DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD CITOTÓXICA in vitro DE Solanum torvum SOBRE CÉLULAS HUMANAS TRANSFORMADAS Y CÉLULAS HEMATOPOYÉTICAS DE RATONES SANOS

Transcripción

1 DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD CITOTÓXICA in vitro DE Solanum torvum SOBRE CÉLULAS HUMANAS TRANSFORMADAS Y CÉLULAS HEMATOPOYÉTICAS DE RATONES SANOS

2 Laboratorio de Hematología Experimental del Departamento de Ciencias de la Salud D.C.B.S.-Iztapalapa ALUMNO Sergio Mendoza Mociño ASESORES M. en B.E. Rodolfo Velasco Lezama Q.B.P. Rafaela Tapia Aguilar

3 INTRODUCCIÓN ÍNDICE DE MORTALIDAD 1998 (INEGI) TOTAL DE DEFUNCIONES 444, ENFERMEDADES CARDIOVASCULARES 68, ACCIDENTES,ENVENENAMIENTOS Y VIOLENCIA 53, TUMORES MALIGNOS 52,555 Cáncer de pulmón en hombres Cáncer cérvico-uterino en mujeres Leucemias 4.- DIABETES MELLITUS 38, ENFERMEDADES CEREBROVASCULAR 25,299

4 Cánceres malignos hacen metástasis neoplásica y de acuerdo a su propagación los podemos clasificar en: Sarcomas que tienden a hacer metástasis temprana a través de la corriente sanguínea. Carcinomas que tienden a efectuar la metástasis primero a través del sistema linfático Los carcinomas que frecuentemente envían metástasis a los huesos comprenden: Prostático (en proporción inferior de la columna vertebral, pelvis y fémur) Glándula mamaria Pulmón Tiroides (especialmente el cráneo) Riñón Los carcinomas que hacen frecuentemente sus metástasis en el cerebro comprenden: Glándula mamaria Pulmón Renal Próstata y recto. Las neoplasias malignas que hacen frecuentemente metástasis en la piel comprenden: Melanoma maligno Leucemia Carcinoma pulmonar Estómago Colon Útero Riñón Glándula mamaria Leucemias linfoblásticas agudas(lal) LA-L1: Linfoblástica típica LA-L2: Linfoblástica atípica LA-L3: Parecida al linfoma de Burkitt Leucemias mieloblásticas agudas(lam) LA-M0: Mieloblástica con diferenciación mínima LA-M1: Mieloblástica inmadura LA-M1: Mieloblástica madura LA-M3: Promielocítica hipergranular LA-M4: Mielomonoblástica. LA-M5: Monoblástica pura LA-M6: Eritroleucemia LA-M7: Megacarioblástica Tratamiento: Cirugía Químioterapia Radioterapia

5 Orden Solanales Familia Solanaceae Familia de la papa Género Solanum Especie Solanum torvum Sw. La berenjena o hierba sosa es un arbusto espinoso que mide de 1.5 hasta 4 m de altura; con hojas grandes de 20 cm de largo presenta tricomas en las nervaduras del haz y envés de la hoja, son ásperas al tacto. Presenta flores blancas. Sus frutos son globosos de color amarillo. La especie es originaria de Florida, Centroamérica, Norte de Sudamérica y Asia. En México se le puede encontrar en San Luis Potosí, Veracruz, Puebla, Oaxaca, Chiapas..

6 En la medicina tradicional mexicana se emplea como anticonvulsivante, antirreumático, diurético y narcótico. En Chiapas popularmente se recomienda la infusión de las hojas para curar el cáncer. Tapia y colaboradores han reportado que el extracto acuoso de S. torvum es citotóxico para las células HTC-15 derivadas de colon humano. Además han demostrado que el extracto acuoso tiene actividad antibacteriana.

7 HIPÓTESIS Solanum torvum se reporta como citotóxica, por tanto la exposición de células hematopoyéticas de ratones sanos y células humanas transformadas inhibirá o detendrá el desarrollo de estas células en cultivo; provocando disminución en el número de células cultivadas o en los parámetros indicadores de la proliferación celular.

8 OBJETIVO Determinar el efecto de los extractos hexánico, clorofórmico, metanólico y acuoso de S. torvum sobre la proliferación in vitro de células hematopoyéticas de ratones sanos de células de carcinoma de colon humano (HTC-15), carcinoma de próstata humana (HTB-81) y leucemia mieloblástica humana (KG-1).

9 OBJETIVOS PARTICULARES 1.- Obtención de la planta 2.- Preparación de los extractos de prueba. 3.- Ensayos de citotoxicidad en cultivo de: a) Células de carcinoma de colon humano (HTC-15). b) Células de carcinoma de próstata humana (HTB-81). c) Células de leucemia mieloblástica humana (KG-1). d) Células de médula ósea de ratones sanos de la cepa CD 1. e) Células de bazo de ratones sanos de la cepa CD 1.

10 DESARRROLLO

11 Estudio Etnobotánico Autentificación Botánica Colecta de Solanum torvum (Tuxtla Gutiérrez) Chiapas, México Secado a temperatura ambiente y pulverización mecánica de 500 g de hojas Maceración por 24 horas en hexano, cloroformo, metanol, H 2 0 Evaporación del agua hasta sequedad completa.

12 ENSAYOS DE CITOTOXICIDAD SOBRE LAS CÉLULAS HTC-15, HTB-81 y KG-1. CONFLUENCIA Ajuste de la concentración a 5x10 4 viables/ml en medio RPMI 1640 con 10% de STN DMSO al 0.5 %

13 ENSAYO DE ACTIVIDAD CITOTÓXICA DE S. torvum EN CULTIVO DE CÉLULAS HEMATOPOYÉTICAS DE MÉDULA ÓSEA Y BAZO DE RATONES DE LA CEPA CD 1 Dislocación cervical RPMI STN Ratón CD 1 de 8-12 semanas Viabilidad celular (azul tripano Células de médula ósea totales(sol. Turck) Células de médula ósea Dilución 1:10 2 X 10 5 cél/ml Células de bazo Medio RPMI-1640 Suero de ternera neonato 10% Suspensión celular (2x10 5 cel/ml) Extracto de prueba Cuantificación celular Incubar 37 C/72 h. Placa de cultivo de 35 mm 5% CO 2 90% humedad Evaluación de muerte celular por cuenta directa.

14 RESULTADOS

15 Efectode los ex tractos de S. torvu m sobre células de carci noma de colon (HCT-15 ) Efecto de los extractos de S. torvum sobre la proliferación de las células HCT-15 de carcinoma de colon humano % SOBREVIVENCIA % SOBREVIVENCIA % de sobrevida acuoso metanólico clorofórm ico hexán ico µ g /ml 10 µ g /ml 1 00 µg /ml log. de la concentr ación CONCENTRACCIÓN DEL EXTRACTO

16 Efecto de los extractos de S. torvum sobre la proliferación de las células HTB-81 de carcinoma de próstata humana 300 HEXANICO % SOBREVIVENCIA ug/ml 10 ug/ml 100 ug/ml CLOROFORM ICO M ETANOLICO ACUOSO CONCENTRACION DEL EXTRACTO

17 Efecto de los extractos de S. torvum sobre la proliferación de las células KG-1 de leucemia mielocítica humana I HEXANICO 250 % SOBREVIVENCIA ug/ml 10 ug/ml 100 ug/ml II CLOROFORMICO III METANOLICO IV ACUOS O CONCENTRACIÓN DEL EXTRACTO

18 celx10 4 /ml Efecto de los extractos de S. torvum en cultivo de células de bazo de ratones sanos ug/ml HEXÁNICO ug/ml ug/ml CLOROFÓRMICO METÁNOLICO ug/ml ACUOSO CONCENTRACIÓN DEL EXTRACTO DMSO MEDIO Efecto de los extractos de S. torvum en cultivo de células de médula ósea de ratones sanos. 10 p>0.05 no significativa celx10 4 /ml º ug/ml ug/ml ug/ml HEXÁNICO CLOROFÓRMICO METÁNOLICO CONCENTRACCIÓN DEL EXTRACTO ug/ml DMSO MEDIO ACUOSO

19 CONCLUSIONES En las condiciones de trabajo establecidas, el extracto acuoso de S. torvum fue citotóxico para las células HTC-15 a la concentración de 10 ug/ml con un IC 50 de 2.16 ug/ml. No se observó variación en la concentración celular entre los cultivos tratados con el extracto y los cultivos testigos.