Recombinación y entrecruzamiento en Sordaria fimicola. marzo 2006

Transcripción

1 Recombinación y entrecruzamiento en Sordaria fimicola N. Rodríguez marzo 2006

2 Sordaria fimicola Hongo filamentoso que pertenece a la clase Ascomycetes Como organismo experimental se utiliza para estudiar la segregación mendeliana de los genes y hacer estudios de ligamiento y recombinación genética mediante análisis de tétradastradas

3 Recombinación en Sordaria fimicola Características Ciclo de vida corto (8-10d 10días) Se cultiva con facilidad en el laboratorio Se reproduce sexualmente por medio de esporas. Su ciclo de vida prevalece en la fase haploide. El orden en que aparecen las ocho ascoesporas representa una evidencia directa del comportamiento de los cromosomas durante el proceso de meiosis.

4 Cont. Características Sordaria fimícola Las ascoesporas son uninucleadas y el fenotipo de cada una de ellas depende del genotipo de su núcleo. Los colores de las ascoesporas facilitan los estudios de recombinación. Permiten que el análisis de tétradastradas se haga mediante observación directa de las ascas.

5 Sordaria se reproduce sexualmente por medio de ascoesporas (haploides). Las ascoesporas germinan para formar las hifas (haploides y multinucleadas). Cuando las hifas de diferentes cepas hacen contacto, las células se fusionan para formar una célula con dos núcleos (heterocarión). El genotipo de esta célula es N+N. Luego de varias divisiones mitóticas ticas,, los núcleos de los heterocariones se funden para formar el cigoto (2N-diploide). El cigoto pasa por meiosis para formar cuatro células haploides. Luego pasan por mitosis para generar 8 ascoesporas.

6 Las 8 ascoesporas se encuentran en saco llamada asca. Varias de estas ascas se encuentran en una estructura llamada peritecio. Cuando madura, el peritecio libera las ascoesporas. En las ascas es que ocurre meiosis. La recombinación o entrecruzamiento ocurre en la fase de tétradas durante la profase meiótica.

7 Para observar recombinación en Sordaria, cruzamos una cepa salvaje x cepa mutante en una placa petri con medio de cultivo y se incuba de 8 a 10 días (el color de las ascoesporas de la cepa mutante es clara mientras que la cepa salvaje es oscura). Procedimiento

8 Procedimento Con un palillo de dientes se extrae una muestra (peritecios)) de la placa y se colocan sobre una laminilla.. Se añadeade una o dos gotas de agua y se coloca el cubreobjeto.. Se observa bajo microscopio compuesto.

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10 Desarrollo de las ascoesporas La fusión nuclear forma el cigoto diploide. Las primeras dos divisiones del cigoto son meióticas. Al finalizar meiosis II, se forman cuatro núcleos haploides. Luego de formarse los cuatro núcleos haploides, le sigue una división mitótica aumentando el número de núcleos a 8. Todas las divisiones ocurren en el plano del eje longitudinal del asca y por ello, el orden de las ascoesporas en las ascas refleja el orden en que se segregan los cromosomas durante las divisiones meióticas.

11 Recombinación en detalle Los cromosomas homólogos se segregan en anafase I (meiosis I). Si no ocurre recombinación entre el gen y el centrómero mero,, el producto final son ascas con arreglo 4:4. (cuatro ascoesporas oscuras: cuatro claras y viceversa). Si la recombinación ocurre entre las cromátidas 2 3 y 1 4, entonces el producto final serán ascas con arreglo 2:2:2:2. Si la recombinación ocurre entre las cromátidas 1-33 y 2-4, entonces el producto final serán ascas con arreglo 2:4:2

12 Mapa genético La probabilidad de recombinación entre dos genes en un mismo cromosoma aumenta si la distancia entre éstos es mayor. El mapa genético es una representación de las posiciones relativas y las distancias de los genes en cada grupo de ligamiento.. Las distancias son equivalentes a los porcientos de recombinación o de entrecruzamiento. 1% = 1unidad de distancia

13 Frecuencia de recombinación El porcentaje de ascas mostrando segregación en la segunda división meiótica es una medida del grado de ligamiento que hay entre el gen y su centrómero mero. La mitad de las ascoesporas de un asca son de tipo recombinante, la frecuencia de entrecruzamiento es igual a la mitad de la frecuencia de las ascas que expresan segregación en el segunda división meiótica tica. Frecuencia de recombinación= % de % de ascas mii 2