61/182 VALOR DIANA VALOR DIANA MÉTODO ALTERNATIVO A ALTA PROBABILIDAD ACEPTACIÓN LÍMITE DE ACEPTACIÓN LÍMITE DE MÉTODO ACEPTACIÓN
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- Manuela Redondo del Río
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1 VALOR DIANA VALOR DIANA MÉTODO ALTERNATIVO A ALTA PROBABILIDAD ACEPTACIÓN LÍMITE DE ACEPTACIÓN REGIÓN DE ACEPTACIÓN LÍMITE DE ACEPTACIÓN MÉTODO ALTERNATIVO B BAJA PROBABILIDAD ACEPTACIÓN REGIÓN DE ACEPTACIÓN 61/182
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3 Certificación de Métodos Alternativos 63/182
4 > Organismos de Certificación: En la actualidad, existen diversos organismos que CERTIFICAN la validez de métodos alternativos: AFNOR VALIDATION ( AOAC RI( MICROVAL ( NordVal: ( 64/182
5 > Ventajas y Limitaciones: VENTAJAS: Garantizar validez del método, ventajas y limitaciones. Calidad en la fabricación del kit Revisión y actualización de métodos Evaluación por organismo independiente (Rto. 2073) LIMITACIONES: Proceso Lento Coste importante Requiere de métodos optimizados y robustos 65/182
6 Certificaciónde métodos Métodos certificados por patógenos alternativos AFNOR MicroVAL AOAC Salmonella Listeria spp Listeria monocytogenes E. coli O157 Cronobacter Campylobacter 66/182
7 Certificaciónde métodos Métodos certificados por tecnologías alternativos AOAC AFNOR Inmunoenzimática Genética Cultivo Inmunoenzimática Genética Cultivo 67/182
8 Verificación interna 68/182
9 MÉTODO ALTERNATIVO > Árbol de decisión VALIDADO? SI CERTIFICADO? NO CERTIFICADO VALIDAR (ISO 16140) CUALITATIVO Nivel detección Relativa Exclusividad/Inclusividad Eficacia, sensibilidad y especificidad Desviación negativa y positiva SI NO Es completa la validación? SI NO VALIDACIÓN CUANTITATIVO Límite detección y cuantificación. -Linealidad y precisión. -Sensibilidad COMPROBAR EL FUNCIONAMIENTO CUALITATIVO Nivel detección Relativa Registros y evaluación del funcionamiento CUANTITATIVO Recuperación Precisión Matrices Analistas Equipos Reactivos Criterios Control de Calidad Interno TAREA DEL LABORATORIO DE ANÁLISIS 69/182
10 > Consideraciones Generales Consiste en comprobar que es capaz de cumplir con los requisitos de funcionamiento del método en las condiciones HABITUALES Y REALES de trabajo. Trabajar en condiciones de REPRODUCIBILIDAD INTRALABORATORIO: Diferentes días, matrices, lotes de reactivos, analistas, etc En el caso se debe utilizar el método alternativo TAL Y COMO HA SIDO DISEÑADO por el fabricante y detectar las LIMITACIONES en su aplicación en mi laboratorio (matrices, microorganismos ) 70/182
11 > Consideraciones Generales Formalmente, el método debe verificarse ANTES de emitir resultados. En algunos casos (métodos ampliamente reconocidos y validados) puede comprobarse a través de CONTROL DE CALIDAD INTERNO, siempre que su diseño sea similar al indicado anteriormente. También pueden emplearse resultados procedentes de EJERCICIOS INTERCOMPARATIVOS, aunque en este caso el tipo de matrices a analizar no suele ser representativo de muestras reales. 71/182
12 > Consideraciones Generales No se puede verificar una matriz que NO se encuentre en el alcance del método a verificar. Debe emplearse al menos una matriz para las que el método haya sido evaluado. 72/182
13 > Matrices a verificar Las HABITUALMENTE ANALIZADAS en el laboratorio (entre 30 y 50 muestras de diferentes productos). Si se desea comprobar para TODO TIPO DE ALIMENTOS, muestras diferentes de 3 a 5 categorías (total entre 30 y 50 muestras) tomando como referencia el Anexo B ISO Carnes y producto cárnicos Pescados y mariscos Aves de corral Productos lácteos Otros productos (especias, salsas, huevos, pastas, cereales, bebidas) Frutas y verduras Chocolate/productos panadería Alimentación animal 73/182
14 > Matrices a verificar Las matrices deben contener la flora habitualmente presente (no esterilizar) e idealmente contaminación natural del microorganismo diana. OPCIÓN 1: Muestras naturalmente contaminadas. OPCIÓN 2: Contaminación por mezcla. OPCIÓN 3: Muestras contaminadas artificialmente. OPCIÓN 4: Materiales de referencia. 74/182
15 Verificación de Método Cuantitativo (Recuento) 75/182
16 > Diseño experiencias: MUESTRA DE ALIMENTO CONTAMINACIÓN ARTIFICIAL (SI ES NECESARIO) CONDICIÓN A CONDICIÓN B Valor/Met. Referencia SOLUCIÓN MADRE SOLUCIÓN MADRE SOLUCIÓN MADRE ANALISIS ANALISIS ANALISIS Resultado A Resultado B Resultado R CONDICIONES DIFERENTES 76/182
17 > Diseño experiencias: 77/182
18 > Diseño experiencias: Si tenemos implantado el método de referencia, analizamos también la muestra por dicho método (una única vez) para obtener el valor de referencia. Si no disponemos se puede emplear como valor el del material de referencia (propio o ya preparado comercialmente) 78/182
19 > Parámetros a estimar: > RECUPERACIÓN. 1.- Calcular la diferencia (en valor logarítmico) el Resultado A con el Resultado R (valor de referencia) así como del Resultado B con el Resultado R en cada caso y obtener el sesgo a partir del valor medio de todas las diferencia (en log ufc/g) RESULTADO R RESULTADO A RESULTADO B R (Log ufc/g) A (log ufc/g) B(log ufc/g) Dif R-A Dif R-B 2,30E+05 3,50E+05 4,10E+05 5,36 5,54 5,61-0,18-0,25 3,20E+03 4,50E+03 3,50E+03 3,51 3,65 3,54-0,15-0,04 8,90E+04 7,50E+04 8,20E+04 4,95 4,88 4,91 0,07 0,04 2,50E+02 5,00E+02 3,40E+02 2,40 2,70 2,53-0,30-0,13 3,60E+04 2,50E+04 2,80E+04 4,56 4,40 4,45 0,16 0,11 Promedio diferencias (D) -0, /182
20 > Parámetros a estimar: > RECUPERACIÓN. 1.- Comparar con el sesgo (Bias) del certificado. En caso de grandes discrepancias puede realizarse un estudio estadístico de las mismas Promedio diferencias (D) -0, También puede estimarse a partir de este valor la recuperación del método: Recuperación = 10 (D) = = 0,86 = 86% 80/182
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