Cultivo Puro. Técnicas de aislamiento Mantenimiento y preservación de cultivos puros Morfología macroscópica Morfología microscópica

Transcripción

1 Cultivo Puro Técnicas de aislamiento Mantenimiento y preservación de cultivos puros Morfología macroscópica Morfología microscópica

2 Definición El cultivo puro representa las condiciones artificiales para el desarrollo de las bacterias y otros microorganismos y las condiciones impuestas a los microorganismos mediante el manejo del laboratorio. Para determinar las características de especies concretas de microorganismos, es imperativo que el organismo se aislé y se desarrollo en el laboratorio como un cultivo libre de otras especies.

3 Método para aislar cultivos puros. Técnica de siembra por estrías en placa Técnica por difusión en placa Técnicas de aislamiento Técnica de la placa vertida Técnica del enriquecimiento del cultivo Técnica de las diluciones en serie Aislamiento de una sola bacteria

4 Técnicas de siembra por estrías en placa Con un asa bacteriológica, se pasa una porción de la muestra a la superficie de un medio de cultivo hecho a base de agar y se siembra en el medio por estrías en cuadrantes.

5 Técnicas de siembra por difusión en placa Para sembrar por difusión en placa, por lo común se usa una varilla de cristal estéril para esparcir la muestra. Esta operación hace posible adelgazar la muestra de tal manera que en la superficie del agar quedan las bacterias separadas unas de otras.

6 Técnicas de siembra en placa Una porción de una colonia que se pase a un medio de cultivo en tubo viene a ser un cultivo puro. Después de una incubación apropiada, el desarrollo de cada cultivo se observa al microscopio o mediante cultivo para verificar que es puro.

7 Técnicas de siembra en placa Una porción de una colonia que se pase a un medio de cultivo en tubo viene a ser un cultivo puro. Después de una incubación apropiada, el desarrollo de cada cultivo se observa al microscopio o mediante cultivo para verificar que es puro.

8 Técnica de la placa vertida El principio de la técnica de la placa vertida es la dilución (adelgazamiento) de la muestra en tubos. El medio se mantiene al estado líquido a una temperatura de 45 52º C para permitir que el inóculo se distribuya adecuadamente en el medio. Esta técnica se hace en forma cualitativa o cuantitativa.

9 Técnica de la placa vertida

10 Técnica del enriquecimiento del cultivo. El principio de esta técnica, es procurar un ambiente de cultivo diseñado (medio de composición conocida y condiciones específicas de incubación) que pueda favorecer el desarrollo de cierto tipo concreto de bacterias que necesitemos pero que no sea adecuado para las demás

11 Técnica del enriquecimiento del cultivo. Los medios de enriquecimiento se usan generalmente cuando el tipo de bacteria que queremos aislar se encuentra en muy pequeñas cantidades y se desarrolla con mayor lentitud que muchas de las otras especies presentes en el inóculo.

12 Técnica del enriquecimiento del cultivo.

13 Técnica de las diluciones en serie. Se realiza mediante diluciones seriadas. Se basa en cuando la muestra esté muy diluida contendrá solamente la bacteria que buscamos. O dependiendo de la dilución realizada se aislara el microorganismo adecuado.

14 Técnica de las diluciones en serie. Dilución Tipo de microorganismo 10-1 a 10-3 Hongos 10-4 a 10-6 Levaduras 10-7 a Bacterias Para el aislamiento de microorganismos se puede aplicar la técnica de aislamiento por estría o por extensión en superficie (se trasfiere de 0.1 a 0.5 ml.)

15 Técnica de aislamiento de una sola célula Micromanipulador y microscopio equipado con agujas que se pueden poner sobre objetos de unos cuantos micrómetros de tamaño.

16 Métodos de preservación Resiembra periódica a medios frescos. Depende de el medio de cultivo Temperatura propia para mantener los cultivos El tiempo de resiembra. Preservación de cultivos con una capa de aceite mineral. Para cultivos en agar inclinado el aceite deberá cubrir mas o menos 1.5 cm. Del pico de flauta del agar inclinado.

17 Métodos de preservación Almacenamiento a temperaturas muy bajas. Nitrógeno líquido (temperatura de -196º C). Las células se congelan con un agente protector (glicerol o dimetil sulfoxido). Colecciones de cultivos en distintas naciones. Kral (Praga) ATCC (Rockville, Maryland EE.UU.) Instituto Pasteur (Paris, Francia) BTCC (Londres, Inglaterra) Instituto Nageo (Tokio, Japón)

18 Número de cultivos de varias colecciones del mundo por regiones. ALGAS BACTERIAS HONGOS Protozoarios LEVADURAS África (11) Asia (30) Australia y Nueva Zelanda (39) Europa Oriental y Rusia (38) Europa Occidental (100) REGIÓN (COLECCIONES) América Latina (23) Medio Oriente (13) América del Norte (67) 232