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Transcripción

1 1 Unidad Curricular: Virología y Micología Veterinaria TRABAJO PRÁCTICO No. 6 MICOLOGÍA OBJETIVO 1. Estudiar las características morfológicas de los hongos y su crecimiento en los medios de cultivo. GENERALIDADES La micología como rama de la microbiología, se encarga del estudio de los hongos (del Griego, mykes: hongo, seta; Latín, fungi: hongos). Son organismos eucariotas macroscópicos o microscópicos, unicelulares o pluricelulares ampliamente distribuidos en el aire, agua y tierra, que pueden desarrollarse bajo amplias condiciones de temperatura y humedad; constituyen un reino, Hongo. Dentro de las características propias de los hongos encontramos que poseen una estructura somática representada por hifas y la presencia transitoria de células binucleadas haploides, cuyos núcleos son sexualmente opuestos. Muchos hongos cuando son cultivados en medios de cultivos y condiciones adecuados desarrollan largos filamentos que se ramifican, cada filamento se denomina hifa. Las hifas pueden estar divididas por septos transversos constituyendo cadenas de células a las cuales se les denomina hifas septadas o tabicadas. Cuando no presentan septos se denominan hifas no septadas, no tabicadas o cenocíticas. El conjunto de hifas entrecruzadas constituyen el micelio, de acuerdo a la ubicación de las hifas el micelio puede denominarse como micelio aéreo o micelio vegetativo o de sustrato. La parte del crecimiento que se desarrolla sobre la superficie del sustrato (medio de cultivo, tejido, etc.) constituye el micelio aéreo, que da lugar a cuerpos reproductores o esporas. La parte que penetra en el sustrato se denomina micelio vegetativo o de sustrato y guarda relación con la asimilación de nutrientes. Este tipo de crecimiento con formación de micelio se observa en aquellos hongos que se desarrollan como mohos. La reproducción se efectúa por formación de esporas, las cuales al germinar originan filamentos ramificados, y según su origen pueden ser: esporangiosporas, conidiosporas, artrosporas, blastosporas, clamidosporas y zygosporas. Existe otro grupo de hongos denominados levaduras, que realizan el proceso de la reproducción

2 2 por gemación, la cual es una forma de reproducción asexual sencilla en la que se forma una yema o brote en la superficie de la célula madre; a partir de este brote se forma una nueva levadura que eventualmente se liberará de la célula que le dio origen. Las levaduras son microorganismos unicelulares de forma esférica u ovalada, la mayoría aparecen como individuos aislados, aunque las células hijas formadas por gemación pueden quedar unidas a la madre por cierto tiempo. Algunas especies de levaduras desarrollan formas filamentosas semejantes a un micelio llamadas pseudomicelio, se denomina de esta manera ya que no se forma un micelio verdadero. I. LEVADURAS 1. Estudio morfológico de las levaduras (Cándida albicans, Sacharomyces cereviseae) a) Observar los preparados coloreados con Gram, en fresco con solución de lugol y los preparados con pseudomicelio. b) Dibujar y anotar las características morfológicas. 2. Crecimiento en medios de cultivo Las levaduras en general se pueden cultivar en los medios de: Sabouraud y Agar sangre. En estos medios las colonias de levaduras se presentan cremosas, húmedas y de mediano tamaño, apreciándose como característica un olor aromático. Malazzesia II. CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS DE LOS MOHOS 1. Hifas a) Preparados microscópicos donde se observan hifas septadas o tabicadas, hifas rectas, curvas. 2. Micelio a) Preparados con micelio. 3. Esporangiosporas Son esporas que se originan en el interior de un receptáculo o capsula llamado esporangio, el cual se forma en el extremo de una hifa fértil. La hifa que termina en la formación de un esporangio se

3 3 denomina esporangióforo. Las esporangiosporas están contenidas dentro del esporangio hasta llegar a su madurez, en este momento el esporangio se rompe dejándolas libres y permitiendo su diseminación, Esporangio o receptáculo Esporangiosporas Esporangióforo Esporangiosporas libres ej. Rhizopus sp.; Mucor sp.; Absidia sp. a) Preparado donde se enfoca el esporangio y las esporas en libertad. 4. Conidiosporas Son esporas que se desarrollan en los extremos de hifas diferenciadas para este fin, denominadas conidióforos. No están encerradas en cápsulas o receptáculos sino que se producen libres por segmentación de las puntas de los conidióforos, formando cadenas de conidias. Las conidias pueden ser pequeñas y unicelulares (microconidias) y las grandes a menudo pluricelulares (macroconidias). Conidias Conidióforo Microconidias Macroconidia. Microsporun canis a) Preparados microscópicos con conidióforos, microconidias y macroconidias.

4 4 5. Artrosporas No son verdaderas esporas. Se originan por segmentación de las hifas en células rectangulares de paredes gruesas, cada unidad es fértil, ej. Geotricum sp. a) Preparado microscópico con Geotricum sp. 6. Blastosporas A lo largo de las hifas se desarrollan brotes de células que se asemejan a las levaduras, ej. Trichosporum sp. a) Preparado microscópico en fresco mostrando blastosporas. 7. Clamidosporas Las esporas que se forman en el trayecto o al final de las hifas aumentan de tamaño y se rodean de paredes gruesas, siendo resistentes a las condiciones ambientales desfavorables. La germinación se presenta cuando las condiciones se hacen óptimas para el desarrollo del crecimiento vegetativo, ej. Cándida albicans a) Preparado microscópico del hongo. Pseudomicelio. Candida.

5 5 8. Zygosporas - Ascosporas Algunos hongos se reproducen por fusión de dos núcleos formándose esporas sexuales llamadas "zygosporas", las cuales al madurar se separan de la madre y germinan como cualquier otra espora dando origen a un nuevo micelio. Los ascomicetos y también las levaduras forman esporas sexuales llamadas "ascosporas" por estar contenidas dentro de un saco o asco. Es característico de algunas levaduras, donde se fusionan dos células contiguas por medio de minúsculas prolongaciones, el núcleo se une y el micelio único resultante origina 8 núcleos hijos que forman las ascosporas quedando dentro de una célula que las contiene, que es el asco. a) Preparado microscópico con zygosporas. b) Preparado microscópico con ascosporas. c) Observar y dibujar. Zygosporas. Rhizopus nigricans III. CARACTERÍSTICAS DE CRECIMIENTO DE LOS MOHOS La mayor parte de los hongos crecen rápidamente pero las formas patógenas, lo hacen con mayor lentitud, necesitando hasta dos o tres semanas de incubación. En general no tienen necesidades nutritivas excepcionales y crecen con facilidad en todos los medios bacteriológicos usuales en especial con adición de azúcar y un ph de 5,6. Desarrollan bien en el medio de Czapek-Dox (medio sintético de dextrosa y nitrato) y en el medio de Sabouraud, agar con peptona y maltosa (o glucosa) que es el más usado en micología médica para aislar y conservar cultivos. El crecimiento de los mohos en medio de cultivo sólido se caracteriza por presentar un micelio aéreo algodonoso que puede tomar, según el hongo, diversas tonalidades de color. Este crecimiento se observa en la superficie del medio de cultivo. Por el reverso de la placa puede observarse un crecimiento en profundidad, el cual constituye el micelio vegetativo que al igual que el micelio aéreo toma diversos tonos de color. Estas características de crecimiento y de color del micelio, permiten la orientación para su identificación, sumadas a otras características como por ejemplo las microscópicas. a) Cultivo de varios hongos donde pueden observarse las características señaladas. b) Estudio y dibujo de los crecimientos observados.

6 6 IV. ESTUDIO MACROSCÓPICO Y MICROSCÓPICO DEL ALGUNOS HONGOS CONTAMINANTES 1. Aspergillus sp. En el género Aspergillus encontramos numerosas especies que se encuentran muy difundidas en la naturaleza, muy particularmente en el suelo y vegetales en estado de putrefacción; siendo las esporas muy abundantes en el aire por su poco peso. Es un hongo bastante contaminante en los laboratorios, y varias especies son productoras de micotoxinas. Aspergillus 1.1. Preparado microscópico con Aspergillus sp. a) Observación y dibujo del preparado Cultivo de Aspergillus sp. en medio de agar Sabouraud en placa. a) Observación microscópica y dibujo del crecimiento. 2. Mucor sp. Es un hongo contaminante, pero sin embargo, se ha podido aislar de tejido de animales infectados, encontrándose en el tejido placentario de bovino, tracto respiratorio de las aves, etc. Es un hongo que se encuentra muy difundido en la naturaleza Preparado microscópico con Mucor sp. a) Observación y dibujo del preparado. Esporangios. Mucor 3. Penicillium sp. El género Penicillium presenta numerosas especies, algunas de las cuales pueden producir afecciones pulmonares. Otras especies pueden elaborar como producto del metabolismo celular sustancias activas como la penicilina, así como también existen especies de Penicillium contaminantes

7 7 ambientales y productoras de micotoxinas Preparado microscópico con Penicillium sp. a) Observación y dibujo del preparado Cultivo de Penicillium sp. en agar sabouraud. a) Estudio macroscópico del crecimiento. b) Observación y dibujo. Estructura de Penicillium V. ELABORACION DE MICROCULTIVO O CULTIVO EN PORTAOBJETO. Es un método fácil de cultivar hongos en lamina portaobjeto, que permite la observación de las características microscópicas necesarias para la identificación definitiva de algunos hongos o para preparar montajes semipermanentes para usar en la enseñanza, PROCEDIMIENTO 1. De manera estéril, se corta un pequeño trozo de aproximadamente 4mm de profundidad de agar Sabouraud, agar dextrosa papa o agar harina de maíz.. 2. En el fondo de una placa de Petri se agrega agua bidestilada estéril (3ml aprox.) y se colocan dos varillas de vidrio dentro de la placa. 3. Sobre las varillas de vidrio se monta una lámina portaobjetos estéril. El trozo de agar previamente cortado es colocado sobre esta lámina estéril. 4. Con una aguja estéril se toma una porción pequeña de la colonia del hongo que se desea estudiar y se inocula en el trozo de agar. Luego de la inoculación se le coloca una lámina cubreobjetos sobre el agar inoculado. 5. Se incuba a temperatura ambiente. La colonia crecerá por debajo de la superficie del cubreobjetos. 6. Cuando se evidencia un crecimiento suficiente, se retira cuidadosamente el cubreobjetos con

8 8 una pinza estéril y se coloca sobre una nueva lamina portaobjetos que contiene una gota de azul de lactofenol y se observa al microscopio. 7. El portaobjetos original también sirve para realizar la observación. Se retira el bloque de agar donde se cultivo el hongo y se agrega una gota de azul de lactofenol en el área del portaobjetos donde el trozo de agar estuvo en contacto.