Kit de purificación de ARN sanguíneo RNAgard Manual de usuario

Transcripción

1 Kit de purificación de ARN sanguíneo RNAgard Manual de usuario CE Para usar en el diagnóstico in vitro. Biomatrica, Inc Oberlin Drive, Suite 120 San Diego, CA 92121, EE.UU

2 Contenido Productos del sistema sanguíneo RNAgard e información para pedidos 3 Contenidos del Kit 3 Condiciones de almacenamiento 3 Información de seguridad 4 Uso previsto 4 Introducción 4 Recogida de muestras y conservación 5 Procedimiento de purificación de RNA 5 Equipo y materiales necesarios pero no suministrados 5 Notas importantes antes de empezar 5 Protocolo para la purificación de RNA 6 Limitaciones del uso del producto 8 Resumen del procedimiento de purificación RNA 9 Resultados esperados Apéndices A. La estabilidad de la expresión génica 10 Apéndices B. Alto rendimiento y pureza de RNA 12 Apéndices C. Purificación repetible y reproducible de ARN 13 Guía de solución de problemas 16 Asistencia técnica 18 Glosario de símbolos armonizados 18 Página 2 de 18 Doc. No. 8301, Rev C

3 Productos del sistema sanguíneo RNAgard e información para pedidos Descripción Cantidad Número de catálogo Tubos de sangre RNAgard 50 tubos CE Kit de purificación sanguíneo RNA 50 preps CE RNAgard Reactivo sanguíneo RNAgard 100 ml CE Búfer de precipitación sanguínea 50 preps CE RNAgard Los pedidos se pueden hacer online en a través de correo electrónico en orders@biomatrica.com o a través del Servicio de atención al cliente de Biomatrica al Contenidos del Kit de purificación sanguíneo RNA RNAgard Kit de purificación sanguíneo ARN RNAgard (50 preps) Catálogo No. CE Componente Búfer de precipitación sanguínea RNAgard Búfer ǂ de resuspensión Búfer de lavado 1* Búfer de lavado 2* Botella de agua libre de RNasa Dnasa I, Libre de RNasa; Polvo liofilizado Dnasa I Búfer Agua estéril (DNASA I Agua de resuspensión) Cantidad 180 ml 21 ml 25 ml 15 ml 12 ml 1 X frasco 2 X 2.5 ml 1 ml Columnas de purificación 50 Tubos de recolección de 2 ml 2 X 100 ǂ No compatible con reactivos desinfectantes que contengan cloro. Contiene isotiocianato de guanidina. Consulte la página 5 para obtener información sobre seguridad. * El Búfer de lavado 1 y el búfer de lavado 2 se suministran como concentrados. Antes de usar por primera vez, diluir con etanol (96-100%, grado analítico del reactivo o grado de pureza p.a.) de acuerdo con los volúmenes indicados en las botellas. Condiciones de almacenamiento Tras la recepción del kit (enviado a temperatura ambiente), extraer el vial del DNASA I liofilizado, Polvo liofilizado libre de RNasa y almacenar a 2-8 C. Después de reconstituir el DNAsa liofilizado, parte alícuota y almacenar la solución resultante a -20 C. Página 3 de 18 Doc. No. 8301, Rev C

4 Almacenar todos los demás componentes del Kit de purificación sanguínea ARN de RNAgard a temperatura ambiente (18-25 C). No lo congele. Información de seguridad Tomar las precauciones universales al manipular este producto. El contenido de este kit puede irritar los ojos, la piel y las vías respiratorias. 1. Si se inhala accidentalmente, proporcionar aire fresco y buscar asesoramiento médico 2. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente con agua y jabón y enjuagar abundantemente. 3. En caso de contacto con los ojos, lavarlos inmediatamente con agua abundante durante al menos 15 minutos y busque atención médica. 4. Si se produce la ingestión accidental, acudir al médico inmediatamente. 5. Consultar SDS en caso de ingestión accidental o contacto con la piel. Toda la información SDS está disponible en Uso previsto El Kit de purificación sanguínea RNA de RNAgard está destinado a la purificación del RNA intracelular de muestras de sangre humana, recogidas y conservadas en tubos de sangre RNAgard. Cuando se usa en combinación con tubos de sangre RNAgard como parte del sistema sanguíneo RNAgard, el Kit de purificación sanguíneo RNA de RNAgard proporciona altos rendimientos de ARN puro, con niveles muy bajos de ADN genómico. El RNA purificado es adecuado para las aplicaciones de RT-PCR que se usan en pruebas de diagnóstico molecular. El rendimiento del sistema sanguíneo RNAgard se ha caracterizado sólo por C-FOS y el gen de transcritos IL1-. El usuario es responsable de caracterizar el rendimiento del sistema RNAgard para otras aplicaciones. Introducción Los estudios de investigación clínicos requieren a menudo la recogida de muestras de sangre en varios sitios geográficos en una amplia variedad de condiciones. Los tubos sanguíneos RNAgard están diseñados para la preservación inmediata del RNA intracelular en muestras de sangre humana, proporcionando un método eficiente para la recogida, transporte y almacenamiento normalizado de muestras de sangre entera. La integridad del RNA y los niveles de integridad del gen se mantienen hasta 14 días a temperatura ambiente cuando toda la sangre se almacena en tubos RNAgard, y se pueden purificar fácilmente con el kit de purificación sanguíneo RNA de RNAgard. Página 4 de 18 Doc. No. 8301, Rev C

5 Recogida de muestras y conservación Tubos sanguíneos RNAgard contienen un producto químico patentado de reactivo de preservación que rompe la membrana de las células sanguíneas, inactiva las endonucleasas y detiene la síntesis del ARN, por lo tanto, conservando los niveles de los transcritos del ARN. Una vez que el RNA está purificado usando el Kit de purificación del RNA sanguíneo RNAgard, es adecuado para el análisis de expresión génica usando tecnologías como RT-PCR y matrices de expresión. Procedimiento de purificación de RNA Equipo y materiales necesarios pero no suministrados Tubos de sangre RNAgard (Cat. No. CE ) Etanol (96-100%) Pipetas * (5 L - 3 ml) Puntas de pipeta estériles, con barrera de aerosol, libres de RNasa estéril Tubos cónicos de 50 ml Tubos de microflujo de 1,5 ml Mezclador Vortex* Centrifugar* - velocidad variable capaz de lograr 1,000-14,000 x g Agitador* - incubadora 400 rpm Baño de agua o bloque de calor a 70 C * Asegurarse de que los instrumentos se han verificado, mantenido y calibrado periódicamente, según las recomendaciones del fabricante. Notas importantes antes de empezar: Garantizar que la sangre se recogió en tubos de sangre RNAgard según las instrucciones en el "Procedimiento para la preparación de muestras para análisis" en la sección de tubo de sangre RNAgard Instrucciones de Uso. Espere al menos 2 horas después de la recogida de la sangre para iniciar el proceso de purificación. Para maximizar el rendimiento de RNA, deje al menos 8-12 horas de almacenamiento a temperatura ambiente antes de la purificación de RNA. El Búfer de lavado 1 y el Búfer de lavado 2 se proporcionan como concentrados; reconstituir con las cantidades de % de etanol indicado en las etiquetas de las botellas, antes de su uso. Dnasa I es sensible a la desnaturalización física. Al reconstituir el polvo liofilizado, mezclar suavemente por inversión; no agitar en vortex la solución DNasa. Asegurarse de que los tubos de sangre RNAgard están equilibrados a temperatura ambiente antes de iniciar el proceso de purificación de RNA. Página 5 de 18 Doc. No. 8301, Rev C

6 Protocolo para la purificación de RNA 1. Invertir el tubo de sangre RNAgard al menos 5 veces para asegurar una buena mezcla y, a continuación, quitar el tapón y verter el contenido del tubo en un tubo cónico limpio de 50 ml. 2. La pipeta de 3 ml del búfer de precipitación de sangre RNAgard en el tubo cónico de 50 ml para llevar el volumen total a ~12 ml y cerrar el tapón del tubo. 3. Incubar 15 minutos a temperatura ambiente agitándolo ( rpm). 4. Agitar en vórtex el tubo cónico de 50 ml vigorosamente (máxima velocidad) durante al menos 30 segundos, asegurándose de que la solución va hasta la parte superior del tubo para lograr una mezcla adecuada del contenido. 5. Centrifugar el tubo a x g durante 30 minutos a temperatura ambiente en un rotor de cubo oscilante. Nota: La centrifugación también se puede realizar a x g durante 10 minutos usando un rotor de ángulo fijo sin influir en el rendimiento o calidad de RNA. 6. Verter cuidadosamente la fracción flotante y dejar el tubo invertido sobre papel absorbente durante 1-2 minutos. Nota: Se debe ver un gránulo translúcido rojizo en la parte inferior del tubo. 7. Limpiar las gotas restantes de líquido del borde del tubo con papel absorbente limpio. 8. Añadir 350 µl de búfer de resuspensión en el tubo y pulsar en vórtex 5-10 veces volver para volver a suspender el sedimento. 9. Añadir 250 µl de 100% de etanol en el tubo y pulsar en vórtex 3-5 veces para mezclar los contenidos del tubo. 10. Transferir la solución a una columna de purificación limpia, cerrar la tapa y centrifugar durante 1 minutos a x g. Nota: Para cualquier centrifugación (pasos 10 a 23) usar microfugas de sobremesa. 11. Desechar el tubo de recogida y colocar la columna en un tubo de recogida limpio de 2 ml. 12. Añadir 400 µl del búfer de lavado 1 en la columna, cerrar el tapón y centrifugar a x g durante 1 minuto. 13. Desechar el flujo, colocar la columna en el mismo tubo de recogida de 2 ml y centrifugar a x g (o velocidad máxima) durante 1 minuto para secar la columna. 14. Desechar el tubo de recogida y colocar la columna en un tubo de recogida limpio de 2 ml. Página 6 de 18 Doc. No. 8301, Rev C

7 15. Realizar tratamiento DNasa: a. Si usa DNasa I por primera vez, preparar la solución en stock DNasa I añadiendo 300 µl de agua estéril y libre de RNasa (proporcionado) a la DNasa I (libre de RNasa) polvo liofilizado y mezclar suavemente por inversión; no agitar en vórtex. Alicuotar la encima DNasa I enzima y almacenar a -20 C para almacenamiento a largo plazo. Nota: El stock de la DNasa I se puede congelar/descongelar hasta tres veces sin pérdida de actividad. b. Preparar la solución diluida de DNasa I combinando 5 μl de DNasa I y 95 μl de DNasa I de búfer para cada muestra, a continuación, mezclar suavemente por inversión. (Agregar un 10% al preparar soluciones para varias muestras). c. Añadir 100 µl de la mezcla DNasa I en cada columna e incubar a temperatura ambiente durante minutos. d. Durante el tratamiento de DNasa I, precalentar el agua libre de RNasa a 70 C para la elución de RNA. 16. Añadir 400 µl de búfer de lavado 1 en la columna, cerrar la tapa, incubar a temperatura ambiente durante 30 segundos y centrifugar a x g durante 1 minuto. 17. Desechar el tubo de recogida y colocar la columna en un tubo de recogida limpio. 18. Añadir 350 µl del búfer de lavado 2 en la columna, cerrar el tapón y centrifugar a x g durante 1 minuto. 19. Repetir el paso 18 con un segundo 350 µl de búfer de lavado 2, sin cambiar el tubo de recogida. 20. Desechar el tubo de recogida, colocar la columna en un tubo de recogida de 2 ml y centrifugar a x g (o velocidad máxima) durante 2 minutos para secar la columna. 21. Quitar la columna de purificación del tubo y colocar en un tubo de microfuga de 1,5 ml libre de RNasa (no incluido en el kit) para eluir el RNA. 22. Añadir 100 µl de agua libre de RNasa previamente calentada a 70 C en la columna, cerrar la tapa e incubar durante 1 minuto a temperatura ambiente y centrifugar durante 1 minutos a 6800 x g para eluir el RNA. 23. Para obtener la máxima concentración de RNA, volver a aplicar la solución eluida de vuelta a la columna y centrifugar 1 minuto a x g. Para obtener el máximo rendimiento de RNA, repetir el paso 22 con 100 μl nuevos de agua libres de RNasa. Página 7 de 18 Doc. No. 8301, Rev C

8 Limitaciones del uso del producto 1. El Kit de purificación sanguínea RNA de RNAgard no está destinado para la purificación del RNA de muestras de sangre no recogidas y conservadas en tubos de sangre RNAgard. 2. El Kit de purificación de RNA sanguíneo RNAgard ha sido optimizado para la purificación de 2,5 ml de sangre recogida en tubos de sangre RNAgard. Si no se han extraído los 2,5 ml de sangre en tubos de sangre RNAgard, se podrían ver afectados el rendimiento y calidad de RNA. 3. El Kit de purificación de RNA sanguíneo RNAgard no ha sido optimizado para la purificación de pequeñas especies RNA como mirna. Página 8 de 18 Doc. No. 8301, Rev C

9 Resumen del procedimiento de purificación RNA Figura 3: Procedimiento de purificación de RNA. Vista esquemática de la purificación de RNA a partir de muestras de sangre humana recogidas en tubos de sangre RNAgard usando el Kit de purificación de RNA sanguíneo RNAgard. Página 9 de 18 Doc. No. 8301, Rev C

10 Sangre RNAgard día 3 Sangre RNAgard día 14 Apéndice A: La estabilidad de la expresión génica. La preservación de los patrones de expresión de genes en la sangre entera hasta 14 días a temperatura ambiente se evaluó mediante el análisis de expresión de la matriz de todo el genoma de múltiples donantes de sangre. La figura 2 muestra una comparación representativa de perfiles de expresión de más de transcritos entre sangre entera fresca (eje X) y después de 3 días (A) o 14 días (B) de la temperatura de almacenamiento (eje Y). Las líneas verdes definen las transcritos de la sangre entera almacenada con niveles de expresión dentro de un doble cambio en relación a las muestras de sangre recién recogidas. La preservación de los niveles de RNA por el sistema sanguíneo RNAgard se caracteriza por los análisis RT-PCR de las transcritos de las citoquinas inflamatorias IL-1β y C-Fos. Los niveles RNA para estos genes, se midieron por los valores relativos de Ct en relación con el gen de referencia 18S RNA (ΔCt). Los cambios en los valores de ΔCt en relación con los valores de Día 0 se expresaron como ΔΔCt. Los valores ΔCt s mantuvieron más de 14 días de almacenamiento de la muestra de sangre a temperatura ambiente; los valores ΔΔCt estuvieron entre -1.0 y +1.0 (Figura 3). Se obtuvieron resultados similares para las muestras de sangre almacenadas durante un mes a 2-8 C, o congeladas a -20 C o -80 C (datos no mostrados). Control-Sangre RNAgard Día 0 Control-Sangre RNAgard Día 0 Figura 1: Análisis de ADN de toda la expresión de transcriptoma en RNA de muestras enteras de sangre humana. Se extrajo sangre humana en tubos de sangre RNAgard de un donante sano. El RNA se purificó después de 0, 3 o 14 días e almacenamiento a temperatura ambiente. La expresión de transcriptoma entero se analizó usando el Conjunto matriz humano HT12 (Illumina Corp., San Diego, CA), y se compararon los niveles de transcritos normalizados de muestras almacenadas durante 3 (A) o 14 (B) días (eje Y) con los niveles de transcritos de la muestra de sangre entera reciente del mismo donante (eje X). Página 10 de 18 Doc. No. 8301, Rev C

11 ΔΔ Ct Relativo al día 0 ΔΔ Ct Relativo al día 0 Estabilidad del RNA de IL- β mediante RT-PCR Estabilidad del RNA de C-Fos mediante RT-PCR Día 0 Día 7 Día 14 Día 0 Día 7 Día 14 Figura 2: Análisis por RT-PCR de IL1- y C-Fos RNA obtenido de muestras de sangre humana recogidas y almacenadas en tubos de sangre RNAgard. Se extrajo sangre de 5 donantes sanos en tubos de sangre RNAgard y almacenados a temperatura ambiente (18-25 C). Los días 0, 7 y 14, el RNA se purificó con el Kit de purificación RNA de sangre RNAgard. Los niveles transcritos C-Fos y IL1-β, normalizados a 18S transcritos, se determinaron por RT-PCR y expresados como valores ΔCt. El cambio en ΔCt con respecto a los niveles del mismo transcrito en muestras del día 0 procedentes del mismo donante reflejado como ΔΔCt. Página 11 de 18 Doc. No. 8301, Rev C

12 Rendimiento RNA (µg/tubo de sangre) Apéndice B: Alto rendimiento y pureza de RNA El Kit de purificación de ARN sanguíneo RNAgard permite el aislamiento de al menos 3 µg de RNA para al menos el 97% de las muestras de sangre que se recogen y almacenan en tubos de sangre RNAgard. Como se muestra en la Figura 4, se obtuvieron rendimientos altos de ARN repetibles (Figura 4, A) con alta pureza (Figura 4, B) a partir de muestras de sangre de los mismos 8 donantes durante 2 semanas de almacenamiento de muestras de sangre a temperatura ambiente. Tubos de sangre RNAgard: Rendimiento de RNA por muestra (µg) Día 3 Día 7 Día 14 Tubos de sangre RNAgard: Pureza de RNA por muestra (A 260 /A 280 ) Pureza de RNA (A260/A280) Día 3 Día 7 Día 15 Figura 4: Alto rendimiento y pureza de RNA. Se extrajo sangre de 8 donantes sanos en tubos de sangre RNAgard y almacenados a temperatura ambiente (18-25 C). Después de 3, 7 y 15 días, se purificó el ARN a partir de muestras de sangre duplicadas por donante, usando el Kit de purificación de ARN sanguíneo RNAgard. A: El rendimiento de ARN por muestra se determinó por espectrofotometría UV y se mostró como valores promedio de las muestras duplicadas por donante. B: La pureza de ARN para todas las muestras se determinó por espectrofotometría UV (A260/A280). Página 12 de 18 Doc. No. 8301, Rev C

13 Rendimiento RNA (ug /2,5 ml de sangre) Apéndice C: Purificación repetible y reproducible de RNA La purificación de RNA a partir de muestras de sangre recogidas en tubos de sangre RNAgard usando el Kit de purificación de RNA sanguíneo RNAgard es altamente reproducible, como lo demuestran los rendimientos de RNA similares, obtenidos de los mismos donantes de sangre por 3 operadores diferentes (Figura 5). Al igual que el rendimiento de RNA, la alta pureza y calidad del RNA aislado es muy reproducible, como se muestra en los valores A260/A280 sistemáticamente entre 1,8 y 2,2 (Figura 6), así como el contenido de ADN genómico por debajo de 0,10% (w/w) (Figura 7), independientemente de que uno de los 3 operadores diferentes purificados del RNA de las muestras de sangre. La reproducibilidad del kit de purificación del RNA de sangre de RNAgard se verificó también por análisis RT-PCR de los niveles del transcrito de RNA para c-fos y IL1-. Como se muestra en la Figura 8, los niveles de RNA de ambos transcritos, c-fos y IL1- en relación al control de 18S RNA son similares, independientemente del operador que procese las muestras. Rendimiento de RNA reproducible y repetible por 3 operadores (A,B,C) Figura 5: Rendimiento de ARN reproducible. Se extrajo sangre de 8 donantes sanos en tubos de sangre RNAgard y almacenados a temperatura ambiente (18-25 C) durante 3 días. El RNA se purificó a partir de muestras de sangre duplicadas por donante, por 3 operadores diferentes, usando el Kit de purificación de RNA sanguíneo RNAgard. El rendimiento de ARN por muestra se determinó por espectrofotometría UV y se mostró como valores promedio de las muestras duplicadas por donante. Página 13 de 18 Doc. No. 8301, Rev C

14 Pureza de RNA reproducible y repetible por 3 operadores Pureza de RNA (A260/A280) ADN genómico (w/w) (%) Operador A Operador B Operador C Figura 6: Pureza reproducible de RNA. Se extrajo sangre de 8 donantes sanos en tubos de sangre RNAgard y almacenados a temperatura ambiente (18-25 C). Después de 3 días de almacenamiento, se procesaron las muestras por 3 operadores utilizando el Kit de purificación de RNA sanguíneo RNAgard. La pureza de ARN para todas las muestras se determinó por espectrofotometría UV (A260/A280). Pureza de RNA reproducible y repetible por 3 operadores Operador A Operador B Operador C Figura 7: Pureza reproducible de RNA. Se extrajo sangre de 8 donantes sanos en tubos de sangre RNAgard y almacenados a temperatura ambiente (18-25 C). Después de 3 días de almacenamiento, se procesaron las muestras por 3 operadores utilizando el Kit de purificación de RNA sanguíneo RNAgard. El porcentaje de contaminación de ADN genómico fue determinado para todas las muestras de RNA por amplificación por qpcr de un amplicón de ADN genómico de RNAsa P, en relación a la amplificación del mismo objetivo a partir de entradas conocidas de muestras de ADN genómico. Página 14 de 18 Doc. No. 8301, Rev C

15 ΔΔCt Relativo al operador A ΔΔCt Relativo al operador A IL1- β Estabilidad del RNA por RT-PCR C-Fos Estabilidad del RNA por RT-PCR Operador A Operador B Operador C Operador A Operador B Operador C Figura 8: Caracterización de C-Fos y IL1- niveles de transcritos mediante RT-PCR. Se extrajo sangre de 8 donantes sanos en tubos de sangre RNAgard y almacenados a temperatura ambiente (18-25 C). Después de 3 días de almacenamiento, se procesaron las muestras por 3 operadores utilizando el Kit de purificación de RNA sanguíneo RNAgard. Los niveles de transcritos de C-Fos y IL1-β normalizados a los transcritos 18S, se determinaron por RT-PCR en muestras procesadas por el operador y el operador B y C y se mostraron en relación con los niveles de los mismos transcritos, en muestras procesadas del mismo donante por el operador A, expresado como ΔΔCt. Página 15 de 18 Doc. No. 8301, Rev C

16 Guía de solución de problemas Esta guía de solución de problemas incluye sugerencias para resolver las siguientes situaciones potenciales. Los científicos del Soporte técnico de Biomatrica están disponibles para contestar preguntas sobre la información y los protocolos en este manual de usuario (ver pg. 16 para obtener la información de contacto o visitar Situación Comentario Razón/sugerencia La sangre parece coagulada o precipitada después de su almacenamiento o envío. La formulación de sangre RNAgard desnaturaliza las proteínas, que se precipitarán a lo largo del tiempo. La precipitación no afecta a las propiedades de estabilización de RNA de la formulación. Asegurarse de que la muestra se mezcla antes del procedimiento de purificación de RNA, invirtiendo el tubo 3-5 veces. Bajo rendimiento de RNA El RNA aislado es impuro Posibles razones: - Baja concentración de leucocitos en la sangre de muestra. - La muestra del tubo de sangre RNAgard no se mezcló completamente antes de la purificación de RNA. - La elección del tubo de extracción de sangre. Posibles razones: - La elección del tubo de extracción de sangre. - Inactivación de DNAsa I provocando la contaminación del ADN genómico. - Pérdida de actividad de DNAsa I - Las concentraciones de leucocitos pueden variar 10 veces entre donantes, dando como resultado una amplia gama de rendimientos de RNA. - Invertir el tubo de sangre RNAgard 3-5 veces inmediatamente antes del aislamiento de RNA. - Se ha optimizado el aislamiento de RNA con el Kit de purificación de RNA de sangre RNAgard con el tubo de sangre RNAgard. No garantizamos la calidad de RNA estabilizado en otros tubos de recogida de sangre. - Se ha optimizado el aislamiento de RNA con el Kit de purificación de RNA de sangre RNAgard con los tubos de sangre RNAgard. No se recomienda la purificación de RNA recogido en tubos de sangre RNAgard con otros productos. - Después de la reconstitución de la DNAsa I mezclar suavemente sin agitar en vórtex. Página 16 de 18 Doc. No. 8301, Rev C

17 provocando la contaminación del ADN genómico. - Después de la reconstitución de la DNAsa I limitar a tres los ciclos de congelación y descongelación. Página 17 de 18 Doc. No. 8301, Rev C

18 Asistencia técnica Biomatrica, Inc. está comprometida a proporcionar soporte técnico sobresaliente. El Departamento del Servicio Técnico de Biomatrica está compuesto por científicos experimentados con experiencia en biología molecular y el uso de los productos de Biomatrica. Ponerse en contacto con Biomatrica directamente con cualquier pregunta con respecto al Kit de purificación de RNA de sangre RNAgard. Departamento de Servicio Técnico Teléfono (US): Web: Correo electrónico: support@biomatrica.com Glosario de símbolos armonizados Número de artículo No volver a usar Número de parte: Número de lote Peligro Fecha de caducidad. Usar a finales del mes indicado Limitaciones de temperatura Mantener alejado de la luz directa del sol Consultar instrucciones de uso Fabricante Esterilización mediante irradiación La esterilización usando una técnica aséptica Representante autorizado en la Comunidad Europea RNAgard es una marca registrada de Biomatrica Biomatrica Inc. Biomatrica Inc Oberlin Drive, #120 San Diego, CA 92121, U.S.A. Página 18 de 18 Doc. No. 8301, Rev C