TRABAJO PRACTICO 1. Introducción al laboratorio de microbiología. Bioseguridad

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1 2017

2 TRABAJO PRACTICO 1. Introducción al laboratorio de microbiología. Bioseguridad Objetivos: Que el alumno sea capaz de incorporar las nociones de bioseguridad, lavado de manos, preparación de solución de hipoclorito de sodio, decontaminación de mesadas y desechar correctamente los residuos producidos. Introducción Se entiende por Bioseguridad al conjunto de principios, normas, técnicas y prácticas que deben aplicarse para la protección del individuo, la comunidad y el medio ambiente, frente al contacto con agentes que son potencialmente nocivos. La Bioseguridad se debe pensar como una doctrina de comportamiento destinada a lograr actitudes y conductas. Es importante para tal fin, conocer los aspectos fundamentales que estén relacionados con el cumplimiento de las normas de calidad que tiendan a la protección del personal, del paciente (si los hubiera), las muestras de los pacientes (que debe tomarse como Única e irrepetible), de la comunidad y el medio ambiente. Esto implica la adopción sistemática de una serie de medidas orientadas a reducir o eliminar los riesgos que puedan producir las actividades que se desarrollan en la institución. La mayoría de los accidentes se dan por que existen: errores humanos, desconocimiento de las normas, excesos de confianza, malos hábitos del personal, uso inadecuado de los equipos de protección. Las infecciones pueden entrar por: - Tracto digestivo por ingestión o transferencia de microorganismos desde dedos contaminados, lapiceras que se apoyadan en superficies contaminadas y se llevan a la boca. - Mucosas: nasal, conjuntiva, aerosoles y manos contaminadas. -Piel vía percutánea: inyección, cortes o escoriaciones. -Respiratoria: es la más importante. El 80% de las infecciones contraídas en el laboratorio son de origen aéreo por inhalación de aerosoles que transportan microorganismos (ej: virus).

3 Siempre hay que tener en cuenta que la infectividad de un microorganismo depende del tamaño del inóculo, la susceptibilidad individual, la virulencia del agente y el sitio de invasión. Los Equipos de Seguridad- Barrera Primaria: son los elementos de protección personal: guantes, delantales, botas, respiradores, mascaras faciales, anteojos o antiparras de seguridad. Niveles de seguridad. Requerimientos recomendados para los distintos niveles de bioseguridad en Microbiología. Ver tabla abajo. NIVEL 1 NIVEL 2 NIVEL 3 NIVEL 4 Agentes para los que no se ha comprobado que produzcan enfermedad en adultos sanos = Laboratorio de enseñanzas. Agentes asociados a enfermedades humanas de riesgo moderado para el operador y medio ambiente (transmisión por ingestión, daño percutáneo, contacto con mucosas) Agentes indígenas o exógenos con potencial de transmisión por aerosol, causantes de enfermedades graves o letales para operador y riesgo moderado para el medio ambiente Agentes exóticos que producen enfermedades mortales, que pueden producir epidermias o de vías de transmisión desconocidas. Elevado riesgo para el personal y el medio ambiente

4 SOLUCIONES DECONTAMINANTES, PREPARACIÓN Y USO. Los desinfectantes químicos se utilizan para decontaminar (=desinfectar) superficies, ambientes y material de laboratorio que no resista la esterilización en autoclave o por calor seco. HIPOCLORITO DE SODIO El decontaminante más usado en procesos de higiene y desinfección biomédicos es la lavandina, nombre común del hipoclorito de sodio, un agente químico que es capaz de eliminar a la mayoría de los microorganismos. Al diluir la lavandina en agua, se genera el principio activo, el ácido hipocloroso, en un equilibrio que depende del ph: NaClO + H2O = NaOH + HClO Mecanismo de acción: oxida en forma irreversible grupos S-S- de ciertas enzimas vitales para los microorganismos inactivándolas. El HClO reacciona con casi cualquier molécula, consumiéndose, es decir, la solución se agota en su principio activo a medida que actúa, por esto hay que adecuar la relación entre agente decontaminante y material contaminado. Para un buen proceso de decontaminación también es necesario utilizar el producto químico con una concentración y tiempo de contacto adecuados. USO CORRECTO de la LAVANDINA CONCENTRACIÓN. 1%y al 10% USO -Para limpieza de superficies poco contaminadas: Mesadas Pisos Paredes, etc. -Para decontaminar material delaboratorio muy contaminado: Jeringas, tubos, etc. Superficies muy contaminadas. Cultivos.

5 PREPARACIÓN 1% = 1/100 = Partiendo de la solución comercial, tomar 1 ml y llevar a 100 con agua corriente fría. 10% = 1/10 = 1+ 9 Partiendo de la solución comercial (55 g/l de cloro activo), tomar 10 ml y llevar a 100 con agua corriente fría. Mediante el empleo de elementos no volumétricos, como por ejemplo un vaso plástico, se agregará una parte de lavandina concentrada más 9 partes de agua. El volumen a preparar dependerá de la cantidad de material o la superficie a decontaminar. TIEMPO 30 min. 30 min. (se acostumbra dejar 24 Hs.) PRECAUCIONES: Lavandina Diluida -Lavandina Concentrada: NO usar agua caliente para las diluciones. Las soluciones deben prepararse en el día y no usarse más allá de las 24 Hs de su preparación. NUNCA mezclar con detergentes ni con compuestos ácidos, pues al combinarse se descompone el HClO, perdiendo la acción germicida. NO usar para decontaminar equipos metálicos, las soluciones de lavandina son corrosivas. NO agotar el principio activo porexceso de material. ASEGURAR el contacto íntimo entre el material y la solución, por ejemplo en el caso de jeringas y tubos. Mantener en su envase original bien tapado. Conservar en lugar fresco y oscuro, pues el paso del tiempo, la luz y las altas temperaturas inactivan al hipoclorito. Antes de comenzar el trabajo de laboratorio en microbiología, se prepararán las soluciones decontaminantes necesarias. La superficie de trabajo debe estar limpia para ser decontaminada con Solución de lavandina al 1%. Además la mesada debe estar libre de elementos innecesarios, por esto, la ropa de abrigo, bolsos, carpetas, etc, deben

6 permanecer SIEMPRE fuera del ambiente de trabajo, evitando también el transporte de agentes biológicos del laboratorio al exterior del mismo. COMO ACTUAR FRENTE ACCIDENTES : 1. Rotura de recipientes y derrames de material potencialmente infeccioso (tareas de descontaminación). -Colocarse las barreras primarias adecuadas (guardapolvos, guantes gruesos resistentes, calzado protector de goma y, si hiciera falta, protección respiratoria apropiada. - Cubrir el material derramado y los recipientes rotos, con papel absorbente. - Cubrirlos con desinfectante y dejar actuar durante el tiempo necesario [solución de hipoclorito de sodio 10% durante 30 minutos]. - Transcurrido dicho tiempo retirar todo. Manipular los fragmentos de vidrio con pinzas. - Restregar la zona contaminada, con el desinfectante. - Descartar los paños o el papel absorbente utilizados para la limpieza como residuo patológico. - En caso de contaminación de papeles manuscritos o impresos, en lo posible copiar la información y descartar los originales como material contaminado. 2. Derrames sobre la mesada de trabajo. - Avisar de inmediato a todos los presentes y evitar el ingreso de cualquier persona a la zona afectada. - Colocarse la protección adecuada (bata y delantal de plástico, máscara respiratoria, guantes de látex). - Contener el derrame mediante papel absorbente, polvos (absorbentes sanitarios del tipo de diatomeas u otros). -Aplicar el desinfectante desde el borde hacia el centro del derrame [para superficies metálicas utilizar etanol 70%, para pisos, emplear hipoclorito de sodio g/l (1-2%) de cloro activo] y dejar actuar durante 30 minutos. -Limpiar con agua y detergente. -Desinfectar nuevamente.

7 Si bien la mayoría de los trabajadores de la salud reconoce la importancia del lavado de manos, la MAYORÍA NO LO PRACTICA!!! El lavados de manos consiste en un procedimiento que implica unos segundos -minuto necesarios para una buena antisepsia de manos por frotación que debe realizarse en todos los ámbitos, y en especial en los lugares de atención primaria (guardias, consultorios) y centros de internación para prevenir infecciones ( nosocomiales) Debe ser llevada a cabo con una técnica adecuada y efectiva para ANTES y DESPUES de las jornadas laborales en particular en determinadas actividades vinculadas a la ámbito salud y así eliminar algunos microorganismos que pueden ocasionar algún perjuic

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10 ACTIVIDADES DEL TRABAJO PRACTICO N 1: OBJETIVOS: - Evidenciar la importancia del lavado de manos - Preparación y uso correcto de la solución de lavandina MATERIALES: - Placa de petri - Agar Nutritivo - Lavandina comercial - Jabón (líquido y en pan) - Alcohol en gel - Solución iodada PROCEDIMIENTO: A) PREPARACIÓN DE LA SOLUCION DE HIPOCLORITO DE SODIO AL 1% Y AL 10% 1% = 1 parte lavadina + 99 partes de agua corriente 10% = 1 parte lavandina + 9 partes de agua corriente B) LAVADO DE MANOS 1) Dividir la placa de Agar nutritivo a la mitad, y rotulando ANTES Y DESPUES

11 2) Tocar suavemente el agar con las yemas de los dedos (sin lavado previo) el sector rotulado ANTES 3) A continuación cada grupo procederá al Lavado de manos con una de las siguientes opciones: - Jabón líquido - Jabón en pan - Alcohol en gel - Solución iodada 4) Tocar nuevamente la placa de agar nutritivo en la sección rotulada DESPUES con las yemas de los dedos limpios 5) Observación a las 24 hs de las placas y concluir los resultados obtenidos C) EVALUAR CONTAMINACION AMBIENTAL 1) Colocar una placa de agar nutritivo abierta sobre la mesada durante todo el desarrollo del trabajo práctico 2) Se cierra la misma al finalizar el TP y se incubará con el resto de las placas utilizadas por 24 hs 3) Evaluación de los resultados