Los pasos a seguir para la toma de material a partir de abscesos de origen bucal son:

Transcripción

1 Trabajos Prácticos Nº 6 y 7 Diagnóstico microbiológico directo Objetivos. Describir la importancia de la toma de muestra en el diagnóstico etiológico de un absceso de origen bucal. Describir los requisitos de una toma de material de un absceso de origen bucal para arribar a un correcto diagnóstico etiológico microbiológico. Describir los requisitos del envío de muestras biológicas al laboratorio microbiológico en condiciones de bioseguridad. Describir la marcha diagnóstica para cocos piógenos. Contenidos: Requisitos para arribar a un correcto diagnóstico etiológico microbiológico. Toma de muestra por punción de abscesos de origen bucal. Condiciones para el envío de la muestra al laboratorio microbiológico. Marcha diagnóstica para cocos piógenos. Trabajo Práctico Nº 6. En la práctica odontológica las lesiones bucales piógenas se tratan con antibióticos, muchas veces administrados en forma empírica, cuando lo ideal sería realizar siempre que sea posible una correcta toma de material, el posterior aislamiento del agente etiológico y si es necesario un antibiograma. De esta forma se solucionarían dos problemas importantes que son: la persistencia en forma crónica de las lesiones por no hallar el/los agente/s etiológico/s y el aumento de las resistencias bacterianas adquiridas a los antimicrobianos selectivos. Pasos para arribar al diagnóstico etiológico de un absceso de origen bucal: En el consultorio a) Historia clínica médico-odontológica completa: Historia odontológica con diagnóstico presuntivo. Planilla de pedido de investigación microbiológica. b) Toma de material del absceso de origen bucal. b) Toma de material purulento b.1.-toma de muestra por punción de abscesos de origen bucal. Los pasos a seguir para la toma de material a partir de abscesos de origen bucal son: Realizar un buche de agua destilada estéril para disminuir por arrastre la carga microbiana bucal.

2 Realizar el aislamiento relativo del sitio preciso de la toma de muestra con rollos de algodón. Realizar la antisepsia de la zona del proceso purulento con gasa embebida en povidona yodo al 10%. Dejar actuar el antiséptico durante un minuto y retirar por arrastre con gasa embebida en agua destilada estéril para no distorsionar el resultado. En la zona más reblandecida del proceso realizar la toma de material por punción aspirativa para la obtención de cómo mínimo 0.5 a 1 ml.de material purulento. Colocar la muestra en un tubo conteniendo medio de transporte TAB y VMGAIII. Realizar al menos dos extendidos en portaobjetos estériles. Remitir las muestras al laboratorio a la brevedad. (No más de una hora de efectuada la recolección) a temperatura ambiente. Requisitos para arribar a un correcto diagnóstico etiológico microbiológico: Realizar un diagnóstico clínico presuntivo correcto. Consultar al laboratorio al que se enviara la muestra acerca de las posibilidades de diagnosticar microorganismos aerobios y anaerobios y que medios de transporte debe utilizar. Contar en el consultorio con los elementos adecuados para la toma de la muestra. Se utilizan jeringa descartable, agua destilada estéril, medios de transporte, tubos de ensayo estériles, portaobjetos estériles. Enviar correctamente la muestra en condiciones de bioseguridad. Realizar la toma de la muestra en el momento oportuno: La toma de material se realiza antes de medicar al paciente con antibiótico. Si el paciente se encuentra en tratamiento antibiótico por éste u otro proceso infeccioso, la muestra debe tomarse luego de 72 hs. de haber finalizado o suspendido el tratamiento. Realizar la toma de la muestra en el sitio adecuado: Zona de mayor reblandecimiento. Por punción a través de mucosa o piel sana. No obtener la muestra por drenaje. Cantidad mínima de material purulento necesaria: 0,5-1 ml. de muestra. Transporte: remitir al laboratorio en medio de transporte. Corroborar el cierre completo del mismo y conservarlo a temperatura ambiente. La muestra debe ser enviada en forma inmediata. De no ser posible, conservar a temperatura ambiente hasta 12 hs. en medios de transporte especiales (Ej: VMGA III).

3 Adjuntar a la toma de material la planilla de pedido de diagnóstico microbiológico completa. Interpretar los resultados que envía el laboratorio microbiológico. Remisión en condiciones de bioseguridad En transporte de sustancias infecciosas o muestras biológicas los riesgos deben minimizarse mediante la utilización de un embalaje adecuado, el que proporcionará las barreras necesarias y suficientes para evitar la fuga del material al exterior. El embalaje a utilizar es el sistema de envasado triple, que comprenda las tres capas siguientes: RECIPIENTE PRIMARIO: el cuál debe ser IMPERMEABLE y es el que contiene la muestra. El recipiente se envuelve en material absorbente suficiente para absorber todo el fluido en caso de rotura o derrame. EMBALAJE/ENVASE SECUNDARIO: también impermeable y duradero que encierra y protege el recipiente primario. Se pueden colocar varios recipientes primarios envueltos en el embalaje secundario. En este también se debe colocar los dos extendidos realizados en el momento de la toma. EMBALAJE/ENVASE TERCIARIO O EXTERIOR: Los embalajes secundarios se colocan dentro del envase terciario o exterior. Su función es proteger el contenido de los factores exteriores de daño durante su tránsito o transporte. El recipiente debe tener el logo de riesgo biológico y una etiqueta en la cual se coloque la dirección completa del laboratorio al cual se remitirá la muestra.

4 Pasos para arribar al diagnóstico etiológico de una lesión bucal purulenta en el laboratorio bacteriológico: A partir de la toma de material purulento se describirán las técnicas bacteriológicas utilizadas en el laboratorio para iniciar una marcha diagnóstica microbiológica: Desarrollo del T.P.Nº 6 Examen microscópico directo: coloraciones de Gram de los extendidos remitidos. Siembras del material purulento en medios de cultivos según el diagnóstico presuntivo, en medios de cultivos líquidos y sólidos comunes (agar nutritivo), enriquecidos (agar sangre) y selectivos en condiciones de aerobiosis, microaerofilia y anaerobiosis estricta. Obtención de cultivos puros, por repique o transplante de las colonias obtenidas a partir de la siembra directa del material purulento. A. Describir los pasos para arribar al diagnóstico etiológico microbiológico de un absceso de origen bucal. B. Describir la toma de material de un absceso de origen bucal. C. Describir los requisitos para arribar a un correcto diagnóstico etiológico microbiológico. D. Realizar y observar al microscopio coloraciones de Gram de los extendidos microbiológicos directos de un material purulento de un absceso de origen bucal. E. Sembrar el material purulento de un absceso de origen bucal en medios de cultivos líquidos y sólidos comunes (agar nutritivo), en medios enriquecidos (agar sangre) y en medios selectivos en condiciones de aerobiosis, microaerofilia y anaerobiosis estricta. Las actividades A, B y C se realizarán en el aula y la actividad D y E en los laboratorios de TP. MATERIAL PURULENTO EXAMEN MICROSCOPICO GRAM POSITIVO NEGATIVO COCOS BACILOS NO ESPORULADOS COCOS BACILOS Streptococcus spp Staphylococcus spp Actinomyces spp Neisserias spp Enterobacterias o Anaerobios Estrictos

5 Trabajo Práctico Nº 7: 1) Obtención de cultivos puros, por repique o transplante de las colonias obtenidas a partir de la siembra directa del material purulento. 2) Realizar coloración de Gram de cada una de las colonias diferentes aisladas. 3) Realizar una reacción de catalasa a partir de cultivos puros en agar sin sangre. 4) Realizar una reacción de fermentación del manitol.

6 Resumen de marcha diagnóstica para Cocos Piógenos Toma de material (pus) Examen macroscópico Examen microscópico (Cocos Gram +) Sembrar en distintos medios de cultivo por duplicado Caldo nutritivo Agar sin sangre Agar Sangre (Hemólisis,, ) Incubar a 37º C durante 24 a 48 horas en aerobiosis y anaerobiosis Aislamiento/s en agar sin sangre y prueba de Catalasa de c/u de los mismos (+) Staphycoccus spp. (-) Streptococcus spp. Prueba fermentación de Manitol (-) Manitol (+) (-) St. epidermidis (+) St. aureus Preguntas: 1. Describa los pasos a seguir para realizar una adecuada toma de material para diagnóstico microbiológico. 2. Qué objetivos tiene realizar una toma de material de procesos infeccioso para el estudio microbiológico? 3. Mencione que requisitos de deben de tener en cuenta para la correcta realización de una toma de material para diagnóstico microbiológico. 4. Mencione cuáles son las condiciones de bioseguridad para el envío de muestra al laboratorio microbiológico. 5. Mencione la importancia que tiene realizar en el momento de la toma dos extendidos. 6. Mencione las 5 utilidades que tiene realizar la coloración de Gram en los extendidos directos. 7. Mencione que medios debe emplear para sembrar una muestra de material purulento. 8. Mencione por qué debe incubar en aerobiosis, microerofilia y anaerobiosis las siembras realizadas a partir de las muestras clínicas. 9. Qué permite diferenciar los cultivos en agar sangre? 10. Qué utilidad tiene realizar la reacción de catalasa? 11. Por qué no se debe realizar una prueba de catalasa a partir de cultivos en agar sangre? 12. Qué utilidad tiene realizar la reacción de fermentación del manitol?

7 Bibliografía: Negroni M. Microbiología Estomatológica. Fundamentos y guía práctica. Ed Panamericana Capítulo 27, Capitulo de la guía práctica III y IV parte. Ceccotti E. Clínica Estomatológica Ed Panamericana1993