IGFBP-3 ELISA MG x8 2-8 C. Instrucciones de Uso

Transcripción

1 Instrucciones de Uso IGFBP3 ELISA Inmunensayo enzimático de diagnóstico invitro para la determinación cuantitativa de la Proteína 3 enlazante del Factor humano de Crecimiento Similar a la Insulina (IGFBP3) en suero. MG x8 28 C I B L I N T E R N A T I O N A L G M B H Flughafenstrasse 52a Phone: +49 (0) IBL@IBLInternational.com D22335 Hamburg, Germany Fax: +49 (0)

2 ESPANOL Leer el protocolo completo antes de usar. IGFBP3ELISA I. INSTRUCCIONES DE USO Ensayo inmunoenzimático para la determinación cuantitativa in vitro de la Proteína 3 enlazante del Factor humano de Crecimiento Similar a la Insulina, (IGFBP3) en el suero, II. INFORMACIÓN GENERAL A. Nombre: IGFBP3ELISA Número de Catálogo: MG59131 III. CONTEXTO CLÍNICO El sistema del Factor de Crecimiento similar a la Insulina (IGF) es el regulador principal del crecimiento corporal normal y la regeneración, afectando la proliferación celular, diferenciación y apoptosis. Además el sistema IGF parece modificar la sensibilidad a la insulina y el metabolismo de la glucosa a largo plazo. Finalmente, muchos datos epidemiológicos, experimentales y clínicos, indican que el sistema IGF también está involucrado en el desarrollo de varios cánceres comunes como también enfermedades frecuentes tales como, arterosclerosis y diabetes mellitus tipo 2. El sistema IGF consiste en una familia de péptidos estrechamente relacionados entre sí, incluyendo a los dos péptidos principales en la estimulación del crecimiento, IGFI e IGFII, 6 proteínas específicas que se unen al IGF con alta afinidad (IGFBP1 al 6), y una glicoproteína grande que no se une al IGF, la sub unidad ácidolábil (ALS). De las proteínas que se unen al IGF, la IGFBP3 es la más abundante, representa un 75% o más de la capacidad de unión con el IGF en la circulación de individuos sanos. La IGFBP3 comparte propiedades funcionales con la IGFBP5 en que ambos péptidos son capaces de formar complejos ternarios de alto peso molecular de ~150 kilo Dalton con ALS y también con el IGFI o II. Sin embargo, la IGFBP5 circula en mucha menor concentración que la IGFBP3, y en individuos sanos los complejos ternarios transportan hasta el 90% de la IGFBP3 pero solo alrededor del 50% de la IGFBP5. Originalmente, se pensaba que las IGFBP funcionaban como proteínas transportadoras del IGF, estabilizando los niveles plasmáticos del IGF y controlando la salida del IGF de la circulación hacia el compartimiento extravascular. Aún más, se suponía que el IGF en complejo con la IGFBP, al no tener la habilidad para interactuar con el receptor IGFI, era prácticamente inactivo biológicamente. Sin embargo muy pronto se hizo evidente que en algunas situaciones experimentales las IGFBP estimulaban en vez de inhibir las acciones mediadas por IGFI y en consecuencia, por esta razón a menudo son llamadas moduladoras de la bioactividad del IGFI. Además la mayoría de las IGFBP, especialmente la IGFBP3, ejercen efectos independientes sobre IGFI y los receptores en IGFI, posiblemente involucrando interacciones con receptores específicos ubicados en la superficie celular e intracelular. Por ejemplo, la IGFBP3 es considerada hoy en día como una molécula anti cáncer, que aparentemente protege contra varios cánceres comunes y se ha sugerido también, de los efectos de la IGFBP3 sobre la señalización de la insulina en cultivo de adipositos. La velocidad de reposición de los complejos ternarios es muy lenta y la concentración plasmática de la IGFBP3 se mantiene estable a través del día, sin ser afectada por cambios nutricionales de corto plazo. Por lo tanto, el nivel de la IGFBP3 puede determinarse con una sola medición. La GH (hormona del crecimiento) es la principal reguladora de la IGFBP3 como también del IGFI y ALS por lo que los tres péptidos aumentan durante el rápido crecimiento en la pubertad, luego el nivel disminuye gradualmente con la edad. En los niños, se ha demostrado que hay una correlación entre la IGFBP3 y la secreción de GH integrada de 24horas y especialmente en los niños la IGFBP3 puede ser útil para el diagnóstico de la deficiencia de GH.

3 IV. PRINCIPIOS DEL MÉTODO El IGFBP3 ELISA es un Inmunoensayo de fase sólida Enzimático de Sensibilidad Amplificada efectuado en microplacas. Los calibradores y las muestras reaccionan con el anticuerpo de captura monoclonal (MAb 1) que recubre los pocillos de la microplaca y con un anticuerpo monoclonal (MAb 2) marcado con peroxidasa de rábano picante (HRP). Después de un periodo de incubación que permite la formación de un sándwich : MAb 1 recubierto IGFBP3 humana MAb 2 HRP, la microplaca se lava para eliminar los anticuerpos libres marcados con enzimas. Los anticuerpos marcados con enzimas que se han ligado se miden con una reacción cromogénica. La solución cromogénica (TMB) es añadida e incubada. La reacción se para con la adición de la Solución de Parada y después la microplaca se lee a la longitud de onda apropiada. La cantidad de recambio de sustrato es determinada de manera colorimétrica por la medición de la absorbancia, que es proporcional a la concentración de la IGFBP3 humana. Una curva de calibración es elaborada y la concentración de la IGFBP3 de las muestras es determinada por interpolación en la curva de calibración. V. REACTIVOS SUMINISTRADOS MTP Reactivos Kit de 96 determinacio nes Microplaca con anti IGFBP3 (anticuerpos monoclonales) pocillos recubiertos desprendibles Código de Color Reconstitución 96 pocillos Azul VI. MATERIAL NO SUMINISTRADO El material mencionado a continuación es necesario y no está incluido en el kit 1. Agua destilada de alta calidad 2. Pipetas de 50 µl, 0µl y 1 ml (Se recomienda el uso de pipetas precisas con puntas desechables de plástico) 3. Tubos plásticos para dilución de las muestras. 4. Vortex 5. Agitador magnético 6. Lavador de microplacas 7. Lector de microplacas capaz de leer a 450 nm y 650 nm (lectura monocromática) VII. PREPARACIÓN DE REACTIVOS A. Calibradores: Reconstituir los calibradores con 1 ml de agua destilada. Use el tampón de dilución como calibrador cero! B. Controles: Reconstituir los controles con 1 ml de agua destilada. C. Conjugado de trabajo IGFBP3 HRP: Prepare un volumen adecuado de solución de conjugado agregando por ejemplo: 0 µl del conjugado concentrado x 20 IGFBP3 HRP a 2 ml de tampón de conjugado. Usar un agitador vortex para homogenizar. Se recomienda preparar en el momento de uso. D. Solución de lavado de trabajo: Preparar el volumen necesario de Solución de lavado de trabajo mezclando 199 partes de agua destilada con 1 parte de Solución de lavado (200x). Utilizar un agitador magnético para homogeneizar. Desechar la solución de lavado de trabajo no utilizada al final del día. Ab HRP Conjugado: anti IGFBP3 marcado con HRP (anticuerpos monoclonales) en tampón de citrato con albúmina de suero CONJBUF Tampón de Conjugado: tampón TRIS con albúmina de suero CAL N Calibradores N = 1 al 5, en tampón fosfato con albúmina de suero Ver los valores exactos en las etiquetas de los viales. Los calibradores ya vienen diluidos. Use el tampón de dilución como calibrador cero! DILBUF CONC LYO Tampón de dilución: Tampón de fosfato con albúmina de suero 0,5 ml ml 5 viales liofilizados 0 ml Rojo Rojo amarillo negro Diluir 20 x con tampón de conjugado Añadir 1 ml de agua destilada VIII. ALMACENAJE Y CADUCIDADES DE LOS REACTIVOS Antes de abrir o reconstituir todos los componentes de los kits son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, si se guardan a 28ºC. Los pocillos que no han sido usados deben ser almacenados entre 2 y 8 C, en una bolsa sellada que contenga un desecante hasta la fecha de expiración. Después de reconstituidos, los calibradores y controles son estables por una semana de 2 a 8 C. Para periodos de almacenaje más largos, se deberán preparar alícuotas y almacenarlas a 20 C por un máximo de tres meses. Evitar congelar y descongelar sucesivamente. La Solución de Lavado concentrada es estable a temperatura ambiente hasta la fecha de caducidad. El conjugado de trabajo IGFBP3HRP es estable por cuatro horas a temperatura ambiente, evitar la luz solar directa. Las alteraciones de la apariencia física de los reactivos pueden indicar inestabilidad o deterioro. IX. TOMA Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS Las muestras de suero deben ser guardadas a 28ºC. Si el ensayo no se realiza en 24 hrs., almacenar las muestras a 20º. Evitar congelar y descongelar sucesivamente. Antes de usarlas todas las muestras deben estar a temperatura ambiente. Se recomienda agitar las muestras en un Vortex antes de usarlas. No utilizar muestras hemolizadas. CONTROL N Controles N = 1 o 2 en suero humano con timol. Los controles ya vienen diluidos. WASHBUF Solución de lavado (TrisHCl) TMB SUBS STOP LYO CONC Solución Cromogénica TMB (Tetrametilbencidina) Solución de Parada: HCl 1N 2 viales Liofilizados ml 12 ml 12 ml plateado marrón blanco negro Añadir 1 ml de agua destilada Diluir 200 x con agua destilada (utilizar agitador magnético) Nota : use el tampón de dilución como calibrador cero. Los calibradores se estandarizan contra el reactivo de referencia de NIBSC/WHO IGFBP3 recombinante, código 93/560. X. PROCEDIMIENTO A. Notas de manejo No utilizar el kit o componentes después de la fecha de caducidad. No mezclar reactivos de diferente número de lote. Llevar todos los reactivos a temperatura ambiente antes de su uso. Mezclar concienzudamente todos los reactivos y muestras, agitándolos o girándolos suavemente. Preparar los calibradores, controles y muestras en duplicado. Se recomienda la alineación vertical.. Usar un envase plástico limpio para preparar la Solución de Lavado. Con el fin de evitar cualquier contaminación utilizar puntas de pipetas desechables y limpias para la adición de cada reactivo y muestra. Al dispensar la Solución Cromogénica y la Solución de Parada, evitar usar pipetas con partes metálicas. El uso de pipetas de precisión o equipamiento de dispensación automática mejorara la precisión. Respetar los tiempos de incubación. Para evitar deriva, el tiempo entre el pipeteo del primer calibrador y la última muestra debe estar limitado al tiempo mencionado en la sección XIII párrafo E (Demora en el tiempo). Preparar la curva de calibración para cada ensayo, no utilizar los datos de ensayos previos.

4 Dispensar la Solución Cromogénica dentro de los 15 minutos posteriores al lavado de las microplacas. Durante la incubación con Solución Cromogénica, evitar exponer las microplacas la luz solar directa. C. Precisión PRECISIÓN INTRAENSAYO PRECISIÓN INTERENSAYO B. Procedimiento 1. Etiquetar un tubo plástico por cada muestra. 2. Dispensar 1 ml de Tampón de Dilución en cada tubo. 3. Agregar µl de muestra a estos tubos. 4. Agitar en un vortex las muestras pre diluidas, los calibradores y controles reconstituidos. 5. Seleccionar el número requerido de pocillos para el ensayo. Los pocillos sin usar deben ser sellados en la bolsa con un desecante y guardados a 2 8 C. 6. Fijar los pocillos en el soporte. 7. Pipetear 0 µl de tampón de dilución como calibrador cero. Pipetear 0 µl de cada Calibrador, Control y Muestra diluida en el pocillo apropiado. 8. Pipetear 50 µl del conjugado de trabajo IGFBP3HRP en cada pocillo. 9. Incubar durante 2 horas a temperatura ambiente.. Aspirar el líquido de cada pocillo. 11. Lavar la placa 3 veces. 12. Pipetear 0 µl de la solución cromogénica en cada pocillo dentro de los de 15 minutos después de la fase de lavado. 13. Incubar la microplaca durante 30 minutos a temperatura ambiente en posición horizontal, evitar la luz solar directa. 14. Pipetear 0 µl del Reactivo de Parada en cada pocillo. 15. Leer las absorbancias a 450 nm (filtro de referencia 630 nm o 650 nm) en menos de 1 hora y calcular los resultados como se ha descrito en la sección XI Suero N <X> ± DS A B ,2 ± 41, ,6 ± 4,4 CV (%) 5,1 5,1 Suero N <X> ± DS A B DS : Desviación Estándar; CV: Coeficiente de Variación D. Exactitud Muestra Suero 1 Suero 2 PRUEBA DE RECUPERACIÓN IGFBP3 añadido IGFBP3 recuperado ± 198, ± 296,4 CV (%) 6,4 6 Recuperación (%) 4,8% 112% 9,5% 1,6% 111% 8,8% XI. CÁLCULO DE RESULTADOS PRUEBA DE DILUCIÓN 1. Leer la placa a 450 nm contra un filtro de referencia a 650 nm (o 630 nm). 2. Calcular el promedio de las determinaciones dobles. 3. Poner sobre un papel semilogarítmico o linear los valores de la DO (ordenada) para cada calibrador contra la concentración de IGFBP3 humana correspondiente (abscisa) y construir la curva de calibración conectando los puntos de calibración con líneas rectas. 4. Leer la concentración para cada control y muestra por interpolación en la curva de calibración. 5. La reducción de datos asistida por ordenador puede facilitar estos cálculos. Si se utiliza el procesamiento de resultados automático, recomendamos el ajuste de la curva dada por la función logística de 4 parámetros. XII. EJEMPLO DE RESULTADOS Muestra Dilución Concent. Teórica Suero A Suero B 1/1 1/2 1/4 1/8 1/16 1/1 1/2 1/4 1/8 1/ Concent. Medida Los datos mostrados a continuación sirven como ejemplo y nunca deberán ser usados en vez de una calibración real. IGFBP3ELISA Calibrador 0 ng/ml 460 ng/ml 1270 ng/ml 3020 ng/ml 67 ng/ml ng/ml XIII. FUNCIONAMIENTO Y LIMITACIONES 0,028 0,114 0,311 0,778 1,403 2,588 unidades DO A. Limite de detección Dieciséis calibradores cero fueron medidos en una curva al mismo tiempo que un conjunto de otros calibradores. El límite de detección, se definió como la concentración aparente dos desviaciones estándares sobre la DO promedio cuando la unión es cero, fue de ng/ml. B. Especificidad Algunas hormonas que en teoría podrían interferir han sido estudiadas con este ensayo. En concentraciones de hasta µg/ml, ninguna de las siguientes hormonas demostró una interferencia significativa: rhigfbp1 rhigfbp2 rhigfbp4 rhigfbp5 rhigfbp6 rhigfi rhigfii Se prepararon diluciones seriadas a partir de la dilución inicial con tampón de dilución, como se ha descrito en la sección de procedimiento X. B. 23. E. Demora entre dispensar el último calibrador y muestra. Como se ve a continuación, los resultados de los ensayos siguen siendo precisos incluso cuando una muestra es dispensada 30 minutos después que los calibradores se han agregado a los pocillos recubiertos. XIV. DEMORA EN EL TIEMPO S1 S2 0 min 30 min CONTROL DE CALIDAD INTERNO Si los resultados obtenidos para el Control 1 y/o Control 2 no están dentro del rango especificado en la etiqueta del vial, los resultados obtenidos no podrán ser utilizados a no ser que se pueda dar una explicación convincente de dicha discrepancia Si es conveniente, cada laboratorio puede preparar sus propios grupos de muestras de control, las que deben almacenarse en alícuotas congeladas. Los controles que contienen azida interfieren con la reacción enzimática y no pueden ser utilizados. Los criterios de aceptación de las diferencias entre los resultados de los duplicados de las muestras deben depender de las Buenas Prácticas de Laboratorio. Recomendamos que los controles sean incluídos rutinariamente en los ensayos como muestras desconocidas para medir la variabilidad del ensayo. El funcionamiento del ensayo debe ser controlado con gráficos de control de calidad de los controles. Recomendamos un control visual de la curva seleccionada por el ordenador.

5 XV. INTERVALOS DE REFERENCIA Estos valores solamente sirven de pauta; cada laboratorio tiene que establecer sus propios rangos de valores normales. XVI. Edad 0 2 años 3 5 años 6 8 años 9 11 años años años años años años años años > 60 años HOMBRES MUJERES Media Rango Media Rango PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS Seguridad Sólo para uso de diagnóstico in vitro. Los componentes de sangre humana utilizados en este kit han sido examinados por métodos aprobados por la CEE y/o la FDA resultando negativos para HBsAg, antivhc, antivih1 y 2. No se conoce ningún método que asegure totalmente que los derivados de la sangre humana no transmitirán hepatitis, SIDA u otras infecciones. Por lo tanto el manejo de los reactivos y muestras de suero o plasma se hará de acuerdo con los procedimientos de seguridad locales. Todos los productos animales y derivados han sido obtenidos a partir de animales sanos. Los componentes bovinos provienen de países donde la EEB (Encefalopatía Espongiforme Bovina) no ha sido informada. Sin embargo, los componentes que contienen sustancias animales deberán ser considerados como potencialmente infecciosos. Evitar contacto de la piel con todos los reactivos, la Solución de Parada contiene HCl. En caso de contacto, lavar con abundante agua. No fumar, beber, comer o utilizar cosméticos en el área de trabajo. No pipetear con la boca. Utilizar ropa de protección y guantes desechables. XVII. BIBLIOGRAFIA 1. LEROITH D., BONDY C., YAKAR S., LIU JL., BUTLER A. The somatomedin hypothesis : Endocr Rev 2001; 22: POLLAK MN., SCHERNHAMMER ES., HANKINSON SE. Insulinlike growth factors and neoplasia. Nat Rev Cancer 2004; 4: YUEN K., FRYSTYK J., UMPLEBY M., FRYKLUND L., DUNGER D. Changes in free rather than total insulinlike growth factori enhance insulin sensitivity and suppress endogenous peak growth hormone (GH) release following shortterm low dose GH administration in young healthy adults. J Clin Endocrinol Metab 2004; 89: KHANDWALA HM., McCUTCHEON IE., FLYVBJERG A., FRIEND KE. The effects of insulinlike growth factors on tumorigenesis and neoplastic growth. Endocr Rev 2000; 21: VAESSEN N., HEUTINK P., JANSSEN JA., WITTEMAN JC., TESTERS L., HOFMAN A., LAMBERTS SW., OOSTRA BA., POLS HA., VAN DUIJN CM. A polymorphism in the gene for IGFI : functional properties and risk for type 2 diabetes and myocardial infarction. Diabetes 2001; 50: JUUL A. Serum levels of insulinlike growth factori and its binding proteins in health and disease. Growth Horm IGF Res 2003; 13: FIRTH SM., BAXTER RC. Cellular actions of the insulinlike growth factor binding proteins Endocr Rev 2002; 23: BAXTER RC., MEKA S., FIRTH SM. Molecular distribution of IGF binding protein5 in human serum. J Clin Endocrinol Metab 2002; 87: RICORT JM. Insulinlike growth factor binding protein (IGFBP) signaling. Growth Horm IGF Res 2004; 14: JONES JI., CLEMMONS DR. Insulinlike growth factors and their binding proteins : biological actions. Endocr Rev 1995; 16: ALI O., COHEN P., LEE KW. Epidemiology and biology of insulinlike growth factor binding protein 3 (IGFBP3) as an anticancer molecule. Horm Metab Res 2003; 35: CHAN SS., TWIGG SM., FIRTH SM., BAXTER RC. Insulinlike growth factor binding protein3 leads to insulin resistance in adipocytes. J Clin Endocrinol Metab 2005; 90: JUUL A., MAIN K., BLUM WF., LINDHOLM J., RANKE MB., SKAKKEBAEK NE. The ration between serum levels of insulinlike growth factor (IGF)I and the IGF binding proteins (IGFBP1, 2 and 3) decreases with age in healty adults and is increased in acromegalic patients. Clin Endocrinol (Oxf) 1994; 41: BLUM WF., ALBERTSSONWIKLAND K., ROSBERG S., RANKE MB. Serum levels of insulinlike growth factor I (IGFI) and IGF binding protein 3 reflect spontaneous growth hormone secretion. J Clin Endocrinol Metab 1994; 76: FRYSTYK J., IVARSEN P., SKJAERBAEK C., FLYVBJERG A., PEDERSEN EB., ORSKOV H. Serumfree insulinlike growth factor I correlates with clearance in patients with chronic renal failure. Kidney Int 1999; 56: FRYSTYK J. In Endocrinology and Metabolism Clinics of North America 2005 : Endocrinology of aging, Chapter XI : Aging somatotropic axis mechanisms and implications of IGFBP adaptation. 5. RENEHAN AG., ZWAHLEN M., MINDER PC., O DWYSER ST., SHALET PS., EGGER PM. Insulinlike growth factor (IGF)I, IGF binding protein3, and cancer risk : systematic review and metaregression analysis. The Lancet 2004; 363: JUUL A., SCHEIKE T., DAVIDSEN M., GYLLENBORG J., JORGENSEN T. Low serum insulinlike growth factor I is associated with increased risk of ischemic heart disease : a populationbased casecontrol study. Circulation 2002; 6: SANDHU MS., HEALD AH., GIBSON JM., CRUICKSHANK JK., DUNGER DB., WAREHAM NJ. Circulating concentrations of insulinlike growth factori and development of glucose intolerance : a prospective observational study. The Lancet 2002; 359:

6 XVIII. RESUMEN DEL PROTOCOLO CALIBRADORES CONTROLES (μl) MUESTRA(S) (μl) DILUCIÓN DE LAS MUESTRAS Tampón de dilución Muestra 00 Agitar Vortex INCUBACIÓN Calibradores (0 5), controles Muestras Diluidas, Conjugado Diluido Incubar durante 2 horas a temperatura ambiente. Aspirar el contenido de cada pocillo. Lavar 3 veces con 400 µl de la Solución de Lavado y aspirar. Solución Cromogénica 0 0 Incubar durante 30 minutos a temperatura ambiente Solución de Parada 0 0 Leer con un lector de microplacas y registrar la absorbancia de cada pocillo a 450 nm (contra 630 o 650 nm). Revisión nro.: /1 Fecha de la revisión :

7 Symbols / Symbole / Symbôles / Símbolos / Símbolos / Σύµβολα REF LOT Cat.No.: / Kat.Nr.: / No. Cat.: / Cat.No.: / N.º Cat.: / N. Cat.: / ΑριθµόςΚατ.: LotNo.: / ChargenBez.: / No. Lot: / LotNo.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθµός Παραγωγή: Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: / Χρησιµοποιείται από: No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: / Αριθµός εξετάσεων: CONC Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συµπύκνωµα LYO IVD Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασµένο In Vitro Diagnostic Medical Device. / InvitroDiagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In Vitro. / Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro. / Equipamento Médico de Diagnóstico In Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / Ιατρική συσκευή για InVitro ιάγνωση. Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης. Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. / Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni prima dell uso. / ιαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση. Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. / Garder à l abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να φυλάσσεται µακριά από θερµότητα και άµεση επαφή µε το φως του ηλίου. Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση στους: Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός: Caution! / Vorsicht! / Attention! / Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή! Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED. Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben. Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit. Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS. Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS. Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT. Για τα σύµβολα των συστατικών του κιτ συµβουλευτείτε το ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ. IBL AFFILIATES WORLDWIDE IBL International GmbH Flughafenstr. 52A, Hamburg, Germany IBL International Corp. 194 Wildcat Road, Toronto, Ontario M3J 2N5, Canada Tel.: + 49 (0) Fax: 11 IBL@IBLInternational.com WEB: Tel.: +1 (416) Fax: Sales@IBLInternational.com WEB: LIABILITY: Complaints will be accepted in each mode written or vocal. Preferred is that the complaint is accompanied with the test performance and results. Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These cases invalidate any claim for replacement. Regardless, in the event of any claim, the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit. Any damage caused to the kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer Symbols Version 3.5 /