ESCUELA SALUD GUIA REALIZACION DE FROTIS SANGUINEO Y TINCION DE LÁMINAS DIRIGIDO A ALUMNOS DE: Técnico Superior de Laboratorio Clínico y Banco de Sangre PRE-REQUISITO: Laboratorio Clínico I (LCS 2100).
INTRODUCCIÓN El frotis sanguíneo es realizado en forma rutinaria en todo hemograma, ya sea que se realice en forma manual o automatizada. En este último sistema, cuando hay normalidad en todos los elementos, se obtienen los datos gráficamente desde el equipo y es opcional el uso del frotis ( lectura total, parcial o nada). Esto dependerá del laboratorio y de la experiencia del profesional. La importancia de un buen extendido y su correcta tinción son fundamentales a la hora de la observación al microscopio, ya que un frotis mal hecho entrega muy poca información acerca de la morfología celular, y en algunos casos es esta observación la que entrega al Clínico la información que requiere para realizar su diagnóstico. OBJETIVOS Al finalizar el taller el alumno será capaz de: Realizar frotis sanguíneos Realizar las tinciones hematológicas corrientes Manipular con seguridad material contaminado REALIZADO POR Tecnólogo Médico, Bioquímico, Químico Farmacéutico, Biólogo. DURACIÓN 90 minutos NUMERO DE ALUMNOS POR DOCENTE Máximo 10 alumnos
MARCO TEÓRICO Frotis sanguíneo: es la extensión de sangre realizada sobre un portaobjeto y a partir de la cual se observarán, al microscopio, las características de las células sanguíneas. Usos: Es un análisis rutinario que acompaña a todo hemograma, ya sea en forma manual o automatizado. En este último caso, cuando hay normalidad en todos los elementos sanguíneos, se obtienen los datos gráficamente y es opcional verificarlo, esto dependerá de cada laboratorio. Este preparado entrega valiosa información en casos como las leucemias, deficiencias de hierro, trastornos genéticos de la forma de los eritrocitos, posibles deficiencias de vitamina B12. Observación microscópica de un frotis ya teñido 1. Observación microscópica de un frotis teñido 2
Una leucemia o leucopenia acentuada, se reconoce fácilmente en estudio panorámico. Para esto, las extensiones deben ser delgadas, bien extendidas y bien coloreadas. Se dice que hay anisocitosis, cuando el tamaño de los hematíes es variable y poiquilocitosis cuando hay variaciones en su forma. Realización Frotis sanguíneo Foto 3 Habitualmente éste se realiza al momento de tomar el hemograma al paciente. En algunos laboratorios prefieren que éste sea hecho por personal capacitado y lo realizan al recibir la muestra. Esto estará relacionado con el tiempo de traslado del hemograma al laboratorio; ya que si es menor a dos horas la calidad de un frotis se conserva, pero si es mayor puede empezar a adulterarse el estado de las células. En laboratorios de países desarrollados y sólo en algunos laboratorios de Chile existen equipos automatizados que realizan los frotis y esto implica disminuir el riesgo de la manipulación y aumentar las medidas de bioseguridad. La tecnica será revisada en detalle en el taller.
INSUMOS Y EQUIPOS REQUERIDOS Portaobjetos (10 por alumno) Tinciones para hematología, 1 set por alumno (solución May-Grunwall en solución alcohólica, tampón fosfato ph 7.2 con 3 ml de solución May- Grunwall, tampón fosfato ph 7.2 con 12.5 ml de Giemsa) Cubetas para tinción, 1 set de tres cubetas por cada alumno (o recipientes plásticos de 15 x 15 x15 cm). Carros de tinción (para poner portaobjetos en las cubetas de tinción), 1 por alumno Pizetas con agua destilada Toalla de papel Guantes Cubreobjetos 1 caja Tubos con muestras de sangre con EDTA DESCRIPCION DEL PROCEDIMIENTO Técnica para la realización de un frotis: 1. Con la lanceta estéril realizar una punción en un pulgar o utilizar una gota de sangre del tubo de hemograma. ( lo ideal es una gota sin mezcla de anticoagulante) 2. Depositar una gota de sangre en la parte central de un portaobjetos muy limpio (libre de pelusas y grasa). 3. Con un cubreobjetos (tomarlo lateralmente entre las yemas de los dedos) deslizarlo sobre toda la superficie del porta de manera que se pueda obtener una fina película de sangre. El inicio del frotis se denomina cabeza y la parte final del frotis se denomina cola. ( observe la foto 3) 4. Esperar a que se seque la lámina, dejarla sobre una rejilla o toalla de papel, con la zona donde está la muestra mirando hacia arriba.
Preparación de tinciones (modificadas por TM Ruth Córdova, Hematóloga Laboratorio. Vida Integra) (sólo informativo, no se realiza el procedimiento) 1. Tinción May-Grunwall: Para preparar 1000 ml de solución, pesar 1.3 gramos de May Grunwald y enrasar en matraz aforado a 1000 ml con metanol. Agitar y dejar a 37º C por 3 días. Pasados los tres días filtrar la solución y guardar. 2. Tinción de Giemsa: Pesar 3.8 gramos de Giemsa y agregar 200 ml de glicerina. Mezclar y llevar a baño María a 56º C por una hora. Transcurrido este tiempo, sacar la solución del baño y agregar 300 ml de metanol. Dejar reposar la solución por 24 horas. Pasadas las 24 horas filtrar la solución y guardar. Preparación de las cubetas de tinción: En las cubetas de tinción realizar el siguiente procedimiento: 1º cubeta: poner solución May-Grunwall suficiente para cubrir el nivel de los frotis. Proteger las soluciones de la evaporación, para esto mantener tapado mientras no se utilice (contiene May-Grunwall en solución alcohólica). 2º cubeta: 300 ml de tampón fosfato ph 7.2 con 3 ml de solución May- Grunwall. 3º cubeta: 300 ml de tampón fosfato ph 7.2 con 12.5 ml de Giemsa. Al finalizar el proceso, guardar la primera solución en un frasco. Desechar las otras dos soluciones. Procedimiento de Tinción: 1. Poner los frotis, con la preparación seca, en el carro de tinción. 2. Poner este carro en la 1º cubeta por 4 minutos. 3. Pasar el carro de tinción a la 2º cubeta, antes estilar el colorante de la primera cubeta. Dejar por 1 minuto. 4. Sacar el carro y ponerlo sobre papel absorbente. 5. Poner en la 3º cubeta por 12 minutos. 6. Sacar el carro de la tinción y lavar con agua corriente por 1 minuto. 7. Dejar sobre papel absorbente. Trasladar los frotis a una bandeja para su secado. Limpiar los frotis por el reverso, con papel suave. 8. La preparación está lista para la observación microscópica.
ACTIVIDAD PARA EL ALUMNO Actividad 1: El docente explica y muestra en detalle los pasos del procedimiento para realizar frotis. Actividad 2: El docente realiza una simulación de la tinción de un frotis explicando en detalle la técnica. Actividad 3: Cada alumno realiza la tecnica de realización de frotis, hasta tener seguridad y un resultado adecuado. Actividad 4: Cada alumno realiza la técnica de tinción de a lo menos 5 frotis, de los realizados en la actividad anterior. BIBLIOGRAFÍA http://www.joseacortes.com/index.htm (visita 10/02/2005) http://mavortis.uv.es/gueb/%20practicas/sangre/elige.html (visita 10/02/2005) METODOLOGÍA DE EVALUACIÓN El taller se evalúa a través de una pauta de competencias logradas de acuerdo a los objetivos planteados:
Nombre del alumno:... Fecha:...Nota... Realización de frotis sanguíneo y tinción de laminas 1.Respeta técnicas de asepsia y antisepsia - lavado de manos - uso de guantes - elimina lo corto punzante según norma 2 Realiza la técnica para frotis, cumpliendo los pasos en orden 3. Trabaja en orden y silencio 4. Muestra habilidad manual con los materiales de laboratorio 5. Realiza técnica de tinción de frotis adecuadamente 6.Demuestra interes preguntando y/ o repitiendo las técnicas hasta lograr resultado frotis tinción C MC NC C: competente MC: medianamente competente NC: no competente