Describir las marchas microbiológicas utilizadas en el diagnóstico etiológico de lesiones purulentas.

Transcripción

1 Trabajo Práctico Nº 7: Diagnóstico Bacteriológico Objetivos: Describir las marchas microbiológicas utilizadas en el diagnóstico etiológico de lesiones purulentas. Contenidos: 1) Presentación de casos problemas basados en casos clínicos reales. 2) Explicación de los siguientes conceptos de diagnóstico bacteriológico para los casos problema: a) toma de muestra y transporte adecuados. b) explicar la importancia de los extendidos directos del material clínico. 3) Explicación de los siguientes conceptos para obtener una identificación bacteriana: a) Observación macroscópica de las colonias aisladas. b) Observación microscópica de tinción de Gram y kinyoun. c) Observación de pruebas de identificación (Catalasa, coagulasa). d) Explicar marchas diagnósticas para cocos piógenos y Actinomyces. 4) Resolución de los casos problemas con la información recopilada. Tareas a realizar durante el trabajo práctico (1 hora) Caso 1: Paciente de 43 años sin antecedentes mórbidos, que comenzó con una tumefacción submandibular luego de la exodoncia de un molar inferior. Se realiza la toma de muestra para el estudio microbiológico y se realizan extendidos del material clínico. La muestra se siembra y luego de la incubación en aerobiosis y anaerobiosis se observa el desarrollo de una bacteria microaerofila en agar sangre, agar BHI y caldo BHI Cómo se tomó la muestra para el estudio microbiológico? 1.2. Cuál es el microorganismo patógeno? Para responder a esta pregunta, los alumnos realizarán: a) Observación macroscópica de las colonias en agar sangre. b) Extendido del caldo BHI y tinción de Gram. Observación microscópica. c) Prueba de catalasa del cultivo en medio agar BHI. d) Se discutirán los resultados.

2 CASO 2: Se recibe la muestra de una lesión con colección purulenta en medio de transporte de un paciente de 56 años que presenta una infección intrabucal fistulizada. También se reciben dos extendidos del material. Se siembra la muestra en medios de cultivos en aerobiosis y en anaerobiosis y se realiza tinción de Gram. En el examen microscópico de la muestra se observan abundantes leucocitos PMN y diplococos Gram positivos Qué medio de transporte emplearía en este caso? 2.2. Qué importancia tiene realizar dos extendidos del material? 2.3. Cuáles son los posibles agentes etiológicos? Podrán desarrollar en los medios de cultivos utilizados? 2.4. Cuál es el agente etiológico? Para responder a esta pregunta, los alumnos realizarán: a) Observación macroscópica de las colonias aerobias en agar sangre y agar manitol salado. b) Extendido del caldo BHI y tinción de Gram c) Prueba de catalasa del medio BHI d) Observación de prueba de coagulasa e) Se discutirán los resultados. CASO 3: Paciente de 60 años que presenta una tumoración extrabucal (Figura 1), que tiende a fistulizar al exterior. Se realiza la punción aspirativa de la lesión purulenta y se observan granos (Figura 2). Se realiza una tinción de Gram y Kinyoun a partir de las colonias (Figura 3) Qué conclusiones obtiene luego de observar las tinciones? 3.2. Cuál es el posible agente etiológico? Figura 2: Grano Figura 1: lesión tumoral extrabucal

3 Figura 3: Medios de cultivos ricos en anaerobiosis por más de 7 dias. Guía para el Diagnóstico Microbiológico bucal En la práctica odontológica las lesiones bucales piógenas se tratan con antibióticos, muchas veces administrados en forma empírica, cuando lo ideal sería realizar siempre que sea posible una correcta toma de material, el posterior aislamiento del agente etiológico y si es necesario un antibiograma. De esta forma se solucionarían dos problemas importantes que son: la persistencia en forma crónica de las lesiones por no hallar el / los agente / s etiológicos y el aumento de las resistencias bacterianas adquiridas. Pasos para arribar al diagnostico etiológico de una lesión bucal purulenta: En el consultorio a) Historia clínica médico-odontológica completa: Historia odontológica con diagnóstico presuntivo. Planilla de pedido de investigación microbiológica. b) Toma de material: Los pasos a seguir para la toma de material a partir de procesos cerrados (sin fístulas) son: Realizar buches agua destilada estéril para disminuir por arrastre la carga microbiana bucal. Realizar antisepsia de la zona del proceso purulento con gasa embebida en povidona yodo.

4 Dejar actuar el antiséptico durante un minuto y retirar por arrastre con gasa embebida en agua destilada estéril para no distorsionar el resultado. En la zona más reblandecida del proceso realizar la toma de material por punción aspirativa para la obtención de cómo mínimo 0.5 a 1 ml.de material purulento. Colocar la muestra en un tubo conteniendo medio de transporte y realizar al menos dos extendidos en portaobjetos estériles. Conservar la muestra a temperatura ambiente y remitirla al laboratorio dentro de las 2 hr. Procesos fistulizados o abiertos: Realizar antisepsia del campo operatorio con gasa embebida en povidona yodo. Dejar actuar el antiséptico durante un minuto y retirar por arrastre con gasa embebida en agua destilada estéril para no distorsionar el resultado. Aspirar el material purulento (mínimo 0.5 a 1 ml.) introduciendo en la fístula una jeringa. No tomar muestra de la boca de la fístula. Colocar la muestra en un tubo conteniendo medio de transporte y realizar al menos dos extendidos en portaobjetos limpios. Conservar la muestra a temperatura ambiente y remitirla al laboratorio dentro de las 2 hr. No transportar ni remitir el material en la jeringa. Los materiales biológicos se transportan en contenedores bioseguros destinados para tal fin. Momento oportuno: La toma de material se realiza antes de medicar al paciente con antibiótico. Si el paciente se encuentra en tratamiento antibiótico por éste u otro proceso infeccioso, la muestra debe tomarse luego de 72 hs de haber finalizado o suspendido el tratamiento. Sitio adecuado: Zona de mayor reblandecimiento. Por punción a través de mucosa o piel sana. No obtener la muestra por drenaje. Instrumental: se utilizan jeringa descartable, tubos de ensayo acondicionados y estériles, portaobjetos nuevos y limpios acondicionados (con tela adhesiva en sus bordes para formar una cámara de aire y evitar que se peguen). Cantidad mínima necesaria: 0.5 ml. Si el volumen es menor se puede realizar una nueva toma de otro sitio cercano. Volúmenes pequeños deben ser preservados en medios de transportes adecuados para permitir la viabilidad de las especies presentes.

5 Transporte: remitir al laboratorio en medio de transporte. Corroborar el cierre completo del mismo y conservarlo a temperatura ambiente. La muestra debe ser enviada en forma inmediata. De no ser posible, conservar a temperatura ambiente hasta 24 hs en medios de transporte especiales (Ej: VMGA III). Marcha diagnóstica de una lesión purulenta para cocos piógenos y actinomicosis. A partir de una muestra de una colección purulenta desarrollar los pasos de las marchas diagnósticas para Cocos Piógenos y Actinomicosis. - Examen macroscópico de un material purulento para buscar la existencia de granos e iniciar la explicación de las marchas para Actinomyces y Cocos Piógenos. - Examen microscópico - Cultivos. - Pruebas bioquímicas. MATERIAL PURULENTO EXAMEN MICROSCOPICO GRAM POSITIVO NEGATIVO COCOS BACILOS NO ESPORULADOS COCOS BACILOS Streptococcus Staphylococcus Actinomyces Neisserias Enterobacterias o Anaerobios Estrictos

6 Resumen de marcha diagnóstica para Cocos Piógenos Toma de material (pus) Examen macroscópico Examen microscópico (Cocos Gram +) Sembrar en distintos medios de cultivo por duplicado Caldo nutritivo Agar sin sangre Agar Sangre (Hemólisis,, ) Incubar a 37º C durante 24 a 48 horas en aerobiosis y anaerobiosis Aislamiento/s en agar sin sangre y prueba de Catalasa de c/u de los mismos (+) Staphycoccus y Micrococcus (-) Streptococcus Prueba fermentación de Glucosa (-) Micrococcus (+) Staphycoccus ( -) Coagulasa (+) (-) Manitol (+) (-) Gelatina (+) (-) St epidermidis (+) St aureus

7 Resumen de marcha diagnóstica para Actinomicosis Toma de material (pus) Examen macroscópico (Buscar Granos) Examen microscópico (bacilos o filamentos Gram + y no AAR) Sembrar en distintos medios de cultivo Agar blando glucosado Fluido tioglicolato Caldo BHI Agar BHI con suero Cerrar en condiciones de anaerobiosis Incubar a 37º C durante 245 a 48 horas. Reincubar de 10 a 15 dias Examen microscopico (bacilos o filamentos Gram +) Para la tipificación de género y especie se requieren varias pruebas bioquímicas o reacciones de inmunofluorescencia directa. Pero esto no es necesario para indicar el tratamiento al paciente Bibliografía: Negroni M. Microbiología Estomatológica. Fundamentos y Guía Práctica. Editorial Médica Panamericana, 2º Edición Buenos Aires, Argentina.