INFORME RESUMEN. 1. INOCULANTE DE HONGOS FORMADORES DE ENDOMICORRIZAS : ARAGORN Gi4

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1 INFORME RESUMEN RESULTADOS DE ENSAYOS CON DOS INOCULANTES, ARAGORN Gi4 Y MESTEÑO. EVALUACIÓN DE SU UTILIDAD PARA LA PRODUCCIÓN Y SANIDAD VEGETAL DE VARIADOS CULTIVOS Y SU COMERCIALIZACIÓN EN EL MERCADO ESPAÑOL Sonia González Méndez (Laboratorio Agroforestal Redes Microbianas. Victoria Cadahía Bielza (Blue Heron Plant BioDynamics, SL.) J. I. Cadahía Bielza (Blue Heron Plant BioDynamics, SL. LUGAR: Santa Fé (Granada) y Madrid. FECHA: Abril a Junio de 2011 CULTIVOS: Arroz, Pimiento, Tomate y Ray-grass INTRODUCCIÓN 1. INOCULANTE DE HONGOS FORMADORES DE ENDOMICORRIZAS : ARAGORN Gi4 CARACTERÍSTICAS Y COMPOSICIÓN DEL PRODUCTO El producto se halla compuesto de una fase orgánica que contiene las esporas, restos de hifas y raíces. En observación directa de las esporas, éstas se ven vitales y turgentes, lo cual indica un material de elevada calidad, pertenecientes al género Glomus sp., que son hongos típicos formadores de micorrizas endógenas arbusculares (endomicorrizas). Las especies que pertenecen a este grupo, son cosmopolitas y poseen numerosos antecedentes de utilidad en aplicaciones agrícolas, y en producción y sanidad vegetal, ya que permiten su empleo como hongos micorrizantes en numerosas especies de plantas. El producto comercial se presenta en forma de Polvo Mojable (WP) de partículas sólidas insolubles, de tamaño menor de 150 micras, por lo que puede ser aplicado mediante sistemas de pulverización estándar, con boquillas y en sistemas de riego por goteo. El usuario deberá conseguir un reparto adecuado y una colocación en contacto o en las proximidades de las raíces de las plantas, para que formen las beneficiosas micorrizas. Se ha demostrado que el producto debe mantenerse en agitación antes y durante su aplicación para un mejor reparto del inoculante, ya que las esporas tienden a flotar en el agua. Las muestras estudiadas de Aragorn Gi4 contienen un recuento de esporas de más de esporas por cada gramo de inoculante. Al ser microorganismos simbiontes, y si se dan las circunstancias favorables y los factores adecuados (genéticos, edáficos y ambientales), es cuando se

2 produce la micorrización entre planta y hongo, lo que se traduce en un beneficio mutuo entre el hongo micorrícico y la planta hospedante. Esta simbiosis es una asociación estable y permanente entre el hongo y la raíz de la planta, con beneficio mutuo. La vida de las micorrizas es permanente mientras vive la planta huésped, y se den las condiciones de vida mínimas, y se diferencian de las rizobacterias de Mesteño, por su tipo de vida saprofítica y relativamente efímera, aunque altamente eficaz, según condiciones. Por ello, la combinación de ambas, da como resultado una asociación altamente productiva y de trabajo en equipo, que ofrece numerosas sinergias y beneficios. Por su naturaleza y composición, Aragorn Gi4 puede ser certificado como producto apto para su empleo en Agricultura Ecológica conforme al Anexo II parte A del Reglamento (CE) Nº 2092/91. Entre los beneficios más relevantes que ocasionan a su planta huésped o al suelo donde se encuentran, están: - Mejora en la germinación de las semillas - Reducción de problemas fitosanitarios en semilleros - Rápida superación del estrés post-trasplante - Mayor sobrevivencia de las plantas en el campo - Mejor crecimiento en suelos pobres - Mejora la absorción de agua N, P, K, Ca y micronutrientes - Reducción del estrés ocasionado por cambios de humedad y temperatura - Protección frente al ataque de agentes patógenos de la raíz - Aumento del vigor de la planta - Rehabilita suelos cansados y biológicamente pobres RECOMENDACIONES SOBRE LA DOSIS Y MODO DE EMPLEO Se recomienda la aplicación de Aragorn Gi4 seleccionando la cantidad de inoculante a utilizar según la siguiente tabla: DOSIS GENERALES TAMAÑO (alvéolo, Nº ESPORAS por Nº plantas tratadas con 50 maceta o cepellón) semilla o planta gramos Aragorn Gi cm cm cm cm INOCULANTE A BASE DE UN CONJUNTO BACTERIANO: MESTEÑO CARACTERÍSTICAS Y COMPOSICIÓN DEL PRODUCTO Producto líquido translúcido, constituido básicamente por una suspensión de una mezcla de bacterias beneficiosas de ocurrencia natural en el suelo. Se mezcla fácilmente con el agua tras una ligera agitación.

3 Fueron identificadas al menos 5 cepas bacterianas de especies distintas, que entre todas ellas suman una cantidad superior a: 10 x UFC/ml. (*) UFC: Unidades Formadoras de Colonias, o capacidad que tiene una unidad del inoculante para reproducirse y formar una nueva colonia. Con la aplicación de esta mezcla equilibrada del conjunto bacteriano Mesteño, se consiguen importantes sinergias y la potenciación de importantes ventajas y beneficios sobre el cultivo hospedante, debido fundamentalmente a la estricta selección de bacterias eficientes y a su elevada capacidad de reproducción que les permite en pocas horas colonizar la rizosfera y actuar como un pool con poderosas ventajas frente a lo que se dispone actualmente en el mercado español. Este conjunto equilibrado de especies y cepas de bacterias edáficas benéficas, de las que no se conocen efectos adversos sobre el ser humano, animales o el ambiente, no son patogénicas para las plantas, y se halla aprobado como insumo apto para Agricultura Ecológica por la WSDA-OFP y USEPA (U.S. Environmental Protection Agency). En la UE, éste conjunto de cepas se certifica como producto apto para su empleo en Agricultura Ecológica conforme al Anexo II parte A del Reglamento (CE) Nº 2092/91. Muchas de ellas, son inhibitorias o antagonistas de hongos de suelo, tales como: Fusarium oxysporum, Rhizoctonia spp. y otras especies fitopatógenas. Otra ventaja añadida, es que Mesteño ha demostrado ser compatible con la mayoría de fungicidas de síntesis de suelo, y precisamente, algunos de los mejores resultados se obtuvieron combinando aplicaciones moderadas de Mesteño con dosis moderadas del fungicida Metalaxil. El inoculante Mesteño, también posee un fuerte efecto antagonista, disuasor y preventivo de varias especies de nematodos formadores de agallas y nódulos (Meleydogine sp, Heterodera spp. y Pratylenchus sp. entre otros), y ello lo soportan las numerosas pruebas, ensayos y estudios realizadas, en plantas de tomate, pimiento, pepino, cebolla y zanahoria, tanto el vigor de las plantas, la producción en Kg/Ha de cosecha, como el control absoluto de las poblaciones de nematodos, fueron mucho mejores en las parcelas inoculadas con Mesteño. Adicionalmente, algunas de estas bacterias, se sabe que pueden degradar plaguicidas agrícolas y reducir el cromo hexavalente (Cr VI), y otras son capaces de degradar también hidrocarburos aromáticos policíclicos y otros compuestos orgánicos contaminantes. Otras tienen propiedades útiles para la bioremediación de suelos, y otras son productoras de antibióticos, lo que dificulta o inhibe el establecimiento de poblaciones de nematodos u otras bacterias u hongos patógenos de las plantas.

4 Como ocurre con la mayoría de las bacterias radiculares (rizobacterias), los mejores resultados se obtienen cuando el inoculante se aplica en las semillas, en las raíces o en las proximidades de éstas. La capacidad de sobrevivir en condiciones de aerobiosis o anaerobiosis, les amplía el espectro pudiendo considerarse su uso tanto para suelos aireados como en otros con problemas de oxigenación y asfixia radicular. Entre los beneficios más relevantes que ocasionan a su planta huésped y al suelo donde se encuentran, están: - Acelera la germinación de las semillas - Reduce drásticamente los problemas fitosanitarios en semilleros - Ofrece mayor sobrevivencia de las plántulas en el campo - Mejor crecimiento en suelos pobres - Dinamiza los ciclos de nutrientes y micronutrientes favoreciendo su absorción y disponibilidad por la planta - Ofrece mayor protección en campo frente al ataque de agentes patógenos de la raíz (hongos, bacterias y nematodos) - Aumenta el vigor de las plantas, por su acción de promoción vegetativa y radicular (PGPR) - Rehabilita suelos cansados y biológicamente pobres RECOMENDACIONES SOBRE LA DOSIS Y MODO DE EMPLEO Se recomienda la aplicación de Mesteño mediante maquinaria estándar de pulverización terrestre o mochila pulverizadora con boquillas estándar. También se recomienda que el producto se mantenga en agitación antes y durante su aplicación para un reparto más homogéneo del inoculante, ya que las bacterias tienden a decantarse y posarse en el fondo del envase, cuba o tanque. También puede ser aplicado mediante sistemas de riego localizado y goteros integrados o estándar. Como las rizobacterias introducidas en un suelo suelen sufrir una reducción en sus poblaciones tras un periodo de actividad y crecimiento activo en el suelo, según sean las condiciones y características del mismo, se recomienda la aplicación de una dosis recordatoria a los 20 días después de la primera, o en cultivos de ciclo largo, y según condiciones se podrán aplicar dosis de recuerdo cada 20 a 30 días. El producto Mesteño ejerce un efecto estimulante ó PGPR (Plant Growth Promoter) sobre las plantas y actúa como potenciador de la micorrización, manifestando un gran sinergismo con Aragorn Gi4. Aunque en el caso de Mesteño, se ha confirmado una relación directa (aritmética) entre la cantidad de inóculo (dosis empleada) y la capacidad y respuesta de la planta a los beneficios que le provocan, desde un punto de vista técnico-comercial, se recomienda el empleo de una dosis de entre 0,2 ml y 4 ml por planta (hasta 1,0 m de altura), que variarán dependiendo de las condiciones

5 particulares del cultivo a tratar y del tamaño de los cepellones o del bulbo radicular y del tamaño de la parte aérea. Es decir, según sea el historial de la parcela (suelo, agua, etc.) en cuanto a endemismos y problemas fitopatológicos, se deberá ajustar la dosis de los inoculantes hasta un máximo de 8-10 L/Ha de Mesteño y esporas de Aragorn Gi4/planta (en producción). RESUMEN DE LOS ESTUDIOS DE ACTIVIDAD PGPR SOBRE LOS CULTIVOS Y EVALUACIÓN DE LA SOBREVIVENCIA CON LOS INOCULANTES ARAGORN GI4 Y MESTEÑO. Para estudiar la actividad como promotor del crecimiento vegetativo de las plantas ó efecto PGPR, se llevó a cabo una serie de ensayos sobre cultivo de plantas seleccionadas en contenedor, e inoculadas con los productos y crecidas en cámara de cultivo. Se utilizaron diferentes especies de plantas y varias dosis de producto, así como varios tratamientos: el control sin tratar, el inoculado con Aragorn Gi4, el inoculado con Mesteño y el de la inoculación conjunta de Mesteño (conjunto bacteriano) con Aragorn Gi4 (inoculante a base de hongos micorrícicos). I. ARROZ Conclusiones del ensayo en arroz En la FIGURA 1 (debajo) se muestra en detalle la diferencia en el vigor y precocidad de germinación en las plantas tratadas con Aragorn Gi4 + Mesteño cuando se inocula en el hueco donde están los dos productos en estrecho contacto con la semilla (T-1). T1 T4 T5

6 Resumen Utilidad de dos inoculantes, Aragorn Gi4 y Mesteño en usos y cultivos agrícolas. Julio de 2011 Figura 1: Se pone en evidencia que el tratamiento 1 (T-1) es el que mejores resultados ofrece, es decir, la mezcla de Aragorn Gi4 a las dosis de 20 esporas/alveolo y 0,5 ml de Mesteño/alvéolo. FIGURA 2 Figura 2: Se constata una continuidad de los efectos sobre el crecimiento observados desde la emergencia de las plántulas (a 15 días desde el inicio del ensayo). Izda.: T-1(Aragorn Gi4 + Mesteño a dosis alta); Dcha.: T-5 (Testigo Sin I.) Otro de los aspectos relevantes que se han confirmado en este ensayo, es que el consorcio o mix de bacterias que componen Mesteño es altamente compatible con los hongos micorrícicos de Aragorn Gi4 y sus efectos se potencian al inocularlos de forma conjunta. En aquellos países o parcelas donde el arroz se cultiva desde el trasplante, puede llevarse a cabo con éxito esta sencilla inoculación. II. TOMATE Se inocularon plantas de tomate en el momento del trasplante simulando un sistema de riego por goteo convencional. Tratamientos: 1- Mesteño (0,5 ml/planta) + Aragorn Gi4 (20 esporas/planta), 2- Aragorn Gi4 (20 esporas/planta), 3- Mesteño (0,5 ml/planta), 4- Control sin inocular. FIGURA

7 Figura 3: El tratamiento 1 muestra un crecimiento preferencial de las raíces y del hongo en el sustrato, activando el vigor de la planta y evitando contaminaciones no deseadas. Para evaluar el efecto de promoción del crecimiento vegetativo (PGPR), se midió la altura de las plantas a los 0, 15 y 30 días después de la inoculación de las plántulas en el momento del trasplante. A los 30 días se cosecharon plantas de cada tratamiento y se midió: altura, peso de parte aérea y peso de raíces. Se realizaron tres repeticiones por cada tratamiento. TRATAMIENTO Altura (cm) Tiempo 0 Altura (cm) Tiempo 15 días Altura (cm) Tiempo 30 días Peso P. aérea (g) T+30 Peso Raíz (g) T M + A 14,5 19,5 25,4 2,31 1,65 2- A 13,7 19,2 23,3 1,98 1,54 3- M 15,2 20,6 23,7 1,96 1,48 4- Control 14,4 18,6 21,5 1,56 1,42 Leyenda: M= Mesteño; A= Aragorn Gi4 III. RAY GRASS Se utilizaron semillas cespitosas de Ray Grass. A los 30 días se realizaron observaciones y se evaluaron: Altura, vigor y color de las plantas. Todas las plantas de todos los tratamientos reflejaban un buen estado nutricional, y sin embargo presentaban diferencias en tamaño, vigor y color, cuando se las comparaba con el control sin inocular. FIGURA 4 T A A + M Figura 4.: Ray grass inoculados desde semilla, Izquierda: Testigo sin inocular, Medio: Aragorn Gi4 (20 esporas/macetita), Derecha: Aragorn Gi4 (20 esporas/maceta) + Mesteño (0,5 ml/maceta) A los 40 días se recolectaron las plantas de cada tratamiento y se determinó la tasa de micorrización. En este momento (T+40 DAT), la tasa de micorrización sólo manifiesta el estado de la colonización recién iniciada, la micorrización se consolida hacia los 60 días y de acuerdo al estado actual de las plantas se prevé que el proceso continúe su estimulación en las próximas semanas.

8 Los resultados se pueden observar en las siguientes fotografías tomadas al microscopio: FIGURA 5 A B C A D Figura 5.: En la Fig. 5.1 (A) se observa una espora del inoculante Aragorn Gi4 germinada, emitiendo múltiples tubos germinativos, en contacto con la superficie de las raíces y se corresponde con el tratamiento 2 inoculado solo con Aragorn Gi4. En la Fig. 5.2 (B), se observan esporas germinadas, pero este tratamiento 3 recibió AragornGi4 + Mesteño y se observa una estimulación sobre la germinación y desarrollo de las esporas en contacto con las raíces muy superior; inclusive se observan las estructuras de las Fig. 5.3 (C) y 5.4 (D) que son vesículas y se corresponden con morfologías típicas micorrícicas que evidencian una micorrización ya establecida, situación que no se da en el tratamiento solo con Aragorn Gi4 el cual requiere más tiempo para llevar a cabo este proceso. IV. PIMIENTO Se realizaron tratamientos tanto en plantas cultivadas de pimiento (italiano) a partir de semillas inoculadas en el momento de la siembra, como en plantas inoculadas en el momento del trasplante.

9 FIGURA 6 Figura 6: Pimientos inoculados en el momento del trasplante según los siguientes tratamientos: 1- Control sin inocular, 2- Mesteño (0,2 ml/planta); 3- Mesteño (0,5 ml/planta) y 4- Aragorn Gi4 (20 esporas/planta) + Mesteño (0,5 ml/planta) CONCLUSIONES De los resultados obtenidos en estos ensayos con plantas de arroz, tomate, pimiento y ray-grass, y de la información obtenida de los resultados de estudios en otros países donde se comercializa Aragorn Gi4 y Mesteño, se puede concluir, que ambos inoculantes poseen una calidad excelente, una gran capacidad de colonización y de causar efectos beneficiosos para las plantas huésped tratadas, y finalmente se demuestra en todos los estudios que la mezcla de Aragorn Gi4 y Mesteño, por sus sinergias y potencial, ofrece los mejores resultados y beneficios para las plantas tratadas. Los beneficios serán tanto más evidentes, cuanto: a) Mayor compatibilidad exista entre la planta huésped y el inoculante. b) Las condiciones del suelo sean más favorables para la inoculación y la sobrevivencia c) Las prácticas culturales y agroquímicas sean más respetuosas y compatibles con los inoculantes Según todo lo anterior, se concluye que ambos inoculantes cumplen sobradamente con los parámetros de calidad y utilidad mínimos exigidos para el mercado agroquímico y son altamente competitivos en cuanto a eficacia y utilidad, con los escasos inoculantes de calidad y de características similares, que se encuentran en el mercado Español....ooo0ooo...