PRACTICA N O 3 OBTENCION DE MITOSIS EN TEJIDO VEGETAL INDICE MITOTICO INDICE DE FASE

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1 PRACTICA N O 3 OBTENCION DE MITOSIS EN TEJIDO VEGETAL INDICE MITOTICO INDICE DE FASE 1. INTRODUCCION En biología, la mitosis es un proceso que ocurre en el núcleo de las células eucarióticas y que precede inmediatamente a la división celular, consistente en el reparto equitativo del material hereditario (ADN) característico. Este tipo de división ocurre en las células somáticas y normalmente concluye con la formación de dos núcleos separados (cariocinesis), seguido de la partición del citoplasma (citocinesis), para formar dos células hijas. La mitosis completa, que produce células genéticamente idénticas, es el fundamento del crecimiento, de la reparación tisular y de la reproducción asexual. La otra forma de división del material genético de un núcleo se denomina meiosis y es un proceso que, aunque comparte mecanismos con la mitosis, no debe confundirse con ella ya que es propio de la división celular de los gametos. Produce células genéticamente distintas y, combinada con la fecundación, es el fundamento de la reproducción sexual y la variabilidad genética. 2. OBJETIVOS Adquirir capacidad para realizar un montaje de tejido vegetal en división (meristemático) Distinguir las etapas de la mitosis, así como los núcleos en interfase. Comparar las mitosis en tejido meristemático de cebolla (Allium cepa), de las mitosis humanas. Calcularán los índices mitóticos y de fase en la preparación de cultivos humanos entregados durante la práctica. 3. MARCO TEORICO En las células eucariotas existen dos procesos por los cuales el material genético se reparte en las células hijas o descendientes, uno es la simple división de la célula en dos, en este proceso cada una de las dos células hijas recibe una copia exacta del material genético de la célula parenteral. En el otro proceso de reparto, el material genético debe reducirse a la mitad de forma precisa a fin de que la fecundación restaure el complemento diploide. La continuidad genética entre las células y entre los organismos de cualquier especie con reproducción sexual se mantiene gracias a estos dos procesos mitosis y meiosis.

2 La Mitosis se lleva a cabo en las células somáticas y da origen a células diploides (2N); las células sexuales lo hacen por el proceso de Meiosis para dar origen a células haploides (N). Muchas células presentan una alternancia continua entre la división y la nodivisión, el intervalo entre cada división mitótica se denomina interfase. El periodo de interface se divide en tres: G1 Precede a la síntesis S Periodo de síntesis (replicación del DNA) G2 Precede la Mitosis INDICES MITOTICOS Y DE FASE El índice mitótico es definido como la relación porcentual de células en mitosis con respecto al total de la población del cultivo Número de células en división IM= X 100 Número total de células El índice de fase se define como la relación porcentual de una fase de la división celular respecto a la población de células en mitosis activas. Células en metafase I.F. = X 100 Células en división 4. PRE- LABORATORIO 1. Realice un dibujo y explique la diferencia entre Haploide y diploide, Cinetocoro, centrómero, centriolo y nucléolos. Tétradas, diadas y mónadas. 2. Realice el esquema de la espermatogénesis y ovogénesis en células animales 3. Realice un dibujo del ciclo celular y ubique los principales sitios de control 4. Complete la siguiente tabla con las principales proteínas que actúan en el ciclo celular

3 Nombre de la proteína Sitio del ciclo celular donde actúa Función dentro del control del ciclo 5. LABORATORIO 5.1. MATERIALES Raíces de cebolla preparadas según procedimiento. Microscopios Láminas y Laminillas Toallas de papel Tubos de ensayo Pinzas para tubos Agujas de disección Bisturí Baker de 50 ml y 1000 ml Trípodes y mallas Solución fijadora (1 parte de ácido acético glacial: 3 partes de alcohol etílico al 95%) Ácido Clorhídrico 1N Acetoorceina 8-Hidroxiquilinona M 5.2. PROCEDIMIENTO OBTENCIÓN DE CÉLULAS DE CEBOLLA EN DIVISIÓN Bulbos de cebolla Corte la raíz Quite la epidermis externa Sumérjalas en recipientes con agua (aproximadamente una cuarta parte) Coloque en la oscuridad por 72 horas PREPARACIÓN DE PLACAS DURANTE LA CLASE

4 Raíces de cebolla Coloque una raíz de cebolla en tubo de ensayo HCL 1 N Caliente al baño María 9 minutos 60 0 centígrados Coloque en una lámina la raíz y cortar la zona meristemática Coloque una gota de aceto orceina y a lo 3 de colocada coloque una laminilla y con el borrador de un lápiz macere Observe al microscopio 5.3. ANALISIS DE RESULTADOS (INFORME) 1. Realice un esquema de las fases de la mitosis que observo en clase. (Humanas y vegetales) y diga cuales diferencias encontró 2. Calcule el Índice mitótico e Índices de fase de las preparaciones entregadas por el docente. Lamina No Índice Mitótico: Índice de fase: Que concluye Discuta con su compañero: Observo alguna célula donde los cromosomas están bien diferenciados? Cuantos pudo contar? Cuál es el número diploide de la cebolla? Cuál es el número Haploide de hombre? 6. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS 1. Partiendo de un organismo que tiene un número haploide igual a 5 en sus células sexuales: Dibuje cada fase de la espermatogénesis Dibuje la primera profase meiótica Dibuje la segunda profase meiótica Cuantas monadas migraran a cada polo en la segunda anafase meiótica? 2. En la práctica de la cebolla Cuál es la razón por la cual se calentó al baño María con HCl? Para qué macero el tejido? Por medio de un dibujo explique cómo actúa la proteína de retinoblastoma y p53 en el control del Ciclo Celular.

5 7. BIBLIOGRAFÍA - Catálogos y fichas técnicas 2012 de las casas comerciales: Invitrogene, Promega, Biorad, Biologend, Bioline, etc. - David, L.G. Dibner, M.D.& Battery, J.F. Bassin methods in molecular biology. Elsiever Science Publishing Co. Ind. NY Perbal, B. A practical guide to molecular cloning. 2nd edition John Wiley 6 Sons, Sambrook, J. et al Molecular cloning: a Laboratory Manual, 2 nd edition, Col Spring. Laboratory, Cold Spring Harbor, New York. - Catálogos de los Kit de Promega, Corpogen, Dnazol y Probes 8. AUTOEVALUACION. NUMERO DE LA PRACTICA SI LOGRO (Objetivos cumplidos) NO FORTALEZAS DEBILIDADES SUGERENCIAS A CADA DEBILIDAD