Identificación de hongos filamentosos T.M María Cristina Diaz J Profesor Asociado Programa de Microbiologia y Micología ICBM, Facultad de Medicina Universidad de Chile mcdiaz @med.uchile.cl Micosis causadas por hongos filamentosos Zigomicosis Micelio hialino no septado o cenocítico Hialohifomicosis Micelio hialino septado Feohifomicosis Micelio pigmentado (negro), septado
Mucormicosis Orden Mucorales : Mucor, Rhizopus, Absidia Aspergillus Fusarium sp Scedosporium sp Paecilomyces sp Acremonium sp Otros... Alternaria, Cladosporium Curvularia, Cladophialophora Exophiala,Phialophora DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
Examen Microscópico Directo Identificación Observación macro-microscópica de la colonia Cultivo primario : Agar Sabouraud Subcultivo : Agar papa dextrosa, Agar malta, Agar Czapek
Criterios de Interpretación IDENTIFICACION!!!!!!! Observación Microscópica
COLONIA Examen Microscópico : Procedimientos 1.- Observación a través de las paredes del tubo: estructuras reproductivas. 2.- Montajes directos Lactofenol (con o sin colorante ) azul de lactofenol Cinta adhesiva transparente
3.- Microcultivos o cultivos en lámina. Características micromorfológicas Hifas: hialinas septadas hialinas aseptadas (cenocíticas) hifas pigmentadas(dematiáceas),
Conidios: Morfología y tamaño de las estructuras reproductivas. Asexual: Conidióforos Células conidiógenas Conidios Esporangios, etc. Sexual: Ascosporas Basidiosporas Zigosporas Otras estructuras : sinemas, esporodoquios Conidiogénesis Blástica Tálica Entero- Holo- Holo- -artrica Fialídica Sincrónica Holotálica Holoártrica Anelídica Simpodial Enteroártrica
IDENTIFICACIÓN DE HONGOS FILAMENTOSOS AGAR SABOURAUD / AGAR PAPA DEXTROSA OBSERVAR ANVERSO Y REVERSO DE LA COLONIA MICELIO PIGMENTADO MICELIO HIALINO COLONIAS GRISES A NEGRAS OBSERVAR AL MICROSCOPIO: HIFAS SEPTADAS PIGMENTADAS PREPARADOS O MICROCULTIVO HIFAS HIALINAS CONIDIOS SEPTADOS TRANSVERSAL Y LONGITUDINALMENTE SEPTADAS ASEPTADAS Alternaria Mucor,Rhizopus,Absidia CONIDIOS SEPTADOS, TRANSVERSALMENTE Curvularia, Bipolaris CONIDIOS UNICELULARES DERMATOFITOS DIMÓRFICOS Cladosporium Trichophyton Histoplasma Cladophialophora Microsporum Paracoccidioides Epidermophyton CONIDIÓFOROS QUE CONIDIÓFOROS CONIDIOS CONIDIOS TERMINAN EN VESÍCULA RAMIFICADOS UNICOS EN RACIMO Aspergillus Penicillium, Paecilomyces Scedosporium Acremonium Scopulariopsis Chrysosporium Fusarium
Identificación : géneros del orden Mucorales Colonias :crecimiento muy rápido, invasoras Mucor : al principio blanca y al madurar gris o amarilla, la superficie se cubre con manchas oscuras cuando se desarrollan los esporangios. Rhizopus: Al principio es blanca y al madurar es gris a café, Sal y pimienta reverso incoloro o crema. Absidia : Colonia algodonosa blancagrisácea Esporangiosporas ( conidios asexuales ) Esporangio( saco) Hifas aseptadas Columela (prolongación estéril del esporangióforo) Esporangióforos ( hifa fértil ) Apófisis hinchamiento apical del esporangió foro)
esporangio Estolón (hifas aéreas que conectan los rizoides) apófisis Rizoides ( semejante a una raiz) Esporangiosporas amarillas o café, ovales o elipsoides. Ausencia de rizoides. RHIZOPUS Posee rizoides Esporangio redondo, hialino con base aplanada - Apófisis y columela. Mucor Columela en forma de cono con proyección en el ápice. Apófisis con collarete. Absidia
IDENTIFICACIÓN DE HONGOS FILAMENTOSOS AGAR SABOURAUD / AGAR PAPA DEXTROSA OBSERVAR ANVERSO Y REVERSO DE LA COLONIA MICELIO PIGMENTADO MICELIO HIALINO COLONIAS GRISES A NEGRAS OBSERVAR AL MICROSCOPIO: HIFAS SEPTADAS PIGMENTADAS PREPARADOS O MICROCULTIVO HIFAS HIALINAS CONIDIOS SEPTADOS TRANSVERSAL Y LONGITUDINALMENTE SEPTADAS ASEPTADAS Alternaria Mucor,Rhizopus,Absidia CONIDIOS SEPTADOS, TRANSVERSALMENTE Curvularia, Bipolaris CONIDIOS UNICELULARES DERMATOFITOS DIMÓRFICOS Cladosporium Trichophyton Histoplasma Cladophialophora Microsporum Paracoccidioides Epidermophyton CONIDIÓFOROS QUE CONIDIÓFOROS CONIDIOS CONIDIOS TERMINAN EN VESÍCULA RAMIFICADOS UNICOS EN RACIMO Aspergillus Penicillium, Paecilomyces Scedosporium Acremonium Scopulariopsis Chrysosporium Fusarium ASPERGILLUS CULTIVO : Crecimiento rápido ( 3-6 dias ).25 a 37ºC. Colonia aterciopelada a granular. Color inicial blanco, luego verde, amarillenta, gris, café o negra. Reverso : blanco o puede observarse pigmento amarillo o marfil. Agar extracto de malta estimula conidiogénesis Agar Czapek estimula pigmentación.
Micromorfología Hifas relativamente anchas, ramificación dicotómica en 45º. Conidióforos rectos, no ramificados, de tamaño variable. Vesícula apical redonda, hemiesférica, elipsoides. Fiálides nacen directamente de la vesícula (uni o biseriada). Conidios forman cadenas de disposición columnar o radiada. Principales Especies de Aspergillus Colonia Micromorfología A. fumigatus Verde azulada Vesículas subesférica, fiálides a gris uniseriada y conidios columnar. A. flavus Amarillo Vesículas pequeñas-achatadas y verdoso grandes-redondas, fiálides uni o biseriadas y conidios columnar y radiados. A. niger Negra Vesículas grandes y redondas, fiálides biseriada, conidios radiados A terreus Canela a café Vesículas subesféricas, fiálides biseriadas y conidios columnar.
Fusarium La identificación de las especies es bastante compleja. De Hoog y Guarro : Caracteristicas macromorfológicas :aspecto, textura, color de las colonias, velocidad de crecimiento. Caracteristicas micromorfológicos de los cultivos : - Forma y tamaño de los macroconidios - Forma, cantidad y modo de formación de microconidios - Naturaleza de la célula conidiógena - Presencia o ausencia de clamidoconidios.
Cultivo FUSARIUM Crecimiento rápido, entre 25 a 30ºC. 3 a 6 días, colonia inicial vellosa a algodonosa. Micelio aéreo inicialmente blanco con el tiempo pasa a rosado, rojo, violeta, púrpura, etc. sobre todo en la parte central, por la producción de pigmento. Periferia del micelio persiste de color blanco. Micromorfología Micelio hialino, septado, con conidióforos ramificados o no, a veces agrupados en esporodoquios. Fiálides nacen directamente de la hifa (ausencia de conidióforo). Macroconidios : aislados o en grupos; hialinos, alargados, fusiformes, curvos con extremo aguzados, multiseptados,( 2-7 células ) Microconidios : unicelulares, cilíndricos, únicos o en cadena o racimos por una sustancia mucoide. Clamidoconidios terminales.
Micromorfología Fusarium solani Colonia : lisa y algodonoso, color blanco grisáceo, crema, ocre o rosa púrpura. Reverso no coloreado o crema pálido. Micromorfologia : Conidióforos largos. Macroconidios : 3-5 septos, forma de media luna con célula apical corta y redondeada y célula basal redondeada o con forma de pie, nacen de conidióforos cortos y ramificados - esporodoquios. Microconidios :abundantes,pequeños,ovales a reniformes, producidas en monofiálides alargadas y finas. Clamidoconidios : frecuentes, con una pared lisa o rugosa,aisladas o en parejas, terminales o intercalares.
Fusarium oxysporum Colonia : lisa y algodonosa,y con el tiempo un aspecto de fieltro, blanco o salmón pálido, púrpura en el centro. Reverso : púrpura. Conidióforos : cortos, únicos o ramificados. Microconidios : abundantes, pequeños,ovales a reniformes, ocasionalmente, con uno o dos tabiques, pueden formar masas pero nunca cadenas; Macroconidios : 1-5 septos, fusiformes, puntiagudos, ligeramente curvados, de paredes finas y delicadas, Clamidoconidios : abundantes, grandes, hialinas, pared lisa o rugosa,aisladas o en parejas, intercalares o terminales. F. verticillioides Colonia: algodonosa, blanco a melocotón o rosa salmón a azulado o púrpura.reverso: crema a lila, vino tinto o púrpura Conidióforos : nacen lateralmente de la hifa, escasamente ramificados. Células conidiógenas: monofiálides, habitualmente delgadas y largas, Microconidios : abundante, ovales o en forma de maza con base truncada,con 1-2 septos, algunos forma cadenas. Macroconidias :3-7 septos, ligeramente fusiformes, casi rectas, con superficies dorsal y ventral casi paralelas, de pared fina y delicada. Las células basal y apical son alargadas y ligeramente curvadas. No forma clamidoconidios.
Acremonium Cultivo Crecen entre 25 a 37ºC, siendo 30ºC la óptima. A los 4 o 5 días, colonia membranosa o aterciopelada. Color : blanco a gris rosa con reverso beige o rosado suave. Colonia de A. falciforme es gris-violeta y pigmento violeta-púrpura. Micromorfología: Hifas delgadas y delicadas. Conidióforos : fiálides finas, solitarios y se forman directamente de la hifa en posición perpendicular. Conidios :unicelulares,lisos, elipsoides, se producen individualmente, pero se mantienen unidas por una sustancia mucosa formando racimos esféricos. Cultivo Colonia aterciopelada a pulverulenta, verde azulada con periferia blanca. Algunos pueden ser amarillo, verde, café y rojo. Algunos producen pigmentos que difunde al medio. Micromorfología Hifas relativamente delgadas que dan origen a conidióforos rectos y septados. Pueden ser únicos (monoverticilados) o estar ramificados (bi o terverticilados) Típicamente tiene un penicilio con métulas y fiálides que generan conidios. Conidios ovoides a elipsoides, unicelulares,en cadena. rugosas. PENICILLIUM
Paecilomyces sp P lilacinus- colonias lanosas a pulverulentas, rosa pálido a lila. Conidióforos rugosos, ramificados, en su extremo se desarrollan grupos de fiálides de base ancha y cuello largo Conidios :unicelulares, lisos,elipsoides, en largas cadenas divergentes. P variotti: colonias de color amarillo verdoso o amarillo parduzco. Conidióforos lisos - conidios elípticos Cultivo SCOPULARIOPSIS Colonia inicial aterciopelada, luego pulverulenta. Color inicial blanco, luego beige. Micromorfología Conidióforos :generalmente cortos pero ramificados, con más de una célula conidiogénica(anélide) por rama. Conidios: unicelulares en largas cadenas, globosos a piriforme ( limón), rugosos con una base plana por el lado proximal(base truncada),conidios distales son de mayor tamaño y equinulados..
Scedosporium S. apiospermum: colonias blancas y algodonosas, luego de color gris o gris parduzco. Conidióforos escasamente ramificados. Células conidiógenas ( anélides ) cilindricos. Conidios ovales, solitarios o en masas mucosas. S.prolificans: colonias verde grisácea, gris a negra. Anélide corta con base hinchada y angosta. Conidios : redondos a ovales. IDENTIFICACIÓN DE HONGOS FILAMENTOSOS AGAR SABOURAUD / AGAR PAPA DEXTROSA OBSERVAR ANVERSO Y REVERSO DE LA COLONIA MICELIO PIGMENTADO MICELIO HIALINO COLONIAS GRISES A NEGRAS OBSERVAR AL MICROSCOPIO: HIFAS SEPTADAS PIGMENTADAS PREPARADOS O MICROCULTIVO HIFAS HIALINAS CONIDIOS SEPTADOS TRANSVERSAL Y LONGITUDINALMENTE SEPTADAS ASEPTADAS Alternaria Mucor,Rhizopus,Absidia CONIDIOS SEPTADOS, TRANSVERSALMENTE Curvularia, Bipolaris CONIDIOS UNICELULARES DERMATOFITOS DIMÓRFICOS Cladosporium Trichophyton Histoplasma Cladophialophora Microsporum Paracoccidioides Epidermophyton CONIDIÓFOROS QUE CONIDIÓFOROS CONIDIOS CONIDIOS TERMINAN EN VESÍCULA RAMIFICADOS UNICOS EN RACIMO Aspergillus Penicillium, Paecilomyces Scedosporium Acremonium Scopulariopsis Chrysosporium Fusarium
ALTERNARIA Cultivo : colonia algodonosa, café oscuro a verde oliva oscuro con una franja blanca alrededor de la colonia. Pigmento negro. Micromorfología Conidióforos septados,pigmentados simples o ramificados Conidios: oscuros, con septos transversales y longitudinales,, pared lisa o rugosa, pueden estar solos o en cadenas. Cultivo CURVULARIA Colonia aterciopelada, café oscuro o negro a verde oliva oscuro. Reverso : café o negro. Micromorfología Conidióforos septados, simples o ramificados, con pigmento oscuro y geniculados. Conidios: curvado, con septos transversales con 3 a 5 células, oscuros, la 3ra célula es asimétrica y más oscura que las otras.
Cladosporium Colonias aterciopeladas a pulverulentas, verde oliva a verde oscuro. Conidióforos ramificados, conidios en cadenas y ramificados con cicatrices prominentes y más oscuras.- Ramoconidios Cladophialophora : Colonias aterciopeladas, pulverulentas, gris oliváceo.( 42 C). Conidios unicelulares en cadenas poco ramificadas, pigmentadas. Chile :C.bantiana ( absceso cerebral ).