TRABAJO PRÁCTICO N 6 FERTILIZANTES BIOLÓGICOS: DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD DE INOCULANTES

Transcripción

1 TRABAJO PRÁCTICO N 6 FERTILIZANTES BIOLÓGICOS: DESARROLLO Y CONTROL DE CALIDAD DE INOCULANTES

2 Objetivos Conocer los parámetros para la selección de cepas. Conocer las metodologías y procedimientos microbiológicos para la evaluación y control de los inoculantes más utilizados en la actualidad. Adquirir habilidades y/o destrezas para la evaluación de la inoculación a campo. Valorar la responsabilidad, interacción, cooperación y respeto para fomentar una eficiente labor grupal.

3 Fertilizantes Fertilizantes no biológicos Fertilizantes biológicos Formulados con compuestos químicos orgánicos: compost, lombricompuesto, estiércol, abonos verdes, etc. Formulados con organismos vivos Formulados con compuestos inorgánicos: fosfato de amonio, nitrato de amonio, etc.

4 Inoculantes o Fertilizantes biológicos Productos que contienen uno o varios microorganismos como principal componente Microorganismos Viables Benéficos Seleccionados Para favorecer la nutrición y/o promover el crecimiento de las plantas.

5 Inoculantes o Fertilizantes biológicos PGPR (promotores del crecimiento) Fijadores de N 2 Microorganismos solubilizadores de P de vida libre Hongos micorríticos Mezcla de microorganismos no definidos Rizobios Azospirillum sp. Anabaena INOCULANTE Fertilizante biológico que se aplica a la semilla en el momento de la siembra

6 Clasificación de Inoculantes Según el soporte Líquidos Sólidos (turba) Según la cantidad de cepas que contengan Una: Monocepa Varias: Multicepa

7 Inoculante efectivo Formulado con microorganismos seleccionados por su capacidad fijadora. Microorganismos específicos para el cultivo a tratar y adaptados a las condiciones ambientales del lugar del cultivo. Con un número adecuado de microorganismos. Ley Nº 20466/80. Presentar un soporte que proteja al rizobio, de fácil aplicación y buena adherencia a la semilla. No deben poseer contaminantes. Envase adecuado y con instrucciones claras

8 Inoculante efectivo CEPA + SOPORTE = CALIDAD Eficiencia (Especificidad y adaptación) que garantice viabilidad de microorganismos

9 Desarrollo de un inoculante para leguminosas nódulos cortar la raíz lavar seleccionar nódulos turgentes extraer los nódulos macerar en 1 ml de H 2 O estéril enjuagar con H 2 O estéril desinfectar con H 2 O 2 (5 minutos) incubar colorear (Gram -) estriar en medio YEM repicar (pico de flauta) incubar conservar

10 Aislamiento de microorganismos: rizobios Raíz de leguminosa 1º Extraer los nódulos 3º Enjuagar con H 2 O estéril 2º Desinfectar con H 2 O 2 (20%) 5 minutos

11 Aislamiento de microorganismos: rizobios 4º 5º Colocar los nódulos en un tubo con 1mL de agua estéril Macerar con varilla de vidrio 8º Incubar a C 7º Estriar en medio YEM 6º Extraer una alícuota

12 Aislamiento de microorganismos: rizobios Cultivo de rizobio 9º Colorear y observar 11º Incubar y conservar 10º Repicar a pico de flauta

13 Producción de inoculante Primera etapa: Selección de cepas Testigo medio sin N sin inocular Control medio sin N inoculado con cepa eficiente Tratamientos medio sin N inoculados con cepas a testear Testigo medio con N sin inocular

14 Selección de cepas: parámetros de evaluación Ensayos de infectividad: Cantidad de nódulos Ubicación en la raíz

15 Selección de cepas: parámetros de evaluación Ensayos de infectividad: Tamaño de nódulos Calidad al corte (color rojo) Actividad fijadora de nitrógeno.

16 Selección de cepas: parámetros de evaluación Ensayos de efectividad: Nodulación Materia seca % de nitrógeno Evaluación final a campo: Nodulación Peso seco de nódulos % de nitrógeno Rendimiento en grano

17 Producción de inoculante Segunda etapa: Preparación a nivel industrial

18 Producción de inoculantes Mangueras Tapones Filtro de aire Biodigestores Mechero Aireador

19 Planta industrial Producción de inoculantes

20 Control de calidad de inoculantes Para inoculante sólido suspensión Inoculante sólido 1 ml inoculante sólido (X g + X ml de solución salina estéril) 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 9 ml de solución salina estéril ml 1 ml 1 ml medio Y.E.M. incubar calcular

21 Para inoculante líquido Control de calidad de inoculantes

22 Preparación del inoculante Inoculación a campo 1º - Dilución: para una distribución más homogénea 2º - El volumen total de líquido (agua + inoculante + curasemilla) para la dilución, depende del tamaño de las semillas: semillas grandes: hasta 2,4 litros cada 100 kg de semilla (Soja: 900 ml / 100 kg) semillas chicas: hasta 4 litros cada 100 kg de semillas (Alfalfa: 1000 ml / 100 kg)

23 Inoculación a campo Recomendaciones generales Realizar la inoculación a la sombra. Inocular la cantidad necesaria para un día de siembra. Si debe aplicar curasemillas, realice la mezcla de ambos productos respetando el volumen de agua y sembrar inmediatamente.

24 Inoculación a campo No conservar el inoculante mezclado con el curasemillas durante mucho tiempo. No usar herramientas o recipientes que hayan estado en contacto con combustibles o pesticidas.

25 Si en la inoculación también aplicamos curasemillas, debemos respetar las normas para manejo seguro de agroquímicos Inoculación a campo

26 Inoculación a campo Utilizar protección en rostro y cuerpo No mezclar y/o conservar los productos en botellas de bebida

27 TRABAJO DE LABORATORIO 1. Aislamiento de rizobios y visualización de bacteroides a partir de nódulos de leguminosas. a- Cortar las raíces de plantas noduladas. b- Lavar las raíces con cuidado y sin romper los nódulos. c- Extraer de 5 a 10 nódulos turgentes d- Desinfectar los nódulos extraídos con agua oxigenada durante 5 minutos.

28 e- Enjuagar los nódulos con agua destilada estéril. f- Macerar los nódulos extraídos en 2 ml de agua destilada estéril. g- Realizar estrías en medio Y.E.M. e incubar durante 7 días a C. h- A partir del macerado realizar una coloración de Gram. i- Visualizar el carácter Gram y la forma de los bacteroides.

29 TRABAJO DE LABORATORIO Nódulos (A; B; C) y bacteroides (D; E; F) de P. sativum (arveja).

30 TRABAJO DE LABORATORIO 2. Control de inoculantes para soja. a- Bajo condiciones de asepsia, realizar la siembra de 2 inoculantes para soja. b- Realizar diluciones al décimo (1/10) en solución salina estéril. c- Sembrar 1 ml de las últimas tres diluciones en cajas de Petri estériles, utilizando 20 ml de medio Y.E.M. previamente fundido y atemperado a C. d- Incubar durante 7 días a C.