biomasa en plantas de la muestra referenciada Tecofix. Para la Determinación de la inhibición de la germinación y la inhibición de la biomasa en plantas se han utilizado las especies Lolium perenne, Brassica rapa y Trifolium pratense y se ha seguido el método operativo MO 09 basado en el método OCDE 208 (2006) (Terrestrial Plant test: Seedling Emergence and Seedling Growth Test). Las especies Lolium perenne, Brassica rapa y Trifolium pratense han sido sometidas a las muestras de ensayo a las concentraciones: 0.1, 0.3, 1, 3, 10, 30, 100, 300 y 1000 mg/kg suelo seco. La duración total del ensayo ha sido de 21 días. El resultado obtenido en este ensayo nos indica que la muestra Tecofix no tiene efecto tóxico sobre la germinación en Lolium perenne, Brassico rapa y Trifolium pratense a las concentraciones ensayadas. En relación a la biomasa, tampoco se observa efecto adverso en ninguna de las 3 especies estudiadas. 2.-Objetivo del Estudio El objetivo del estudio es investigar los efectos de las muestras de ensayo en las especies Lolium perenne, Brassica rapa y Trifolium pratense a partir de los 14 días después de la germinación del 50% de los controles. 5.12

6 3.-Sustancias de ensayo Muestra con referencia: TECOFIX 4.-Organismo de ensayo Especie monocotiledónea: Lolium perenne (cv. Tove) Especies dicotiledóneas: Brassica rapa (cv. Oleifera) Trifolium pratense (cv. Marino) Procedencia: Semillas comerciales Lolium perenne: Semillas Fitó Brassica rapa: Semillas Batlle Trifolium pratense: Semillas Batlle 5.-Condiciones de ensayo Duración del ensayo: mínimo 14 días después de la germinación del 50% de los controles Descripción del diseño de ensayo: Recipientes de ensayo: macetas de plástico Volumen de cultivo utilizado: 200 g de suelo húmedo Disolución del producto de ensayo: se ha mezclado la muestra en las proporciones establecidas con el suelo artificial. Suelo artificial según las directivas OCDE con la siguiente composición: - Turba 30% - Suelo natural 70% - ph: 7,6 6.12

7 6.-Desarrollo del ensayo: Nº de concentraciones de ensayo: 9 + Control Concentraciones de ensayo: 0.1, 0.3, 1, 3, 10, 30, 100, 300 y 1000 mg/kg suelo seco. Nº de réplicas por concentración: 4 Nº de semillas por réplica: 5 Preparación de las concentraciones de ensayo: Se han preparado cada una de las concentraciones añadiendo la cantidad de muestra al suelo y se ha homogenizado. Finalmente se ha añadido la cantidad de agua necesaria para obtener la humedad adecuada y se han llenado los recipientes de ensayo. Sala de ensayo con luz y temperatura controlada. Fotoperiodo: 16 h luz/8 h oscuridad Intensidad de luz: Lux Temperatura de incubación: 22 ± 2ºC Humedad relativa: 70% 7.12

8 7.-Resultados 7.1.-Datos Primarios Número y porcentaje de semillas germinadas en el ensayo con la muestra Tecofix en relación al Control (Tablas 1, 2 y 3): Lolium perenne Concentración 4d 7d 14d 21d (mg/kg ss) Nº % Nº % Nº % Nº % Control 14: : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : :20 90 Brassica rapa Concentración 4d 7d 14d 21d (mg/kg ss) Nº % Nº % Nº % Nº % Control 19: : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : :

9 Trifolium pratense Concentración 4d 7d 14d 21d (mg/kg ss) Nº % Nº % Nº % Nº % Control 19: : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : : :20 95 Peso medio de las plantas germinadas (peso fresco de las plantas) y Porcentaje en relación al Control (Tabla 4) en el ensayo con la muestra Tecofix: Concentración L.perenne B.rapa T.pratense (mg/kg ss) mg % mg % mg % Control Valores de % negativos: biomasa superior al control 9.12

10 7.2.-Observaciones Lolium perenne: Empiezan a germinar al 4 o día. La germinación es rápida tanto en el Control como en todas las concentraciones de ensayo. No se puede deducir una Concentración Efectiva 50% (CE 50 ) en relación a la germinación para esta especie. Las plantas Control como las de las concentraciones ensayadas presentan 2 hojas largas de un color verde intenso. No se puede deducir una Concentración Efectiva 50% (CE 50 ) en relación a la biomasa para esta especie. Brassica rapa: Empiezan a germinar al 4 o día. La germinación es rápida tanto en el Control como en todas las concentraciones de ensayo. No se puede deducir una Concentración Efectiva 50% (CE 50 ) en relación a la germinación para esta especie. El aspecto de las plantas Control como el de las plantas de las concentraciones ensayadas es saludable y normal; presentan dos hojas en forma de corazón y 2 hojas bien desarrolladas alargadas. El color de las hojas es verde intenso. No se puede deducir una Concentración Efectiva 50% (CE 50 ) en relación a la biomasa para esta especie

11 Trifolium pratense: Empiezan a germinar al 4 o día. La germinación es rápida tanto en el Control como en todas las concentraciones de ensayo. No se puede deducir una Concentración Efectiva 50% (CE 50 ) en relación a la germinación de semillas para esta especie. El aspecto de las plantas Control como el de las plantas de las concentraciones ensayadas es saludable y normal, no apreciándose alteraciones en su morfología. Muestran un color verde intenso, y presentan 2 pequeñas hojas en la base y una de grande con un tallo largo. No se puede deducir una Concentración Efectiva 50% (CE 50 ) en relación a la biomasa para esta especie. 8.-Conclusión La muestra de ensayo Tecofix no parece influenciar ni en la germinación ni en la biomasa, en ninguna de las tres especies a las concentraciones estudiadas. Se observa una germinación superior al 90% de las semillas de las tres especies en todas las concentraciones ensayadas. No se observan alteraciones morfológicas en ninguna de las concentraciones de ensayo. 9.-Validación El criterio de validación para este ensayo es: - Que germinen más del 70% de las semillas. - La supervivencia de las semillas germinadas de los Controles es superior al 90% 11.12

12 10.-Referencias 1. OECD Guideline for Testing of Chemicals 208 (2006): Terrestrial Plant test: Seedling Emergence and Seedling Growth Test 2. MO 09 Test de Toxicidad de corta duración en plantas 12.12

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