Documento Técnico TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA PARA LA INSEMINACIÓN DE YEGUAS EN LA REGIÓN OESTE DEL ESTADO DE MÉXICO

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1 Documento Técnico TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA PARA LA INSEMINACIÓN DE YEGUAS EN LA REGIÓN OESTE DEL ESTADO DE MÉXICO INNSERP, Innovación y Servicios Profesionales S.A. De C.V. 30 de mayo de

2 Introducción La calidad del semen equino es un aspecto muy importante para asegurar la obtención de potrillos en los ranchos caballares y ayudar a la mejora de la fertilidad de los hatos (Morris, 2004). El estado de México es un productor potencial de equinos y por ello sus productores se han preocupado por mejorar la calidad genética de sus animales a través de técnicas como la inseminación artificial (IA) que permitan asegurar la obtención de potrillos de animales de alto valor genético. Otro aspecto importante es el alto costo de las dosis de semen importado. Los problemas reproductivos se presentan a menudo en las yeguas y son causados por distintos factores como son el fotoperiodo, la temperatura, la alimentación. El interés en el uso de la IA se ha incrementado en los últimos años debido a la transmisión de enfermedades venéreas por medio de la monta natural y al riesgo que esta implica el manejo de los garañones y yeguas de alto valor económico. Además, permite cubrir un mayor número de yeguas con una mínima cantidad de saltos y reducir los costos operativos. Actualmente se inseminan las yeguas con 500 millones de espermatozoides con motilidad progresiva (EMP), en semen fresco, o con un billón de EMP con semen refrigerado y almacenado durante 24 horas a 5ºC. La dosis utilizada con semen congelado varía entre 400 a 800 millones de espermatozoides. El número mínimo generalmente recomendada de espermatozoides necesarios para inseminación artificial convencional en la yegua es en exceso de 200 millones de espermatozoides progresivamente móviles. La implementación de distintas dosis y tipos de semen reducirán los costos de producción por servicio y aumentarán la eficiencia del manejo reproductivo reflejándose en el número de yeguas que queden gestantes. El objetivo de este experimento es evaluar el efecto de la concentración de espermatozoides en la dosis y el tipo de semen en la fertilidad de la yegua inseminada artificialmente. 2

3 Material y métodos Ubicación del experimento El proyecto se realizó en ranchos comerciales de equinos pertenecientes al Sistema Producto Equino del Estado de México, en su mayoría están localizados en los municipios de Metepec y San Mateo Atenco en la región del Valle de Toluca. La zona tiene una altitud de 2,670 msnm, su latitud está en el paralelo de 19 15' de latitud al norte, su longitud oeste del meridiano de Greenwich es 99 36'10". Clima La temperatura media fluctúa entre los 14ºC, la máxima entre los 28ºC y la mínima entre los 3.5ºC. La temporada de heladas de invierno en ocasiones se prolonga hasta los meses de marzo y abril. Selección y manejo de los animales Para la implementación del proyecto se emplearán 80 yeguas de la raza Cuarto de Milla de 500 kg de Peso Vivo con condición corporal adecuada. Los animales estarán en sistemas de pastoreo en época no reproductiva y en época reproductiva se mantendrán en confinamiento recibiendo una dieta basal con 12% de PC y 2.0 Mcal de EM y agua a libre acceso. Inseminación artificial a implementar La inseminación artificial se realizará con la técnica vaginal con una aplicador de semen congelado tipo americano flexible proveniente de sementales de alta calidad genética solicitados por los productores, también con semen fresco de sementales de fertilidad conocida del Sistema Producto Equino. La yegua recibirá dos servicios, la primera el segundo día de celo y la segunda al cuarto día del celo. 3

4 Diagnóstico de gestación El diagnóstico de gestación se realizará 35 días después del servicio con ultrasonido de tiempo real, utilizando un tramo duetos de 5.0 MHz atrás de palpación rectal. Tratamientos En el experimento se evaluarán cuatra tratamientos distintos en donde se emplearan 80 yeguas de la raza Cuarto de Milla, cada tratamiento tendrá 20 animales y cada yegua será una unidad experimental. Los tratamientos serán los siguientes: Tratamiento 1: Semen Fresco con Dosis Baja. Tratamiento 2: Semen Fresco con Dosis Normal. Tratamiento 3: Semen Congelado con Dosis Baja. Tratamiento 4: Semen Congelado con Dosis Normal. Técnicas recomendadas para la mejora y eficiencia reproductiva en la yegua Inducción a la ovulación en yeguas El estro suele durar entre 5 y 7 días durante la estación reproductiva, y la ovulación se produce horas antes del periodo final del estro. Las yeguas son más fértiles justo antes o alrededor del momento de la ovulación. Como el momento de la ovulación no puede predecirse confiabilidad, las yeguas suelen ser apareadas cada dos días o hasta que se da la ovulación. Poder conocer el momento de la ovulación tiene muchas ventajas para el veterinario equino, y entre ellas se incluyen: 1) Reducción del número de apareamientos necesarios por parte de sementales muy solicitados. 2) Mayor precisión en el momento de la inseminación al usar semen congelado importado o semen fresco de sementales viable durante muy poco tiempo. 3) Reducción del número de apareamientos o inseminaciones en el caso de yeguas problemáticas o difíciles. 4

5 4) Optimización del uso de sementales deseables, pero subfértiles. Actualmente hay dos tipos de hormona usados para inducir la ovulación en las yeguas: la gonadotropina coriónica humana (hcg) y la hormona liberadora de gonadotropinas (GnRH), que han sido usadas durante muchos años. En el caso de la hcg, la dosis normal es de U.I. y 1500 UI en razas livianas, administradas por vía intravenosa cuando la yegua muestra el comportamiento propio del estro y tiene un folículo de más de 35 mm. La ovulación se da en las siguientes 48 horas, con un porcentaje de respuesta del 83-89%. Se ha demostrado que la gonadotropina coriónica humana induce la formación de anticuerpos si se administra a altas dosis y su dosificación es frecuente. No obstante, la administración repetida de dosis normales ( U.I.), incluso en 5-6 ciclos consecutivos, no interfirió con la fertilidad. Aunque no existen pruebas de que la hcg tenga un efecto directo positivo sobre el porcentaje de gestaciones, varios estudios reportan unos mejores porcentajes de gestación en las yeguas tratadas con hcg: al ser tratadas antes de la ovulación, los porcentajes de gestación fueron del 66% con respecto al 50% en el caso de los controles. Los porcentajes más altos fueron, probablemente, resultado de la mejor sincronización de la ovulación y del apareamiento/ia. La hormona liberadora de gonadotropinas también ha sido recomendada para la inducción de la ovulación en yeguas cíclicas. Se han estudiado varios regímenes de administración de la GnRH que implican la inyección intermitente, la administración pulsátil, los implantes de liberación lenta y la inyección única. observaron que la mayoría de las yeguas tratadas dos veces al día con una dosis intravenosa de 20 o 40 mcg de buserelina ovularon al cabo de 48 horas. Camillo et al. (2004), obtuvieron unos resultados similares, pero estos autores afirmaron que se obtenían unas ovulaciones más compactas cuando se usaba hcg. Recientemente, el uso de un análogo de la GnRH, la deslorelina, en forma de implante ha sido aprobado para la inducción de la ovulación en las yeguas. Su uso está indicado en el caso de las yeguas que muestran un estro comportamental y tienen un folículo de por lo menos 30 mm de diámetro. Los resultados del estudio reportado por Vandervall et al. (2001) confirmaron investigaciones previas de que, aunque la respuesta ovulatoria y la fertilidad no eran distintas para las yeguas tratadas con hcg y con implantes de deslorelina, las del segundo grupo que no lograron quedar gestantes vieron retrasado, de forma significativa, su retorno al estro y tuvieron un intervalo interovulatorio prolongado. En el estudio reportado por Blanchard (2002), el tratamiento de las yeguas con hcg y deslorelina dio como resultado unas respuestas ovulatorias y unos porcentajes de gestación similares. Sin embargo, las yeguas tratadas con deslorelina tenían menos folículos ováricos 5

6 20mm de diámetro 16 días después del tratamiento que las yeguas tratadas con hcg. Un estudio reciente de Berezowski et al. (2004) comparó la eficacia de las ovulaciones inducidas por la hcg, el implante de deslorelina y la inyección de deslorelina. Los tres productos dieron lugar a una respuesta aceptable para su uso en la clínica práctica, sin diferencias entre ellos en cuanto a la proporción de yeguas que ovulaban al cabo de 2 días después del tratamiento. Supresión del estro en yeguas de exposición o competición El comportamiento propio del estro puede, a veces, suponer un problema en las yeguas de exposición. La terapia de progestágenos con altrenogest es eficaz para suprimir el comportamiento propio del estro. Si la yegua está en celo cuando se inicia el tratamiento, el comportamiento propio del estro suele verse suprimido en 2-3 días. Cuando se está pensando en la terapia con progestágenos para los ejemplares de exposición o competición, debería tenerse en cuenta cualquier legislación local con respecto al uso de productos farmacéuticos en caballos de competición. Inseminación artificial en equinos La inseminación artificial (IA) se está haciendo más común, ya que ofrece ciertas ventajas tanto en términos de manejo como de salud: Puede aparearse un mayor número de yeguas con un único semental. La yegua puede ser apareada en su hogar, reduciendo así los riesgos asociados con el transporte y con la recogida de caballos de varios lugares. Se eliminan del costo del transporte y de la póliza de seguro. No hay necesidad de arriesgarse a lesiones del potro neonato durante el transporte. El riesgo de lesiones de la yegua, el semental y los cuidadores, que es inevitable con la monta natural, se ve muy reducido. Menor oportunidad para la diseminación de enfermedades venéreas. Reducción del riesgo de que el apareamiento provoque contaminaciones en las yeguas problemáticas. La inseminación artificial puede llevarse a cabo con semen fresco, refrigerado o congelado-descongelado. El primer método se usa cuando el semental y la yegua viven cerca, de modo que el tiempo desde la recogida del semen hasta la IA pueda ser de menos de una hora. El segundo resulta adecuado para la IA con un intervalo horas entre la recogida y la IA, y suele dar lugar a unos porcentajes de concepción similares a los obtenidos con semen fresco. El uso de semen refrigerado es, en la actualidad, una técnica bien establecida, y muchos 6

7 propietarios de sementales han puesto a disposición semen refrigerado como respuesta a la demanda de los criadores. Sigue habiendo limitaciones ya que no todos los sementales producen eyaculados aptos para su refrigeración y, además, la logística de la inseminación debe tener un muy buen manejo, debido a la viabilidad relativamente breve del semen refrigerado (24-48 horas). La calidad del semen, el estado reproductivo de la yegua y su manejo durante el periodo del estro son los tres factores con un mayor impacto sobre los porcentajes de gestación conseguidos con un programa de reproducción con semen congelado. Las yeguas que van a ser inseminadas con semen congelado deberían ser monitorizadas de antemano para comprobar que tengan una ciclicidad regular y normal. A todas las yeguas (a excepción de las primerizas, de menos de 6 años) se les deberían tomar muestras uterinas, por lo menos una vez, para realizar cultivos y una citología. Las yeguas primerizas con cualquier signo de tener una acumulación de líquido deben pasar por el mismo proceso. Al inseminar las yeguas con semen congelado, la ovulación debería inducirse con hcg, para optimizar el uso del semen minimizando el número de inseminaciones por estro. Debido al amplio rango con respecto al momento de la ovulación, cuando las yeguas son tratadas con hcg, deberían ser examinadas mediante palpación rectal y ultra- sonografía cada 6 8 horas después de la inyección, para que así puedan ser inseminadas cuando la ovulación es inminente o tan pronto como se detecte. Una de las razones más importantes para que el semen equino congelado no sea usado ampliamente es la variabilidad de la capacidad de los espermatozoides de los distintos sementales para tolerar la congelación y la descongelación. Se cree que sólo el 25% de los sementales provocarán unos porcentajes de gestación comparables a los obtenidos con la IA con semen fresco o monta natural, incluso con yeguas sanas inseminadas en el mejor momento posible. Al ser usado correctamente, el porcentaje promedio de gestación por ciclo con semen congelado es de alrededor del 30-40%, con 1,8-2 ciclos por gestación. No obstante, los porcentajes de gestación por ciclo suelen variar entre el 0 y el 100%. Sigue existiendo una cierta controversia sobre si las yeguas deberían aparearse justo antes o justo después de la ovulación. Se está haciendo evidente que el uso de más de una inseminación con semen congelado en el mismo ciclo da como resultado unos porcentajes de gestación ligeramente, aunque constantemente, mayores en comparación con una única inseminación. Aunque no hay un verdadero consenso sobre el momento recomendado para la inseminación con semen congelado, 19 de 21 laboratorios recomiendan que se realice entre 6 horas antes y 6 después de la ovulación. Un estudio retrospectivo de Barbacini et al. (1999) sugirió que no hay diferencias significativas en cuanto a los porcentajes de 7

8 gestación cuando las yeguas son apareadas 6 horas antes o 6 horas después de la ovulación. Durante muchos años, el procedimiento estándar al inseminar a las yeguas con semen congelado ha consistido en depositar el semen en el cuerpo uterino. No obstante, varios grupos han reportado recientemente diferencias en los porcentajes de gestación cuando las yeguas eran inseminadas con dosis reducidas de espermatozoides en la unión uterotubárica-ipsilateral al ovario que contenía el folículo preovulatorio. Parece que la inseminación profunda en el cuerno uterino o cerca de la unión uterotubárica maximiza el uso del esperma e incrementa el número de espermatozoides en el oviducto, lo que podría resultar en unos mayores porcentajes de gestación en las yeguas inseminadas con semen congelado. Se ha determinado el número de espermatozoides por dosis de IA para el semen fresco, refrigerado y congelado. Las yeguas son inseminadas, normalmente, con 500 millones de espermatozoides con motilidad progresiva (EMP) inmediatamente después de su recogida o con mil millones de EMP refrigerados y conserva- dos 24 horas a 5 C. La dosis normal para las yeguas inseminadas con semen congelado varía entre los 400 y los 800 millones de espermatozoides. Hay ocasiones en las que se dispone de una cantidad limitada de semen, y la inseminación con cantidades menores de espermatozoides puede resultar ventajosa. La deposición de dosis bajas de espermatozoides equinos puede llevarse a cabo con una mano a modo de guía insertada en el recto o usando un endoscopio. Actualmente se está usando la inseminación histeroscópica con pequeñas cantidades de espermatozoides frescos o congelados para obtener gestaciones de sementales de los que se dispone de poco semen. Dosis y tipos de semen equino Semen fresco Básicamente consiste en recolectar y evaluar el eyaculado, dividirlo en dosis que contengan como mínimo 500 millones de espermatozoides con motilidad progresiva e inseminar a las yeguas 30 a 90 minutos post-recolección. Este sistema es ideal para garañones que den servicio a 2 ó más yeguas por día, para trabajar con grupos de yeguas con sincronización de las ovulaciones. Con un eyaculado promedio, se pueden inseminar entre 5 y 10 yeguas y los índices de preñez son iguales o levemente superiores (10 %) a la monta natural. Semen refrigerado 8

9 Este sistema es muy dependiente de la calidad y respuesta seminal de cada padrillo a los cambios térmicos, pero ofrece más variantes de manejo. En términos generales, el semen puede refrigerarse a 4-5 C por 24 a 48 hs., pero hay reportes de aceptables índices de preñez aún después de 80 horas, utilizando diluyentes especiales, respetando una curva de descenso térmico y mantenimiento de la temperatura. La logística es importante en la implementación de este sistema dado que requiere de una buena sincronización entre el manejo de la/s yegua/s a inseminar y la recolección y envío del semen. Los resultados son muy variables entre padrillos, pero respetando los protocolos e inseminando con semen refrigerado durante 24 horas y como máximo 24 horas previas a la ovulación, los índices son muy semejantes a la monta natural. Es uno de los sistemas de mayor crecimiento en la actualidad, permitiendo inclusive el envío de semen entre diferentes continentes, especialmente de aquellos padrillos a los cuales, debido a características propias de sus espermatozoides, no es posible congelarles semen, al menos por los métodos convencionales desarrollados hasta el presente. Semen congelado El semen equino congelado ahora se utiliza más ampliamente. Al minimizar el daño de congelación-descongelación de los espermatozoides, más sementales pueden ser utilizados y las tasas de preñez podrían aumentar. Criopreservación requiere muchos pasos (recogida de semen, primera dilución, centrifugación, dilución en la congelación de extensor, refrigeración, congelación, descongelación), que afecta de forma interactiva éxito. En este papel, algunos pasos del procedimiento de procesamiento se evaluaron en un intento de mejorar calidad después de la descongelación del esperma. Muchas de las desventajas del uso de semen congelado, son en general producto de información incompleta sobre el tema y no inherentes a la técnica en sí, sino a su administración, reglamentaciones y dogmas. De todos modos, existe una considerable variación entre padrillos respecto a la capacidad de sus espermatozoides para sobrevivir intactos a temperaturas bajo cero. Las tasas de preñez reportadas varían entre 0 y 70 %, pero en la mayoría de los padrillos oscila entre 20 a 40 % de preñez por ciclo, resultados que a pesar de ser bajos son, en general, considerados como aceptables hasta el momento. Cuadro1. Opciones de tipo de semen para IA, su porcentaje de uso y la tasa de preñez por ciclo. 9

10 Tipo de Semen Porcentaje de uso (%) Tasa de Preñez/ciclo (%) Fresco a Refrigerado b Criopreservado c A) Colecta e inseminación en máximo 1 hora B) Colecta y refrigeración para inseminar en un promedio de 24 horas C) Criopreservado en nitrógeno y descongelado para inseminar 10