Androstane-diol Glucuronide ELISA

Transcripción

1 Instrucciones de Uso Androstanediol Glucuronide ELISA Inmunoensayo enzimático para la determinación cuantitativa directa de Androstanediol Glucuronide en suero humano. DB C I B L I N T E R N A T I O N A L G M B H Flughafenstrasse 52a Phone: +49 (0) IBL@IBLInternational.com D22335 Hamburg, Germany Fax: +49 (0)

2 Androstanediol Glucuronide ELISA (DB52171) 1. USO PROPUESTO Inmunoensayo enzimático para la determinación cuantitativa directa de 5 Androstane3,17 diol Glucuronide (3 Diol G) en suero humano. Sólo para uso en diagnóstico invitro. 2. IMPLICACIONES CLÍNICAS 5αAndrostane3α, 17βdiol glucurónido es un esteroide C19 y se abrevia como 3α Diol G, 5α Diol G o, simplemente, α Diol G. Se produce, principalmente, como un metabolito de testosterona e dihidrotestosterona (DHT). Por lo general, se produce en los tejidos periféricos específicos, como la piel, especialmente alrededor de los folículos capilares. La estimulación mediante grandes cantidades de 3α Diol G produce una formación excesiva de cabello, en particular, en lugares donde normalmente las mujeres no tienen. En los últimos años, ha crecido el interés por la medición de este esteroide entre los investigadores clínicos que estudian a las mujeres que sufren de hirsutismo idiopático. Entre los esteroides que se conocen como precursores para 3α Diol G se encuentran la dehidroepiandrosterona (DHEA), el sulfato de dehidroepiandrosterona (DHEAS), la dihidrotestosterona (DHT), la androstenediona y la testosterona. Solo se ha demostrado que 3α Diol G aumenta con el hirsutismo y disminuye con el tratamiento. Esta correlación también se ha demostrado en pacientes con síndrome de ovario poliquístico (SOP). Por consiguiente, las determinaciones de 3α Diol G han demostrado ser un indicador útil de distintas formas, incluido el control del progreso del tratamiento del hirsutismo idiopático y de mujeres con SOP. Asimismo, los pacientes diabéticos (tanto hombres como mujeres) en tratamiento con ciclosporina A han mostrado un aumento en los niveles de 3α Diol G, un efecto secundario que tiene como resultado la aparición de cabello en áreas previamente lampiñas. 3. PRINCIPIO DEL ENSAYO El inmunoensayo enzimático sobre fase sólida (ELISA) está basado en el principio de la competencia. Una cantidad desconocida de antígeno presente en la muestra y una cantidad fija de antígeno marcado enzimáticamente compiten por los sitios de unión de los anticuerpos que recubren los pozos. Tras la reacción del sustrato los pozos se lavan para detener la reacción de competencia. Después de la reacción del sustrato la intensidad del color desarrollado es inversamente proporcional a la cantidad de antígeno de la muestra. Los resultados de las muestras se pueden determinar directamente usando la curva estándar. 4. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES 1. El personal que use el kit tiene que tener un entendimiento claro del protocolo de usot. Rendimiento fiable sólo podrán alcanzarse mediante la adhesión estricta y cuidadosa a las instruccionesproporcionadas 2. Controles o pools de sueros con alta y baja concentración deben ser incluidos en cada ensayo para asegurar la fiabilidad de los resultados. 3. Cuando se especifica el uso de agua para la dilución o reconstitución, utilizar agua desionizada o destilada. 4. Con el fin de reducir la exposición a sustancias potencialmente nocivas, se deben usar guantes al manipular los reactivos del kit y muestras humanas. 5. La curva de calibración debe ser utilizada en cada ensayo. 6. Los controles deben ser incluídos en cada ensayo y debe hallarse dentro de los límites de aceptación. 7. Las técnicas inadecuadas en el procedimiento como: pipeteados imprecisos, lavados incompletos, así como el almacenamiento inadecuado de reactivos pueden causar que los valores de ensayo para el control no reflejen rangos establecidos. 8. La presencia de burbujas en los micropocillos afectará las densidades ópticas (DO). Retire con cuidado burbujas de los pozos antes de realizar la lectura. 9. La solución de sustrato (TMB) es sensible a la luz y debe mantenerse incolora cuando se almacena en. forma adecuada. La inestabilidad o contaminación pueden ser observadas por el cambio color a azul en cuyo caso no debe utilizarse. 10. El buffer de ensayo es sensible a la luz y se debe almacenar en la botella oscura original, lejos de la luz solar directa Cuando dispense el sustrato y la solución de paro, no use pipetas cuando estos líquidos están en contacto con partes metálicas 12. Para evitar la contaminación de los reactivos, use una nueva punta de pipeta para dispensar cada reactivo, muestra, estándar y control. 13. Tome en cuenta el número de lote y la fecha de caducidad. No mezcle reactivos de diferentes lotes. No use reactivos vencidos. Version 5.3 / May 15, / 6

3 Androstanediol Glucuronide ELISA (DB52171) 14. Los reactivos químicos y los reactivos preparados o usados deben ser tratados como desechos peligrosos de acuerdo con las regulaciones nacionales sobre bioseguridad y pautas de seguridad. 15. Evite el contacto con la Solución de Parada. Puede causar irritaciones y quemaduras en la piel. 16. Todos los reactivos de este juego que contienen suero o plasma humano han sido ensayados y encontrados negativos para antihiv I/II, HBsAg and antihcv. Sin embargo, la presencia de estos u otros agentes infecciosos no puede ser excluída en forma absoluta, por lo que estos reactivos deben ser tratados como potencialmente biopeligrosos a los efectos de su manipulación y eliminación. 5. ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD El juego de reactivos es enviado a temperatura ambiente y debe ser almacenado a 28 C. Manteniéndose alejado del calor o de la luz solar directa. El almacenamiento y estabilidad de muestras y reactivos preparados se detalla en los capítulos correspondientes. La placa de microtitulación es estable hasta la fecha de caducidad del juego de reactivos aún cuando la bolsa haya sido abierta, siempre que se vuelva a cerrar herméticamente y se almacene a 28 C. Un a vez abierto, se debe utilizar los estándares y los controles dentro de 14 días o alicuotados e almacenados congelados. Evitar congelar y descongelar. 6. TOMA Y ALMACENAMIENTO DE LAS MUESTRAS Suero Las precauciones habituales para venipunctura han de ser tenidas en cuenta. Es importante conservar la integridad química de un especímen sanguíneo desde el momento de la obtención hasta que es analizado. No utilizar especímenes hemolíticos severos, ictéricos o lipémicos severos. No utilizar especímenes que contengan NaN3 o Timerosal ya que puedan llevar a resultados falsos. Las muestras que presenten turbidez deben ser centrifugadas antes del ensayo para eliminar cualquier partícula de material. Aproximadamente 0,2 ml de suero se requiere por cada determinación por duplicado. Recoger 45 ml de sangre en un tubo debidamente etiquetado y deje que se coagule. Centrifugar y quite con cuidado la capa de suero. Almacenamiento: 4 C 10 C (Alícuotas) Manténgase alejado del calor o de la luz solar directa. Estabilidad: 24 h 24 h Evite congelar y escongelar repetidamente. 7. MATERIALES SUMINISTRADOS Cantidad Símbolo Componente 1 x 12 x 8 MTP 1 x 0.3 ml ENZCONJ CONC 1 x 2.0 ml CAL A 1 x 5 x 1.0 ml CAL BF 1 x 1.0 ml CONTROL LOW 1 x 1.0 ml CONTROL HIGH 1 x 18 ml TMB SUBS 1 x 8 ml TMB STOP Microtiter Plate Tiras separables, revestido con anticuerpos policlonal en una bolsa resellable con desecante. Conjugado Enzimático, Concentrado (50 x) Contenido: 3α Diol GHRP conjugado en solución buffer proteica, conservantes libre de mercurio. Estándar A Listo para usar. 0 pg/ml Contenido: 3α Diol G, en solución buffer proteica, conservantes libre de mercurio.. Por concentraciones exactas vea las etiquetas de las ampollas o el certificado CQ. Estándar BF Listo para usar. 0.25; 1.0; 3.0; 10.0; 50.0 ng/ml Contenido: 3α Diol G, en solución buffer proteica, conservantes libre de mercurio.. Por concentraciones exactas vea las etiquetas de las ampollas o el certificado CQ. Control Bajo Listo para usar. Contenido: 3α Diol G en solución buffer proteica, conservantes libre de mercurio. Para conocer los rangos aceptables, vea las etiquetas de las ampollas o el certificado de CC. Control Alto Listo para usar. Contenido: 3α Diol G en solución buffer proteica, conservantes libre de mercurio. Para conocer los rangos aceptables, vea las etiquetas de las ampollas o el certificado de CC. Solución de Substrato TMB Listo para usar. Contenido: TMB y Peróxido de hidrógeno en una solución buffer libre de DMF o DMSO. Solución de Parada TMB Listo para usar. 1 M H2SO4. Version 5.3 / May 15, / 6

4 Androstanediol Glucuronide ELISA (DB52171) Cantidad Símbolo Componente 2 x 50 ml WASHBUF CONC 1 x 17 ml ASSAYBUF Solución Buffer de Lavado, Concentrado (10 x) Contenido: Solución buffer con detergente noiónico y conservantes libre de mercurio Buffer de Ensayo Listo para usar. Contenido: solución buffer proteica, conservantes libre de mercurio. 8. MATERIALES REQUIRIDOS PERO NO SUMINISTRADOS 1. Micropipetas (Multipette Eppendorf o dispositivos similares, < 3 % CV). Volúmenes: 50, 100, 150, 300 μl 2. Vortex 3. Agitador orbital (600 rpm) (p. e. EAS 2/4, SLT) o agitador linear (200 rpm) 4. Micropipeta multicanal de 8 canales con reservorio de reactivo 5. Frasco lavador, sistema automatizado o semiautomatizado de lavado de placas de microtitración 6. Fotómetro para placas de microtitulación capaz de leer absorbancias a 450 nm (longitud de onda de referencia nm) 7. Agua bidestilada o desionizada 8. Toallas de papel, puntas para las micropipetas y cronómetro 9. INDICACIONES PARA EL PROCEDIMIENTO 1. Cualquier manipulación inadecuada de las muestras o modificación del procedimiento de ensayo puede alterar los resultados. Los volúmenes a pipetear, los tiempos de incubación, las temperaturas y etapas de pretratamientos tienen que ser efectuados estrictamente siguiendo las instrucciones. Use sólo pipetas u otros dispositivos calibrados. 2. Una vez comenzado el ensayo, se deben completar todas las etapas sin interrupción. Asegúrese de que los reactivos, materiales y dispositivos necesarios estén listos en el momento adecuado. Permita que todos los reactivos y muestras alcancen la temperatura ambiente (1825 C) y agite suavemente por rotación cada vial de reactivo líquido o muestra antes del uso. Evite la formación de espuma. 3. Evite la contaminación de los reactivos, pipetas pocillos y/o tubos. Emplee una punta desechable nueva para cada reactivo, estándar o muestra. No intercambie las tapas. Tape siempre los viales que no estén en uso. No reutilice los pocillos, tubos o reactivos. 4. Se recomienda ensayar las muestras por duplicado para poder identificar errores potenciales de pipeteo. 5. Use un esquema de pipeteo apropiado según las dimensiones de la placa. 6. El tiempo de incubación afecta los resultados. Todos los pocillos deben ser manipulados en el mismo orden y secuencia de tiempo. Para el pipeteo de soluciones en los pocillos se recomienda una pipeta de 8 canales. 7. El lavado de la placa de microtitulación es un paso importante. Los pocillos insuficientemente lavados conllevan a resultados erróneos. Se recomienda emplear una pipeta multicanal o un sistema automático de lavado. No deje secar los pocillos entre incubaciones. Cuide de no dañar el recubrimiento de las placas durante el enjuague y/o la aspiración. Enjuague y agregue los reactivos cuidadosamente. Al enjuagar cerciórese que todos los pocillos estén completamente llenos con la Solución Buffer de Lavado y que no haya residuos en ellos. 8. La humedad afecta los pocillos y tubos recubiertos. No abra la bolsa hasta que alcance la temperatura ambiente. Los pocillos o tubos que no se empleen deben guardarse inmediatamente en la bolsa resellada con desecante. Version 5.3 / May 15, / 6

5 Androstanediol Glucuronide ELISA (DB52171) 10. INSTRUCCIONES PARA LA PREPARACIÓN DEL ENSAYO Preparación de componentes liofilizados o concentrados Diluya / disuelva Componente con Diluyente Relación Almacenamiento Estabilidad 50 ml WASHBUF CONC 450 ml agua bidest 1:10 28 C 12 meses 40 µl ENZCONJ CONC 1960 µl ASSAYBUF 1:50 Descargue todo que sobra. Las muestras que contienen concentraciones superiores al estándar más alto tienen que ser diluidas con Estándar A en relación de como máximo 1:8 y ensayado de nuevo. El resultado debe ser multiplicado con el factor de dilución. 11. PROCEDIMIENTO DE ENSAYO 1. Pipetee 50 µl de cada Calibrador, Control y muestra en los pocillos correspondienteso. 2. Pipetee 100 µl de Conjugado Enzimático (1:50) recién preparado en cada pocillo. 3. Incube 30 min a TA (1825 C) sobre un agitador orbital (aprox. 600 rpm) o agitador linear (200 rpm). 4. Lave la placa 3 x con 300 µl de Solución Buffer de Lavado diluido. Remueva el exceso de solución golpeando cuidadosamente la placa invertida sobre una toalla de papel. 5. Para la adición de la Solución del Sustrato y de Paro utilice, de ser posible, una pipeta de 8 canales. La adición de sustrato y solución de paro debe llevarse a cabo en intervalos de tiempo iguales. Evite la formación de burbujas pipeteando con sobrevolumen. 6. Pipetee 150 µl de Solución de Substrato TMB en cada pocillo. 7. Incube 1015 min a TA (1825 C) sobre un agitador orbital (aprox. 600 rpm) o agitador linear (200 rpm) o hasta que el calibrador A alcance el color azul oscuro para la DO deseada. 8. Detenga la reacción del substrato añadiendo 50 μl de Solución de Paro TMB en cada pocillo. Mezcle el contenido brevemente agitando cuidadosamente la placa. 9. Mida la densidad óptica con un fotómetro a 450 nm* dentro de 20 min *) Si la DO excede el limite de detección superior o si un filtro de 450 nm no es disponible, se puede utilizar en lugar de eso un filtro de 405 o 415 nm. Las densidades ópticas estarán más bajas, pero eso no tiene efecto en los resultados de las muestras de paciente / de control. 12. CONTROL DE CALIDAD Los resultados son válidos solamente si el ensayo ha sido realizado de acuerdo a las intrucciones. Además el usuario debe atenerse a las Prácticas de Buen Laboratorio (GLP) u otras normas o leyes comparables. Para la determinación del diagnóstico, el usuario y/o el laboratorio deben de tener un sistema validado de acuerdo con las Buenas Prácticas de Laboratorio (GLP). Los valores de los controles del ensayo deben encontrarse dentro de los rangos de aceptación indicados en las etiquetas de los viales. Si este criterio no se cumple, el ensayo no es válido y debe repetirse. Cada laboratorio debe emplear muestras conocidas como controles adicionales. En caso de detectarse alguna desviación, se debe verificar lo siguiente: Fecha de vencimiento de los reactivos, condiciones de almacenamiento, pipetas, dispositivos, condiciones de incubación y método de lavado. 13. CÁLCULO DE RESULTADOS La DO de los estándares (ejey, lineal) se plotean contra su concentración (ejex, logarítmico) ya sea en papel semilogarítmico o empleando un método automático. Se logra un buen ajuste con cubic spline, 4 Parameter Logistics or LogitLog. Para el cálculo de la curva estándar, use las mediciones obtenidas de los estándares (es aconsejable no emplear valores duplicados). La concentración de las muestras de suero y plasma se puede leer directamente de la curva estándar. Las muestras que presenten una señal mayor a la del estándar mayor tienen que ser diluidas según se describe en INSTRUCCIONES PARA LA PREPARACIÓN DEL ENSAYO y analizadas nuevamente. Version 5.3 / May 15, / 6

6 Androstanediol Glucuronide ELISA (DB52171) Curva de Calibración Típica (Ejemplo. No usar para el cálculo!) Estándar DO 1 DO 2 DOMedio Valor (ng/ml) A B C D E F Desconocido OD 450nm alpha Diol G (ng/ml) 14. VALORES ESPERADOS Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de valores normales. Grupo Intervalo (ng/ml) Hombres premenopáusica posmenopáusica Pubertad (mujeres) PRUEBAS FUNCIONALES SENSIBILIDAD ANALÍTICA El límite de detección inferior se calcula de la curva estándar mediante la determinación de la concentración resultante del medio de la DO del Estándar A (basado en 10 determinaciones duplicadas) menos 2 DS. La sensibilidad del juego de reactivos de Androstanediol Glucuronide ELISA da como resultado 0.1 ng/ml. ESPECIFICIDAD (REACTIVIDAD CRUZADA) Se han ensayado los siguientes compuestos químicos de su reactividad cruzada con el juego de reactivos Androstanediol Glucuronide ELISA con la 3α Diol G teniendo una reactividad cruzada de 100%. Esteroide % Reactividad Cruzada 3α Diol G 100 Testosterona 0.2 Progesterona 0.16 Androstenediona 0.14 Cortisol 0.05 Los siguientes esteroides han sido ensayados, pero mostraron una reactividad cruzada de menos de 0.01%.:Corticosterona, Dehidroepiandrosterona, Dihidrotestosterona, Epiandrosterona, 17βEstradiol and Estrona. PRECISION INTRAENSAYO Se han ensayado tres muestras cada una diez veces con la misma curva estándar. Los resultados están presentados en la siguiente tabla (en ng/ml): Muestra Medio DS CV% PRECISION INTERENSAYO Se han ensayado tres muestras diez veces por un periodo de cuatro semanas. Los resultados están presentados en la siguiente tabla (en ng/ml): Muestra Medio DS CV% Version 5.3 / May 15, / 6

7 Androstanediol Glucuronide ELISA (DB52171) RECUPERCIÓN Las muestras enriquecidas fueron producidos mediante el añadido de una cierta cantidad de 3α Diol G a tres muestras de suero de paciente. Los resultados están presentados en la siguiente tabla (en ng/ml): Muestra Resultado medidio Resultado expectado Recuperción% 1 Enriquecida Enriquecida Enriquecida LINEARIDAD Se han diluido tres muestras de paciente con Estándar A. Los resultados están presentados en la siguiente tabla (en ng/ml): Muestra Resultado medidio Resultado expectado Recuperción% 1 1:2 1:4 1:8 2 1:2 1:4 1:8 3 1:2 1:4 1: REFERENCIAS SOBRE EL PRODUCTO 1. Gunther, H.J. and Wilson, J.D., Formation of 5αAndrostane3α, 17βdiol by normal and hypertrophic human prostate. J. Clin. Endocrinol. Metab. 44/1:107115, Deslypere, J.P., et al., Plasma 5αAndrostane3α, 17βdiol and urinary 5αAndrostane3α, 17βdiol glucuronide, parameters of peripheral androgen action: A comparative study. J. Clin. Endocrinol. Metab. 54/2:386391, Moghissi, E., et al., Origin of plasma androstanediol glucuronide in men. J. Clin. Endocrinol. Metab. 59/3:417421, Scanlon, M.J. et al., Serum androstanediol glucuronide concentrations in normal and hirsute women and patients with thyroid dysfunction. Clin. Endocinol. 29:529538, Reiner, B.J., et al., Serum 3αAndrostanediol glucuronide measurements in sexually mature women with congenital adrenal hyperplasia during therapy. J. Clin. Endocrinol. Metab , Vexiau, P., et al., Increase in plasma 5αAndrostane3α, 17βdiol glucuronide as a marker of peripheral androgen action in hirsutism: A sideeffect induced by cyclosporine A. J. Steroid Biochem. 35/1: , Pang, S., et al., 3αAndrostanediol glucuronide in virilizing congenital adrenal hyperplasia: A useful serum metabolic marker of integrated adrenal androgen secretion. J. Clin. Endocrinol. Metab. 73/1: , Riddick, L., et al., 3αAndrostanediol glucuronide in premature and normal pubarche. J. Clin. Endocrinol. Metab. 72:4650, Check, J.H., et al, Falsely elevated steroidal assay levels related to heterophile antibodies against various animal species. Gynecol Obstet Invest 40:139140, Version 5.3 / May 15, / 6

8 Symbols / Symbole / Symbôles / Símbolos / Símbolos / Σύμβολα REF LOT CONC LYO IVD Cat.No.: / Kat.Nr.: / No. Cat.: / Cat.No.: / N.º Cat.: / N. Cat.: / ΑριθμόςΚατ.: LotNo.: / ChargenBez.: / No. Lot: / LotNo.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθμός Παραγωγή: Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: / Χρησιμοποιείται από: No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: / Αριθμός εξετάσεων: Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συμπύκνωμα Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασμένο In Vitro Diagnostic Medical Device. / InvitroDiagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In Vitro. / Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro. / Equipamento Médico de Diagnóstico In Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / Ιατρική συσκευή για InVitro ιάγνωση. Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης. Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. / Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni prima dell uso. / ιαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση. Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. / Garder à l abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να φυλάσσεται μακριά από θερμότητα και άμεση επαφή με το φως του ηλίου. Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση στους: Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός: Caution! / Vorsicht! / Attention! / Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή! Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED. Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben. Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit. Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS. Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS. Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT. Για τα σύμβολα των συστατικών του κιτ συμβουλευτείτε το ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ. COMPLAINTS: Complaints may be submitted initially written or vocal. Subsequently they need to be filed including the test performance and results in writing in case of analytical reasons. WARRANTY: The product is warranted to be free from material defects within the specific shelf life and to comply with product specifications delivered with the product. The product must be used according to the Intended use, all instructions given in the instructions for use and within the product specific shelf life. Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These cases invalidate any claim for replacement. LIMITATION OF LIABILITY: IN ALL CIRCUMSTANCES THE EXTENT OF MANUFACTURER S LIABILITY IS LIMITED TO THE PURCHASE PRICE OF THE KIT(S) IN QUESTION. IN NO EVENT SHALL MANUFACTURER BE LIABLE FOR ANY INCIDENTAL OR CONSEQUENTIAL DAMAGES, INCLUDING DAMAGES FOR LOST PROFITS, LOST SALES, INJURY TO PERSON OR PROPERTY OR ANY OTHER INCIDENTAL OR CONSEQUENTIAL LOSS. IBL International GmbH Flughafenstr. 52A, Hamburg, Germany Tel.: + 49 (0) Fax: 11 IBL@IBLInternational.com WEB: Symbols Version 4.5 /