Las enfermedades animales por retrovirus: leucosis bovina enzoótica, anemia infecciosa de los équidos, artritis/encefalitis caprina

Transcripción

1 Rev. sci. tech. Off. int. Epiz., 1990, 9 (4), Las enfermedades animales por retrovirus: leucosis bovina enzoótica, anemia infecciosa de los équidos, artritis/encefalitis caprina B. TOMA *, M. ELOIT * y M. SAVEY ** Resumen: Este artículo presenta las características esenciales de tres retrovirosis animales: la leucosis bovina enzoótica, la anemia infecciosa de los équidos y la artritis/encefalitis caprina. La originalidad de estas enfermedades consiste en un estado de infección persistente, que se prolonga durante toda la vida del organismo hospedador y que corresponde a la presencia de un provirus integrado en las células del hospedador. Los animales infectados constituyen por lo tanto fuentes potenciales prolongadas del agente patógeno. Los conocimientos disponibles actualmente sobre la epidemiología y la detección de estas enfermedades son suficientes para la puesta en marcha de métodos de lucha sanitaria eficaces. PALABRAS CLAVE: Anemia infecciosa de los équidos - Artritis/encefalitis caprina - Diagnóstico - Epidemiología - Leucosis bovina enzoótica - Retrovirus. INTRODUCCIÓN El número de enfermedades animales debidas a los retrovirus es elevado y continúa aumentando conforme lo hace la identificación de nuevos agentes en el seno de este grupo, por ejemplo: el virus de la inmunodeficiencia felina en 1987 (60) (véase Cuadro I). En el seno de este conjunto de enfermedades, han sido elegidas tres de las más importantes por sus repercusiones económicas y serán las únicas presentadas en este trabajo. En un número limitado de páginas, es imposible el tratar de manera detallada los diferentes aspectos de una enfermedad, y con mayor razón hacerlo de tres enfermedades. Por este motivo, ha sido necesario seleccionar en cuanto a las nociones presentadas en las líneas que siguen. Han sido preferidos los capítulos sobre los que los conocimientos evolucionan y aquellos que tienen una importancia mayor para la comprensión de las medidas de lucha, es decir: características esenciales del agente patógeno, epidemiología, diagnóstico y profilaxis. Por lo contrario, los síntomas y lesiones no se han desarrollado. * Ecole Nationale Vétérinaire d'alfort, 7 avenue du Général de Gaulle, Maisons-Alfort, Francia. ** CNEVA, Laboratoire de pathologie bovine, 31 avenue Tony Garnier, B.P. 7033, Lyon Cedex 07, Francia.

2 1078 Los retrovirus poseen todos una transcriptasa reverse (reverse transcriptasa, de donde el término de retrovirus) responsable de la síntesis de una copia de ADN a partir del ARN viral. El ADN así formado (provirus), puede conservarse en el núcleo de ciertas células del hospedador de estos virus y esta propiedad original es la causa de las características particulares de las diferentes infecciones debidas a los retrovirus. Se trata de infecciones persistentes, que se prolongan durante toda la vida del organismo hospedador y corresponden a la presencia de la «información» de origen viral integrada en las células del hospedador. Bajo esta forma integrada, el agente patógeno está al abrigo de las defensas inmunitarias de su hospedador. Salvo casos particulares, los retrovirus se presentan en los organismos infectados bajo la forma proviral mucho más que bajo la forma de viriones completos, circulantes en los líquidos del organismo. Por esta razón, la transmisión se produce habitualmente por la transferencia de sangre o de secreciones que contengan las células infectadas y se ve favorecida por todas las actividades que permitan la inoculación de cantidades, incluso mínimas, de sangre o de otras suspensiones de células: tomas de sangre o inyecciones en serie, cirugía menor, picaduras de artrópodos, absorción de calostro, etc. CUADRO I Retrovirus agentes de enfermedades de los animales domésticos (18) Subfamilia Hospedador Virus Oncovirinae Pájaros Virus de la leucosis aviar (Avian leukosis virus) Virus del sarcoma aviar (Avian sarcoma virus) Virus de la reticuloendoteliosis (Reticuloendotheliosis virus) Bovinos Virus de la leucosis bovina enzoótica (Enzootic bovine leukosis virus) Cerdos Virus del sarcoma del cerdo (Porcine sarcoma virus) Gatos Virus de la leucosis felina (Feline leukosis virus) Virus del sarcoma felino (Feline sarcoma virus) Lentivirinae Ovinos Virus maedi-visna (Maedi-visna virus) Cabras Virus de artritis/encefalitis caprina (Caprine arthritis/encephalitis virus) Caballos Virus de la anemia infecciosa de los équidos (Equine infectious anemia virus) Bovinos Virus de la inmunodeficiencia bovina (Bovine immunodeficiency virus) Gatos Virus de la inmunodeficiencia felina (Feline immunodeficiency virus) Spumavirinae Bovinos Virus espumoso bovino (Bovine foamy virus) Gatos Virus espumoso felino (Feline foamy virus)

3 1079 Los casos particulares corresponden, especialmente, a los mecanismos que permiten a los viriones maduros escapar a las defensas del organismo, como la desviación antigénica registrada, en particular, con el virus de la anemia infecciosa de los équidos. Este carácter de infección persistente confiere a los retrovirus (lo mismo que a los herpesvirus) una seguridad de estabilidad y de perennidad de la infección de los rebaños. La ausencia de curación espontánea de estas infecciones y la persistencia del peligro de transmisión a los organismos sanos, imponen unas estrategias de lucha adaptadas, cuyos principios son actualmente bien conocidos, pero cuya puesta en práctica se muestra, en ciertos casos, de un costo prohibitivo. El objetivo de las líneas que siguen es el de presentar lo esencial de los conocimientos actuales sobre estas tres retrovirosis, desde una óptica de lucha contra estas enfermedades. Las nociones que se presentan provienen de la bibliografía y se han beneficiado de la fuente de informaciones que han proporcionado a la OIE los países cuya lista figura en el Cuadro II. CUADRO II Lista de los países que han dado informaciones a la OIE Africa Argelia, Botswana, Congo, Egipto, Etiopía, Lesoto, Madagascar, Senegal, Sudáfrica, Zambia América Asia Canadá, Chile, Estados Unidos, Haití Indonesia, Japón, Jordania, Myanmar, Oman, Sri Lanka, Taiwan R.O.C. Europa Alemania (Rep. Fed. de), Checoslovaquia, Chipre, Dinamarca, Francia, Irlanda, Italia, Luxemburgo, Noruega, Países Bajos, Reino Unido, Suecia, Suiza, Turquía, Yugoslavia Oceania Australia LA LEUCOSIS BOVINA ENZOÓTICA GENERALIDADES La leucosis bovina enzoótica (LBE) es una enfermedad infecciosa y contagiosa, propia de los bovinos, debida a un virus de la familia de los Retroviridae: el virus leucemógeno bovino (VLB).

4 1080 Reinando en forma enzoótica en los rebaños bovinos, se desarrolla: -bien sea bajo la forma de una infección inaparente, a veces acompañada de una modificación del hemograma (linfocitosis persistente), - o bien como una forma tumoral, encontrada principalmente entre los bovinos adultos (de media de 5 a 8 años) y que se define en este caso como una afección neoplásica maligna de la línea linfoide, evolucionando en la mayoría de los casos bajo la forma de un linfosarcoma multicéntrico. La LBE debe distinguirse de otras dos afecciones leucósicas que afectan severamente de forma esporádica los bovinos y cuya etiología es desconocida: - la leucosis juvenil (bien sea en la forma tímica, o bien en la forma multicéntrica), - la leucosis cutánea del adulto. La distinción entre estos diferentes casos se reagrupa en el Cuadro III. CUADRO III Las diferentes leucosis bovinas (18) Formas lesionales Epidemiología Virus de la LBE Juvenil Multicéntrica - Tímica Esporádica - Adulta Cutánea Multicéntrica Enzo ótica + La LBE es una enfermedad expandida universalmente. Aunque no se tenga ninguna certidumbre, parece que la LBE no es transmisible al hombre (13). Ni la investigación del virus entre los profesionales expuestos (veterinarios, criadores, personal de mataderos o de lecherías), ni la investigación de una tal etiología entre los casos de cánceres humanos (leucemia y otros) han sido positivos (7). A pesar de ello, el virus puede multiplicarse en las células de monos y en las células humanas (27) y algunos autores han observado la aparición de anticuerpos específicos en los chimpancés inoculados (90). Desde el punto de vista económico, la LBE no ha constituido jamás una enfermedad de los rebaños bovinos responsable de pérdidas económicas considerables. Sus repercusiones varían según los países. Solamente los casos tumorales, inexorablemente mortales, constituyen una pérdida económica directa. Su frecuencia depende de las tasas de infección de los animales y varía por lo tanto mucho en función de los países, desde algunas unidades a algunas centenas por cada canales.

5 1081 Algunos países han logrado una tasa de infección prácticamente nula en sus ganaderías, mientras que otros, por lo contrario, mantienen una tasa de infección de sus ganados superior al 50%. Las exigencias sanitarias establecidas para la importación de los bovinos por los países que habían dedicado importantes esfuerzos a la erradicación de la LBE, han llevado a todos los países implicados por los cambios internacionales de bovinos a interesarse por la situación epidemiológica de LBE y a adoptar una política de lucha teniendo en cuenta sus objetivos y los apremios económicos. VIROLOGÍA El retrovirus de la LBE es cercano de los virus HTLV I y HTLV II del hombre (39). Sus principales características han sido objeto de una reciente revisión (6). La totalidad de su secuencia nucleotídica es conocida actualmente y esto ha permitido, junto a los caracteres generales de los retrovirus, identificar algunas características particulares (65, 66, 67, 79). Así, existe un gene codificado por una proteasa, que imbrica los genes GAG y POL pero que se lee en un cuadro de lectura diferente (Figura 1). Dos cuadritos abiertos de lectura (SOR y LOR) se sitúan después del gene ENV. El producto de los genes LOR y SOR activa la transcripción de los ARN mensajeros virales (11, 30, 75, 76) y puede ser de algunos ARN mensajeros celulares, lo que aportaría una hipótesis para explicar el poder oncógeno de este virus (6). FIG. 1 Estructura del genoma del provirus de la leucosis bovina enzoótica (6) Las proteínas estructurales del virus comprenden las proteínas internas (pl5, p24, pl2, pl4) y las glucoproteínas de envoltura (gp30 y la glucoproteína mayor gp51). Diferentes epitopos de la gp51 se han identificado con la aplicación práctica de desarrollar las pruebas de competición ELISA (62), que permiten revelar la presencia de anticuerpos anti gp51 en los bovinos infectados. Inicialmente, la replicación del virus se ha obtenido mediante el cultivo en linfocitos de bovinos infectados espontáneamente y en estado de linfocitosis persistente (50).

6 1082 Una producción viral, sin efecto citopatógeno, puede obtenerse bien sea en línea continua de linfocitos, o bien por co-cultivo de linfocitos infectados con las células efectrices (células de murciélago, células esplénicas de embrión de bovino, células renales de fetos de cordero o FLK: Fetal Lamb Kidney). La infección por el virus de la LBE entraña la aparición de anticuerpos neutralizantes; estos no tienen, no obstante, ningún efecto protector contra el desarrollo de un linfosarcoma. Los anticuerpos anti gp51 inyectados a un cordero permiten protegerle frente a una prueba virulenta (44). Hasta el momento presente, los estudios destinados a la puesta a punto de una vacuna contra la LBE no han sido decisivos (concentración de antígeno gp51 y adsorción sobre adyuvante, recombinación con el virus de la vacuna, introducción en los complejos inmunoestimulantes ISCOM, etc.) (55, 68) pero parece que pueden tenerse esperanzas (6). PATOGENIA La patogenia de la LBE es compleja y permanece oscura en numerosos puntos. La infección por el virus leucemógeno bovino se traduce por tres estados sucesivos y acumulativos: la infección inaparente, la linfocitosis persistente y el linfosarcoma. La infección inaparente El animal no presenta ningún signo clínico ni hematológico, únicamente su respuesta serológica es positiva. La infección puede adquirirse antes del nacimiento (pequeño porcentaje de infección in útero); la tasa de infección en los rebaños leucósicos aumenta con la edad. Después de la infección, el plazo de seroconversión varía de 2 a 8 semanas y depende sin duda, en parte, de la carga viral del inoculo. Por ejemplo, este plazo es de 3 a 4 semanas después de la inoculación de linfocitos (o sea el equivalente de 1 mililitro de sangre) por vía intradérmica, intratraqueal o subcutánea. El plazo es del mismo orden después de la inyección de 50 microlitros de sangre. En condiciones naturales, no obstante, la respuesta serológica de algunos bovinos puede no hacerse positiva en inmunodifusión más que después de tres meses de la infección. La linfocitosis persistente La fórmula sanguínea de un bovino afectado está perturbada por un aumento persistente de los linfocitos. La linfocitosis persistente aparece raramente antes de la edad de los 2 años. Según los rebaños, alcanza del 10 al 90% de los animales infectados. Lo más frecuentemente persiste varios años, hasta la muerte del animal. A veces, esta linfocitosis precede a la aparición de los tumores, siendo entonces la duración de la evolución variable, entre algunas semanas a algunos años. Puede también desaparecer antes de la aparición de los tumores.

7 1083 La linfocitosis persistente corresponde a una proliferación policlonal de linfocitos B, caracterizada por una presencia simultánea de numerosos clones linfocitarios distinguibles por las zonas diferentes de integración de los provirus en los cromosomas. No se trata por tanto de células tumorales, ya que su capacidad de ser multiplicadas in vitro es diferente de la de las células transformadas (6). De manera inversa, las células tumorales derivan lo más corrientemente de un solo clon celular, aunque, en función de los tumores, las zonas de integración cromosómica del provirus aparezcan diferentes (34). Finalmente, las células tumorales, aunque integren el ADN proviral en sus cromosomas, no sintetizan (o lo hacen muy poco) las proteínas virales (6). El incremento de los linfocitos afecta también a los linfocitos T (96). En los casos de linfocitosis persistente, la tasa de anticuerpos aumenta al mismo tiempo que el número de leucocitos. El linfosarcoma Es ésta la única forma clínicamente visible y se caracteriza por la aparición de tumores, asociada a una linfocitosis persistente y a una respuesta serológica positiva. El linfosarcoma aparece en general en los animales entre S y 8 años. No se desarrolla más que sobre un escaso porcentaje de los bovinos infectados, o sea, cada año, el 0,5 al 1 % de los animales infectados. La evolución se hace rápidamente hacia la muerte. La respuesta inmunitaria frente al virus leucemógeno bovino no ejerce ningún efecto protector frente al desarrollo tumoral. En un animal infectado, las tasas de anticuerpos son generalmente más elevadas cuando se desarrolla un linfosarcoma que en el caso de solamente una leucositosis persistente. Los animales afectados de linfosarcoma no presentan una inmunosupresión. Así mismo, tampoco se ha observado inmunosupresión en los animales infectados en el curso de su vida fetal (81). Epidemiología descriptiva EPIDEMIOLOGÍA La infección por el virus de la LBE ha sido señalada en la mayor parte de los países que lo han investigado y donde ella se presenta de forma enzoótica en ciertos rebaños o regiones. La situación actual es muy variable en función de los países (Cuadro IV). En el seno de un mismo país, las tasas de infección de los rebaños pueden ser muy diferentes de una región a otra. En los diferentes países, la difusión de la infección está en relación con la importación de reproductores. En las ganaderías infectadas, las tasas de infección de los animales son muy variables, desde algunos individuos, al 30-50%, o incluso más. En los países templados, las conversiones serológicas de los animales son más numerosas al final del verano (47). Los casos tumorales aparecen en cualquier momento del año.

8 1084 CUADRO IV Principales informaciones relativas a la epidemiología y a las medidas de lucha oficiales dadas por los países que han enviado un informe a la OIE sobre la leucosis bovina enzoótica País Epidemiología Medidas de lucha oficiales Africa Argelia Casos esporádicos en el Enfermedad de declaración Dirección de los este del país, esencialmente obligatoria. Servicios veterinarios sobre ganado importado Control serológico a la importación Botswana Enfermedad no identificada Departamento de los por aislamiento de virus Servicos Veterinarios (M.G. Mosienyane) Congo Enfermedad no señalada Dirección de Producción Animal (J. Bansimba Maringa) Egipto No señalada Organización General de los Servicios Veterinarios (A.A. Moussa) Etiopía No señalada Departamento de Servicios Veterinarios (Z. Dagnachew) Lesoto Ausencia Departamento de Salud animal (O.L. Letuka) Madagascar Enfermedad no señalada Dirección de Cría (V.R. Ranatvoson) Sudafrica Enfermedad enzoótica. Tasa Directorate of Animal de infección de los animales Health pudiendo alcanzar el 90% en (D.W. Verwoerd) los rebaños lecheros; incidencia más baja en las razas de carne Zambia Ausencia Departamento de Servicios Veterinarios y de Control Tsetse (K.L. Samui) América Canadá Situación sin duda parecida No es enfermedad de declaración Dirección General, a la señalada por Keller a obligatoria. Se considera que Producción e inspección la OIE en 1981: infección para la exportación una de los alimentos del 41% de los rebaños serologia negativa individual (N.G. Willis) lecheros (9,3% de infección es una garantía suficiente sin de los animales) y del 10% que sea necesario que el de los rebaños de carne rebaño de origen esté indemne (0,5% de infección de los de LBE animales)

9 1085 CUADRO IV (cont.) País Epidemiología Medidas de lucha oficiales Chile Puesta en marcha de un sistema División Protección de certificación de los rebaños pecuaria indemnes de LBE en las regiones (J. Benavides Muñoz) 9 y 10 Asia Indonesia Tasa de infección de los Director General de animales variable según Servicios de Cría las razas de 0,5% a 3% (Soehadji) Myanmar Presencia Cría de ganado y departamento veterinario (Than Tint) Oman Enfermedad no señalada Departamento de Salud Animal (Sultán Ahmed Al Sultán) Sri Lanka Enfermedad no señalada Oficina del Ministerio de Estado para el desarrollo ganadero y producción lechera (S.B. Dhanapala) Taiwàn R.O.C. Aumento de la prevalencia. Consejo de Agricultura Introducción del virus por (R.C.T. Lee) los animales importados Europa Alemania (Rep. Fed. de) Linfocitosis persistente en Enfermedad de declaración Escuela Veterinaria el 50% de los animales obligatoria. Eliminación de Hannóver infectados. Tumor en de los animales con (U. Truyen, L. Haas y 0,1 al 10% de los animales serologia positiva. O.R. Kaaden) infectados. La RFA está casi indemne de En 1979: focos LBE En 1989: 63 focos Checoslovaquia Tasa de infección media de Programa de lucha intensiva Administración Estatal Veterinaria los animales: 1,13% en trance de aplicación (J. Krecek) Dinamarca Desde enero de 1988 a (P. Have y octubre de 1989, se han R. Hoff-J0rgensen) identificado tres rebaños infectados, mediante la prueba ELISA sobre sueros individuales ( sueros) Irlanda Introducción de la Departamento de infección por un lote de Agricultura y 80 bovinos importados de Alimentación (R.G. Cullen) Canadá en Detección de todos los animales infectados en los rebaños correspondientes y sacrificio. Desde 1979, ausencia de respuesta positiva

10 1086 CUADRO IV (cont.) País Epidemiología Medidas de lucha oficiales Luxemburgo No parece existir Enfermedad de declaración Administración de los obligatoria Servicios Veterinarios (J. Kremer) Suecia Tasa de infección de los Programa de lucha a Instituto Nacional animales variable según base del voluntariado Veterinario las regiones, máximum en (A. Eng valí y el sudeste M. Wierup) Suiza Escasa prevalencia Laboratorio del Servicio serológica: 3 respuestas Cantonal Veterinario positivas sobre (A.F. Gachet-Piguet) ELISA en leche de mezcla Turquía Casos esporádicos Director General de Producción y control (E. Istanbulluoglu) Oceania Australia Tasas de infección de los Enfermedad de declaración Departamento de rebaños lecheros en obligatoria en todos Agricultura Queensland: 70,9% (tasa los Estados. Programa oficial (T.M. Ellis) de prevalencia de la de lucha solamente en el infección entre los Estado de Queensland animales: 13,7%). Tasa de infección de los animales de razas de carne: 0,4% Epidemiología analítica Fuentes de virus La fuente de virus casi exclusiva está representada por los bovinos infectados. El virus leucemógeno bovino está presente en los linfocitos de los animales infectados; de aquí que toda materia extraída de un bovino infectado y que contenga los linfocitos, puede ser virulenta. a) La sangre La fracción celular de la sangre y sólamente ella alberga al virus. No obstante, en el caso de almacenamiento prolongado de las muestras (2 semanas a + 4 C), el virus puede aislarse también del plasma sanguíneo, debido sin duda al hecho de una lisis celular (69). El nivel de la «viremia» puede apreciarse investigando la cantidad mínima de sangre de bovino infectado necesaria para transmitir la enfermedad: 1/100 de gota puede ser suficiente (57). Roberts y col. (74) han demostrado que la sangre de un bovino puede ser infecciosa unos quince días antes de la aparición de los anticuerpos séricos. La transmisión de la infección se asegura de forma más eficaz con la ayuda de los linfocitos infectados que con una suspensión de partículas virales (35).

11 1087 b) El calostro y la leche El virus ha sido puesto en evidencia en la leche y en el calostro de vacas infectadas (33, 54). Faltan datos sobre el carácter perenne o no de esta excreción durante la lactación así como sobre su nivel. El estudio cinético de la aparición del virus ha mostrado que se efectúa de forma concomitante en la leche y en la sangre, es decir, en los quince días que siguen la inoculación (89). c) El esperma La investigación del virus en el esperma ha sido objeto de numerosos estudios en razón del temor de una posible diseminación del virus a partir de toros infectados de los centros de inseminación (3, 89, 41, 40). Parece que el esperma no es virulento en las condiciones normales. No obstante, las lesiones traumáticas o inflamatorias podrían permitir, en ciertos casos, su contaminación por intermedio de los linfocitos. d) Otras secreciones y excreciones - Orina y heces La investigación del virus por la inoculación al cordero se ha mostrado siempre negativa (52, 64). - Saliva Su virulencia se ha demostrado en 5 bovinos de 17 infectados (61). - Secreciones nasales y brónquicas El virus ha sido aislado de la fracción celular del líquido de lavado brónquico a partir de 6 bovinos infectados de entre 9 (72). En dos casos de seis, las secreciones nasales se han revelado virulentas (fracción celular únicamente). Estos resultados no son sorprendentes a priori por razón del flujo linfocitario permanente que existe entre la circulación general y el pulmón profundo. Queda no obstante posible que una contaminación accidental por los elementos sanguíneos haya podido falsear la experiencia. En resumen, la presencia de los linfocitos en una secreción o excreción condiciona su virulencia. Una extravasación sanguínea o una lesión inflamatoria local pueden engendrar o aumentar la virulencia de una materia normalmente poco o nada virulenta. Esta explicación se deduce de ciertos resultados contradictorios a propósito del poder infeccioso del esperma, de la saliva o de las orinas de bovinos infectados. Por otra parte, parece lógico pensar que las mamitis pueden contribuir a aumentar la carga viral de la leche de las vacas infectadas. Es necesario recordar que, en las condiciones habituales, la sangre sobre todo y la leche, siguen siendo las materias virulentas más importantes. Receptividad Se debe distinguir la receptividad a la infección y la de la expresión de una linfocitosis persistente o de la forma tumoral. -La receptividad intrínseca de los animales a la infección es sin duda muy parecida. Diferentes factores pueden jugar un papel:

12 1088 La presencia de anticuerpos calostrales juega un papel protector en los terneros procedentes de vacas infectadas (93, 36). Las condiciones de cría pueden tener un papel determinante al facilitar o no la transmisión en función de las precauciones tomadas en ciertas circunstancias: descornado, cirugía menor, tomas de sangre en serie, etc. Las ocasiones de contacto estrecho entre animales intervienen sin duda igualmente para favorecer la transmisión (Lassauzet, comunicación personal, 1989). Este factor podría ser en principio la causa de la diferencia sistemáticamente señalada entre la tasa de infección de los rebaños lecheros claramente superior a la de la infección de los rebaños lactantes (en el momento actual, especialmente en Australia, en Canadá, los Estados Unidos, en Sudáfrica, etc.) (véase los informes de estos países). Las condiciones climáticas pueden favorecer la transmisión cuando son favorables a la multiplicación de los insectos. - Los casos familiares de linfocitosis persistente son actualmente bien conocidos. En ciertos rebaños, la infección, tanto como la enfermedad clínicamente expresada, tiene una incidencia particularmente importante. Es verosímil que la capacidad de desarrollar una linfocitosis persistente, incluso un linfosarcoma, depende de factores genéticos. En esta hipótesis, su naturaleza y sus mecanismos de acción no son conocidos (38). Transmisión a) Transmisión directa - Vía oral La transmisión por vía oral ha sido estudiada sobre todo en el marco de una infección del ternero por el calostro o la leche. Ha sido demostrada en condiciones experimentales (92, 93). Pero el papel de la leche y del calostro, a pesar de su carácter potencialmente virulento, parece limitado en condiciones naturales (vía oral) en relación a los factores de contacto (20). Dos hipótesis han sido evocadas para explicarlo: la primera hace jugar un papel protector a los anticuerpos de origen calostral absorbidos por el ternero; la segunda contempla la impermeabilidad de la mucosa intestinal a los linfocitos infectados por el VLB después de las 24 a 36 horas primeras de la vida del ternero. Estos dos factores pueden evidentemente jugar de forma concomitante. La primera hipótesis ha sido confirmada, especialmente por Van der Maaten y col. en 1981 (93) y Lassauzet y col. en 1989 (36). - Via respiratoria La instilación de un aerosol virulento por vía intranasal permite reproducir la infección (91). Por otra parte, la inoculación intratraqueal de linfocitos infectados ha provocado en cuatro casos sobre cuatro la infección de los bovinos (71). Siendo las materias de expectoración de los bovinos infectados potencialmente virulentas, parece que esta vía de transmisión pueda jugar un papel.

13 1089 -Vía venérea Los resultados de las experiencias son contradictorios según que el inculo depositado en el tractus genital de las vacas fuese: los linfocitos aislados de un bovino infectado (4 vacas de cada 6 se infectan) (51), o una mezcla de esperma bovino y de linfocitos infectados (1 vaca de cada 4 se infecta) (71). Parece pues existir un agente espermático inactivante del virus que explicaría las dificultades de aislamiento del virus en el esperma de los bovinos infectados. El papel de la vía venérea parece pues menor. Por otra parte, ninguna publicación manifiesta actualmente casos probados de transmisión venérea de la LBE en condiciones naturales. -Transmisión in útero La transmisión del virus de la madre al feto no plantea actualmente ninguna duda. Sólo las tasas de infección in útero en el seno de una ganadería infectada varían según los autores. La metodología de la encuesta consiste en efectuar una serologia sobre los terneros recién nacidos antes de la toma del calostro (31). La investigación del virus en los linfocitos del recién nacido es un método más seguro. Las tasas de transmisión in útero recogidas en la bibliografía varían de un máximo de un 14 a 25% de las hembras infectadas en un rebaño conocido por su gran receptividad al virus, hasta 3 a 6% de las hembras infectadas en los rebaños representativos de la media del censo bovino (8). Esta transmisión sobrevendría por la vía transplacentaria durante los 6 últimos meses de la vida intrauterina. Este modo de transmisión, sin ser despreciable, no representa pues más que un aspecto sin duda menor, salvo casos excepcionales, de la difusión del virus en el seno de un rebaño. La transmisibilidad de la infección por los gametos del huevo, es decir in ovo, ha sido regularmente invalidada. En un estudio de transferencia de 21 embriones de 6 a 7 días, obtenidos de 8 vacas infectadas, ningún ternero estaba infectado (58). La observación de casos familiares debe estar pues mucho más relacionada con la influencia de los factores genéticos y el contagio precoz. b) Transmisión indirecta Se basa en la virulencia de la sangre de los animales infectados. -Transmisión por los artrópodos picadores Consideraciones de tipo epidemiológico habían llevado a pensar que los artrópodos pueden jugar un papel en la transmisión de la LBE: en los Estados Unidos y en el Japón, la incidencia de la infección aparecía maximalmente durante la estación cálida en la que los artrópodos son más numerosos (8). Estas observaciones han sido confirmadas en Francia (47). Los mosquitos no jugarían más que un papel limitado en la transmisión de la LBE (10), contrariamente a los tabánidos, por dos razones: por una parte, su escaso tamaño y, por otra, sus hábitos alimentarios que les hacen generalmente comenzar y terminar una comida sanguínea sobre el mismo hospedador. Se puede comparar estas constataciones con las, idénticas, señaladas para la anemia infecciosa de los équidos.

14 1090 Foil y col. (23) han transmitido la infección a los corderos y a las cabras a partir de una vaca afectada de linfocitosis persistente por interrupción de la comida sanguínea de Tabanus fuscicostatus; la picadura de 50 a 100 tábanos ha transmitido la infección mientras que la de 10 o 25 tábanos no lo ha permitido. Oshima y col. (56) han obtenido resultados semejantes. Más recientemente (24), estos mismos autores han obtenido la transmisión después de la picadura de 10 a 20 tábanos. Un volumen de 0,1 ml de sangre de una vaca en estado de linfocitosis permanente fue suficiente para transmitir la infección. Una cantidad del orden de linfocitos ha permitido la transmisión. Finalmente, más que por simples transportadores mecánicos, las garrapatas pueden jugar el papel de vectores en la transmisión de la LBE gracias a una transmisión transtadial (32). En resumen, el papel vectorial de los artrópodos en la transmisión de la LBE y especialmente el de los tabánidos se manifiesta cada vez más claramente (47). - Transmisión iatrógena La posibilidad de transmisión de linfocitos infectados de bovino a bovino en ocasión de las tomas de muestras o de inyecciones múltiples con una misma aguja ha sido sospechada desde hace tiempo (95). De esta manera, una cantidad de sangre residual en la luz de la aguja es suficiente para reproducir la infección (29). Ciertas prácticas veterinarias con intenciones profilácticas, el empleo de jeringas, de agujas (70), e incluso a veces de instrumentos quirúrgicos, de un animal infectado a otro, pueden ser culpadas, incluso aunque algunos ensayos no hayan permitido demostrar la transmisión del virus (94). El papel del tatuaje ha sido claramente puesto en evidencia (59, 42, 37). En resumen, se puede concluir, como indicaban Burridge y Thurmond en 1981 (8) que: -Alrededor del 5% de terneros nacidos de madre infectada, se infectan in útero. - La transmisión del virus por ingestión de calostro o de leche parece limitada. - La gran mayoría de los bovinos se infectan por contacto con los animales ya infectados, según modalidades diferentes: promiscuidad, insectos picadores, intervenciones del veterinario sin precauciones, etc. DIAGNÓSTICO Y DETECCIÓN Pasaremos en silencio los diferentes exámenes de laboratorio distintos de los serológicos ya que ellos son muy clásicos (examen histopatológico), o son poco utilizados (examen hematológico) desde la puesta a punto de técnicas serológicas (investigación del virus) (informe de Italia a la OIE, 1989). La detección de la LBE es exclusivamente serológica y se encamina a las tomas de muestras de sangre o de leche, individuales o en forma de mezclas.

15 1091 Bases Después de la infección, el plazo de seroconversión varía en una media de 2 a 8 semanas (53) pero puede a veces sobrepasar los 3 meses (20). Los anticuerpos séricos persisten durante toda la vida económica de los animales, pero su título sufre fluctuaciones en particular al final de la gestación o al comienzo de la lactación o bien puede bajar de forma importante hasta pasar por debajo del nivel mínimo de detección (49, 5). Por otra parte, de manera excepcional, parece que algunos bovinos nacidos de madres infectadas, mantenidos en estricto aislamiento, pueden no dar una respuesta positiva más que después de varios meses, e incluso 3 años después de la desaparición de los anticuerpos de origen materno (83). Estos hechos, que son rarísimos, no deben pues hacer dudar de la noción de base que consiste en considerar que el plazo máximo de aparición de una tasa detectable de anticuerpos es del orden de 3 meses. En el ternero nacido de madre infectada, la desaparición de los anticuerpos de origen materno, no es efectiva más que después de 3 a 7 meses (2, 9, 21, 84, 58). Técnicas Actualmente las dos técnicas mayores de diagnóstico y de la detección serológica de la LBE son la inmunodifusión en gelosa IDG y la prueba ELISA. La inmunodifusión en gelosa Es ampliamente usada. La técnica ha sido codificada en algunos países (por ejemplo en la CEE) y los estuches están disponibles en el comercio. Las modalidades de control de los reactivos han sido precisadas (anexo G de la Directiva 88/406/CEE del 14 de junio 1988). Esta técnica es utilizable exclusivamente para los sueros (individuales o en forma de pequeñas mezclas). Se trata de una prueba simple de realizar, específica y sensible. No obstante debe ser leída por un técnico entrenado y se presta mal al tratamiento y a la lectura de un gran número de sueros. La prueba ELISA Es cada vez más utilizada para el descubrimiento serológico de la LBE (1, 4, 19, 26, 48, 63, 85, 86, 45, 88, 28, 25, 62). Los pocilios o estuches están disponibles en el comercio y llevan diversas modalidades técnicas (ELISA directo o por competición) recurriendo o no a los anticuerpos monoclonales (22). La prueba ELISA puede aplicarse a los sueros o a las leches (individuales o en forma de mezclas). Dentro de las diversidades de las técnicas comercializadas, cada unidad es acompañada por los protocolos de control de los estuches que permiten garantizar niveles satisfactorios de sensibilidad y de especifidad (17). Así, en el seno de la CEE, el nivel mínimo exigido como nivel de sensibilidad o detectabilidad de los anticuerpos es análogo al de la inmunodifusión en gelosa para los sueros y se establece en función de un suero de referencia (suero E4 al 1/10 ). Para la leche, un nivel mínimo análogo se exige, destinado a permitir obtener al menos las mismas prestaciones que las resultantes del análisis por IDG del suero del animal del que se ha estudiado la leche en ELISA.

16 1092 Esta exigencia está basada en un razonamiento que admite que en términos medios el título en anticuerpos de la LBE es 25 veces más débil en la leche que en el suero de la misma vaca [10 veces más bajo para Florent y col. (22); 27 veces más bajo para Mammerickx y col. (46); 26 veces más débil, informe de Dinamarca a la OIE, 1989]. Se trata por supuesto de una media ya que los diferentes estudios (87, 14) han demostrado perfectamente las fluctuaciones de los títulos de anticuerpos de la LBE durante la lactación. Para una leche individual, la prueba ELISA debe pues revelar al mínimo la cantidad de anticuerpos contenidos en el suero E4 diluido al 1/250 (dilución 25 veces más fuerte que el 1/10). Para las leches de mezcla, el nivel de detectabilidad exigible es el mismo, lo que implica tener en cuenta el número de vacas de las que proviene la mezcla de leches o recurrir a una técnica de concentración del lactosuero. Para Forschner y col. (25), un pocilio ELISA comercializado permite desde ahora obtener una respuesta positiva sobre una leche de mezcla de 100 vacas, de las que sólo una está infectada. Las ventajas de la prueba ELISA residen en su rapidez de ejecución referida a un número elevado de muestras que se pueden estudiar en una sesión, su lectura objetiva y sus posibilidades de automatización. Un control sistemático de los lotes de cada productor permite obtener una sensibilidad y una especificidad satisfactorias (17) y, en estas condiciones, la prueba ELISA se muestra como un sistema económico y eficaz para la detección sistemática de la infección de los rebaños lecheros, así como para el control de rutina del estado satisfactorio de los rebaños sanos o saneados (15, 16). La interpretación La interpretación de los resultados serológicos obtenidos sobre el suero de un animal debe tener en cuenta la edad del animal, la fecha del último contacto con un animal infectado y el estatus serológico de la madre en el caso de los terneros jóvenes. Se resume en el Cuadro V. A nivel individual se tendrá en cuenta que todo bovino de más de 7 meses con una serología positiva, debe considerársele como infectado y por lo tanto como una fuente de contaminación potencial. No se puede dar fiabilidad a una respuesta negativa obtenida al final de la gestación o en el comienzo de la lactación en una vaca que pertenezca a una ganadería infectada. A nivel de una ganadería, se puede recordar la siguiente regla: un rebaño no se le puede considerar como indemne de LBE desde el punto de vista médico, más que si dos exáménes serológicos del conjunto de los animales de edad superior a los 7 meses, practicados con más de tres meses de intervalo, se han mostrado negativos, en ausencia de posibilidad de contaminación durante este periodo. PROFILAXIS SANITARIA Siendo la LBE una enfermedad infecciosa provocada por un virus que se transmite, de manera esencial, por contacto entre un animal infectado y un animal sano, es posible combatir la extensión de esta enfermedad mediante medidas estrictamente sanitarias.

17 1093 CUADRO V Interpretación de los resultados serológicos de diagnóstico individual de la LBE Bovino Resultado serológico Ultimo contacto con un animal infectado Interpretación < 7 meses + Si nace de madre infectada: distinción con anticuerpos de origen calostral imposible; recomenzar el examen después de los 7 meses de edad Si nace de madre indemne o ausencia de toma de calostro: animal infectado - < 3 meses > 3 meses Repetir un examen más de 3 meses después del último contacto con un animal infectado Animal sano + Animal infectado > 7 meses - < 3 meses > 3 meses Repetir un examen más de 3 meses después del último contacto con un animal infectado Animal sano Se pueden distinguir las medidas a establecer a nivel de un rebaño, a proteger o sanear, y en plan regional o nacional. Lucha a nivel de un rebaño Protección de un rebaño sano a) Introducción de animales en el rebaño La medida más evidente y la más eficaz es sin duda el evitar la introducción de un animal infectado en el seno del rebaño. Durante la puesta en cuarentena de un animal comprado, una petición de diagnóstico serológico es por lo tanto necesaria: para los animales comprados en ganaderías indemnes, es suficiente un solo examen serológico. Por lo contrario, para los animales procedentes de rebaños infectados o de situación sanitaria desconocida, será imperativo el observar una cuarentena de 3 meses practicando un control serológico al comienzo y al fin de la misma. Una duración de cuarentena tan larga suele ser difícilmente realizable en la práctica, por lo que es deseable el no introducir en los rebaños indemnes más que animales procedentes de ganaderías sanas.

18 1094 b) Material de los veterinarios Debe llamarse la atención de los veterinarios sobre la necesidad absoluta de cambiar sistemáticamente de aguja en su material de toma de sangre o en la intravenosa entre dos explotaciones. c) Pastoreo de los animales La cohabitación de ganados sanos e infectados en los pastos comunales puede considerarse como un factor de riesgo en las regiones en las que los tábanos o, en menor importancia, los mosquitos, son numerosos. Por analogía con la anemia infecciosa de los équidos, una distancia de unos 50 metros entre el rebaño infectado y el rebaño sano limitará fuertemente los riesgos de transmisión por los artrópodos. La periódica verificación de la ausencia de infección del rebaño, será deseable. En los rebaños lecheros ésta puede asegurarse simplemente por la prueba ELISA aplicada regularmente a la leche de mezcla de la explotación. En los rebaños lactantes, la detección puede hacerse anualmente sobre mezclas de sueros tomados para otras pruebas profilácticas, como por ejemplo, de la brucelosis bovina. Saneamiento de rebaños infectados Las medidas a tomar se relacionan con dos categorías: - Por una parte, la utilización de algunas reglas profilácticas simples que permitan limitar la diseminación del virus en el seno del rebaño. - Por otra, la puesta en marcha de un plan de lucha con vistas a la erradicación de la infección. a) Las reglas profilácticas -Agujas e instrumentos de los veterinarios Las reglas profilácticas tratan sobre todo de evitar toda clase de transporte de sangre de un animal infectado a otro: es por lo tanto indispensable, cuando se realize una toma de sangre o una inyección intravenosa, el utilizar agujas de uso único. Los datos experimentales son suficientemente sólidos para que la responsabilidad del veterinario clínico pueda ser comprometida si una tal precaución no se ha respetado. Por lo mismo, la desinfección de todos los instrumentos quirúrgicos utilizados «en serie» es necesaria (descornado, castración) y el cambio entre cada animal de los guantes de plástico utilizados en las exploraciones rectales, es una buena precaución. Di Giacomo y col. (12) han demostrado la utilidad del respeto de precauciones durante el descornado y han obtenido una disminución de la transmisión del virus. Ruppaner y col. (78) han resumido las precauciones a tener en cuenta para evitar la transmisión de sangre de un animal a otro:

19 1095 Precauciones a respetar para evitar la transmisión de sangre de un animal a otro Acciones Intervención con la ayuda de instrumentos Tatuaje y colocación de marcas en la oreja Descornado Ablación del pezón Vacunación y detección global Exploración rectal Precauciones Los instrumentos deben ser limpiados y lavados con agua caliente, sumergidos en lejía y después en agua de javel Los instrumentos deben ser desinfectados entre cada ternero Sólo 2 a 3 animales deben descornarse al mismo tiempo, y después deben mantenerse separados para evitar que se froten uno contra otro. La hemostasia debe asegurarse y la herida tratada con un desinfectante y un repelente para los artrópodos Es necesario emplear una hoja de bisturí diferente para cada animal. La hemostasia debe ser correcta Es preciso cambiar de aguja para cada animal para las tomas de sangre, las vacunaciones y las tuberculinizaciones Es necesario cambiar de guantes de plástico para cada vaca - Artrópodos Una atención particular debe ponerse en la lucha contra los artrópodos picadores. Existen, en particular, unas plaquitas auriculares de efecto repelente que son eficaces durante varios meses y cuyo empleo se puede aconsejar. - Calostros La toma calostral, en los terneros nacidos de madre infectada, no presenta riesgos mayores frente al beneficio para el animal ya que representa para éste la adquisición de una buena inmunidad pasiva. No obstante, cuando ello sea posible, es deseable la pasteurización del calostro ya que preserva la actividad de las inmunoglobulinas, suprimiendo en cambio la infecciosidad viral (73, 77). Se puede también utilizar el calostro de vacas indemnes. b) Plan de lucha Hay dos tipos de planes de lucha que pueden permitir la erradicación de la infección en un rebaño: la eliminación por matanza de los bovinos infectados, o la puesta en marcha de un plan de separación total de los bovinos infectados en establos independientes. - Eliminación de los bovinos infectados Podría proponerse el siguiente modelo: control serológico de todos los bovinos de más de 7 meses, cada 3 a 6 meses; aislamiento y sacrificio de los animales con serología positiva; el rebaño se considera como saneado cuando todos los animales que hayan eliminado los anticuerpos calostrales propios, han dado una respuesta serológica negativa 2 veces con 6 meses de intervalo.

20 1096 Este método da excelentes resultados. Su eficacia es menor cuando un número de fallos determinado se produce en el protocolo: falta de identificación de los animales, sustitución de animales, introducción de animales infectados, tomas de sangre en serie con la misma aguja, etc. Por esto es necesaria una perfecta coordinación entre los 4 niveles implicados en el proceso de lucha: la explotación ganadera, el veterinario clínico, los laboratorios de diagnóstico y el Servicio Veterinario oficial (43). Por otra parte, el éxito de las medidas de lucha está disminuido también cuando la tasa incial de animales infectados y/o el porcentaje de animales jóvenes infectados son elevados. La mayor dificultad de saneamiento de los rebaños fuertemente infectados, como se conoce bien para la brucelosis y la tuberculosis bovinas, justifica plenamente el sacrificio de entrada de la totalidad de los animales del rebaño. Este tipo de profilaxia, aunque tiene la ventaja de ser eficaz (80), sencillo de poner en marcha, y aplicable a todos los tipos de explotaciones, sigue siendo por lo menos de un coste prohibitivo para el ganadero si no hay una política de subvenciones para los sacrificios. Conduce efectivamente a eliminar los animales cuyo porvenir económico no habría sido más que raramente comprometido por la aparición de una forma tumoral. Por consiguiente, este modelo de profilaxis puede difícilmente ser aplicado por un criador a título individual (al menos en los casos de rebaños muy infectados), pero encuentra plenamente su indicación en el cuadro de una acción colectiva. - Separación de los animales infectados La creación de un rebaño sano a partir de unos efectivos infectados ha sido estudiada y ha tenido éxito (82) aislando los terneros indemnes del resto de rebaño. Este tipo de profilaxis, con el inconveniente importante de poder disponer de locales adecuados y de extremar el rigor en el manejo del rebaño, puede ya permitir a un ganadero motivado, el eliminar la infección leucósica de su ganadería. Es preciso, en este caso, disponer de técnicas serológicas muy sensibles (o de repetir los exámenes), de forma que se evite la introducción en la ganadería sana de un ternero considerado como indemne mientras él se encuentre al comienzo de la seroconversión. Lucha a escala regional o nacional De manera general, el saneamiento de un país frente a una enfermedad de incubación larga como la LBE (o la tuberculosis) no se puede hacer más que teniendo en cuenta el conjunto de animales infectados, potencialmente fuentes de contaminación durante un periodo largo, sin limitarse a ver sólo la parte emergente del iceberg que representan los focos donde se manifiesta la enfermedad. Esto es tanto más cierto en el caso de la LBE donde muchos animales infectados pueden llegar al final de su vida económica sin exteriorizar los síntomas de LBE (o sin que sean reconocidos como infectados). Cada país debe de definir su política de lucha en función de la situación epidemiológica y de los objetivos a alcanzar. Para algunos países, el objetivo puede limitarse a la exportación de reproductores, sin contemplar por lo tanto la erradicación de la infección, particularmente por razón del elevado costo de un tal programa.

21 1097 Para otros países, el objetivo de erradicación puede ser contemplado, con un calendario de lucha y con etapas variables en función de la situación epidemiológica y de los recursos de todo orden a dedicar a la lucha contra esta enfermedad. No existe ningún programa valedero para todo. Cada país debe definir su programa, teniendo en cuenta los criterios señalados anteriormente y a la luz de las informaciones suministradas por los países que ya han llegado a la situación de erradicación. La puesta a punto de pruebas ELISA de gran sensibilidad (pero conservando una especificidad satisfactoria) aplicables a las mezclas de muestras (leches o sueros) ha sido un decisivo progreso para una realización económica de las primeras etapas de la investigación de la infección en un país y de la ulterior vigilancia de los rebaños sanos. El saneamiento de los rebaños infectados pasa obligadamente por un diagnóstico individual. La experiencia de los países europeos que han comenzado la lucha hace varios años, muestra que la aplicación de las medidas sanitarias clásicas permite hacer desaparecer la enfermedad. El plazo para obtener la erradicación es tanto más largo cuanto que la tasa de infección inicial de los rebaños sea elevada y que las medidas aplicadas sean incompletas. Cuando las medidas son empleadas correctamente y la tasa de infección de los animales no es muy elevada, el saneamiento de los rebaños infectados se obtiene rápidamente. El número de países que han consagrado sus esfuerzos y sumas importantes a la lucha contra la LBE aumentará progresivamente. Estos países pedirán un respeto en la aplicación de las normas que permitan la garantía de la ausencia de riesgo de recontaminación de sus ganados a partir de animales importados, conforme al Código Zoosanitario Internacional de la OIE. LA ANEMIA INFECCIOSA DE LOS ÉQUIDOS La anemia infecciosa de los équidos (AIE) es una virosis propia de los équidos, de evolución lo más corrientemente crónica con episodios agudos, que se traduce por fiebre, anemia, abatimiento y edemas. Esta enfermedad se caracteriza por la perennidad de la viremia durante años, la formación de lesiones de origen inmunológico y la plasticidad antigénica aparente de sus virus. Señalada por primera vez en Francia, en 1843, por Lignée, fue estudiada en el curso de la segunda mitad del siglo XIX y los trabajos de Vallée y Carré (143) llegaron a la posibilidad del aislamiento del virus y al conocimiento de las modalidades del contagio. Posteriormente, la AIE ha sido identificada sucesivamente en la mayor parte de los países y se la encuentra actualmente con una frecuencia y una gravedad variables en numerosos países de Africa, América, Asia, Australia y en Europa.