EFECTO DE LOS EXTRACTOS ETANOLICOS DE JENGIBRE (Zingiber oficinale ROSCOE) SOBRE EL CRECIMIENTO MICELIAL IN VITRO DE RHIZOCTONIA SOLANI AG1-1A.

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1 EFECTO DE LOS EXTRACTOS ETANOLICOS DE JENGIBRE (Zingiber oficinale ROSCOE) SOBRE EL CRECIMIENTO MICELIAL IN VITRO DE RHIZOCTONIA SOLANI AG1-1A. *Y. Him de Fréitez; **D. Rodríguez; **M. E. Sanabria y **J. L. Rodríguez. Universidad Centroccidental Lisandro Alvarado, Decanato de Agronomía.* Departamento de Fitotecnia.** Postgrados de Agronomía. yijanhin@ucla.edu.ve; rdorian@ucla.edu.ve; mesanabria@ucla.edu.ve. RESUMEN Rhizoctonia solani es un fitopatógeno importante en el cultivo de maíz en la zona centroccidental de Venezuela. En la búsqueda de alternativas para el control de la rizoctoniosis, con menor impacto al ambiente que los agroquímicos actualmente utilizados, se evaluó el efecto in vitro del extracto etanólico (EE) del Jengibre, sobre el desarrollo del hongo. Para los EE se utilizaron rizomas, molidos en una licuadora Oster MR, y macedos en etanol 96% durante dos días. El crudo se obtuvo con un Rotaevaporador Brikmann y se se diluyó en medio papa-dextrosa-agar en las concentraciones 0; 5; 10; 15; 20 y 25 % y se vertió en platos de Petri, utilizando cuatro repeticiones (platos) por concentración. En el centro de cada plato se colocó un disco de agar con micelio de R. solani, se incubaron a o C, hasta que en el de 0% la colonia alcanzó la orilla del plato. Se midió el diámetro y se calculó el porcentaje de inhibición del crecimiento del hongo causado por el EE. Los resultaron mostraron diferencias significativas entre los tratamientos (P<0.001) hasta el noveno día de evaluación, siendo la concentración 25% la más efectiva. A partir de los doce días todos los tratamientos se comportaron similares al testigo. Los resultados indican la posibilidad de utilizar el EE de jenjibre con aplicaciones semanales. Palabras clave: Metabolitos secundarios, Control, Rizoctoniosis. INTRODUCCION El jengibre (Z. officinale Roscoe) es una hierba originaria de la India o Malasia, de hasta 1 m de altura, con rizomas subterráneos gruesos, que representan la parte comercial de la planta (Leal, 1997). Se usa como especia, en la preparación de bebidas, perfumería, por su aroma delicado y sabor ardiente y en farmacia por sus propiedades medicinales (Thomson, 1981; Pérez et al., 1996). Es conocido por su efecto antiinflamatorio y analgésico y aunado a esto actúa como antimicótico en animales y humanos (Batista et al., 2003). En Venezuela, el genotipo criollo de jengibre es el más conocido y consumido; aunque no es cultivado comercialmente motivado a que sus rizomas son más pequeños y presentan mayor cantidad de fibras, si se le compara con el Japonés (Him, 1996). Casanova et al. (2004) caracterizaron desde el punto de vista fitoquímico ambos genotipos de jengibre y detectaron diferencias en relación a los metabolitos secundarios (MS) presentes en los mismos. En común, se encontraron los aceites esenciales y alcaloides, excepto los débilmente básicos que no estaban presentes en el criollo. En este último, fueron positivas las antraquinonas y los flavonoides. Los MS detectados representan una alternativa a estudiar en el control de patógenos y en la industria farmacéutica. Los aceites esenciales y específicamente la fracción fenólica, han sido asociados con efectos fungistáticos o fungicidas ( Dubey y

2 Kishore 1992; Muller-Riebau et al., 1995; Zapata et al.,2003; Rodríguez y Sanabria, 2005). La actividad antimicrobiana de los extractos de plantas está asociada a la presencia de MS. Entre ellos, los aceites esenciales de las aromáticas han resultado ser tóxicos contra Fusarium moniliforme; Rhizoctonia solani; Sclerotinia sclerotiorum y Phytophtora capsici (Muller-Riebau et al., 1995). Así mismo, Dubey y Kishore (1992) determinaron que los MS obtenidos a partir de Oncinum canum; Chenopodium ambrosioides y Lippia alba combinados, fueron tóxicos contra un amplio rango de hospedantes, entre los que se encontraban R. solani; Alternaria solani; A. alternata; Fusarium moniliforme y F. oxysporum f sp. vasinfectum. Zapata et al. (2003) utilizaron los extractos etanólicos (EE), desgrasados o no (EESD) y acuosos de cardón lefaria (Cereus deficiens Otto & Diert) para determinar el efecto de los mismos en el control de hongos fitopatógenos, incluyendo a R. solani. Los EESD a concentraciones de 25; 50 y 75% inhibieron el crecimiento micelial de este patógeno desde un 30 hasta un 76%. Estos autores infirieron que estas respuestas podrían deberse a los aceites esenciales detectados en el extracto. Rhizoctonia solani es un hongo fitopatógeno del suelo, importante en el cultivo de maíz en la zona centroccidental de Venezuela (Cardona et al.,1999), cuyo método de control más generalizado en la agricultura es el químico. Los fungicidas se han convertido en una de las principales herramientas de producción de los agricultores, lo que se refleja en los grandes volúmenes de agroquímicos comercializados a nivel mundial (Smith, 2001). El uso de los mismos ha producido como efecto secundario, problemas de desequilibrio ambiental, de salud humana y surgimiento de poblaciones más agresivas y resistentes a ellos (FAO, 2003); existiendo referencia de una alta incidencia de enfermedades y cuadros clínicos por intoxicación (Ramírez, 2001; Tagliaferro, 2002). En la búsqueda de alternativas para el control de la rizoctoniosis, con menor impacto al ambiente que los agroquímicos actualmente utilizados, se evaluó el efecto in vitro del extracto etanólico (EE) del Jengibre, sobre el desarrollo del hongo. MATERIALES Y METODOS Para la preparación del extracto etanólico (EE) se utilizaron rizomas recién cosechados de jengibre genotipo japonés, cultivados en las áreas adyacentes al Vivero del Departamento de Fitotecnia del Decanato de Agronomía de la Universidad Centroccidental Lisandro Alvarado, en Cabudare, estado Lara, Venezuela. Los mismos se molieron en una licuadora Oster MR y fueron macerados en etanol 96% por dos semanas. Se evaporó el alcohol con la ayuda de un Rotaevaporador Brinkmann y el extracto crudo se guardó en refrigeración para su uso posterior. Para la evaluación se diluyó el extracto en papa dextrosa agar (PDA) en las concentraciones de 0; 5; 10; 15; 20 y 25 % (v/v) inmediatamente después de la esterilización del medio en autoclave; se vertió en platos Petri, fue sembrado un disco de 5mm con el micelio del hongo; se incubó a temperatura ambiente (25 a 27 o C) y luz alterna (12hr), hasta que en el 0% la colonia alcanzara la orilla del plato. A partir de este momento se midió el diámetro de la colonia y se calculó el porcentaje de inhibición del crecimiento del hongo causado por las concentraciones evaluadas en relación al crecimiento testigo (0%). Se utilizó un diseño completamente aleatorizado con seis tratamientos y cuatro repeticiones. El ensayo fue repetido.

3 RESULTADOS Y DISCUSION El efecto del EE de jengjbre sobre el crecimiento micelial in vitro de R. solani AG1-1A se presenta en el Cuadro 1. Los resultaron mostraron diferencias significativas entre los tratamientos (P<0.001) hasta el noveno día de evaluación, siendo la concentración 25% la más efectiva. A partir de los doce días todos los tratamientos se comportaron similares al testigo. Días Concentración (%) 0 8.3a 8.3a 8.3a 8.3a 8.3a 5 2.4ab 8.1a 8.1a 8.3a 8.3a c 5.4b 7.2b 8.3a 8.3a e 4.5c 5.9c 7.8b 8.3a d 3.9d 5.3d 7.2c 8.3a e 3.7d 4.7e 6.9c 8.3a Cuadro 1. Determinación del efecto del extracto etanólico de jenjibre (Zingiber oficinale Roscoe) sobre el crecimiento micelial in vitro de Rhizoctonia solani AG1-1A. A los dos días después de iniciado el ensayo (ddie) se observó que las diferentes concentraciones inhibieron significativamente el crecimiento micelial del hongo. A través de la prueba de media de Tuckey se reconocieron cinco grupos diferentes, excepto el de 15 y 25 %, que se comportaron estadísticamente iguales y tuvieron mayor efecto que el de 20%. Después de los 5 ddie el efecto del extracto en general disminuyó, lo que se hizo más evidente en los valores obtenidos en la determinación del diámetro de la colonia el día 9 y en los cuales las concentraciones 5 y 10% igualaron al testigo. Estos resultados permiten inferir que para el control de R. solani con el EE de jengibre deben hacerse aplicaciones semanales iguales o mayores al 10%. Los aceites esenciales al igual que otros MS como los alcaloides, juegan un papel importante en la defensa de las plantas contra patógenos, insectos y herbívoros (Swain, 1977). Casanova et al. (2004) detectaron en el genotipo japonés de jengibre aceites esenciales, alcaloides débilmente básicos, básicos y sales cuaternarias de amonio; metabolitos secundarios que se han relacionado con actividad biológica para el control de hongos fitopatógenos (Dubey y Kishore 1992; Muller-Riebau et al., 1995; Zapata et al.,2003; Rodríguez y Sanabria, 2005). En este sentido, si se consideran los resultados de esta investigación y se comparan con los obtenidos por Dubey y Kishore (1992), quienes lograron una mayor inhibición de R. solani al combinar los aceites esenciales de tres plantas, es posible inferir que la combinación de los EE de los genotipos criollo y japonés de jengibre, podrían resultar en un mayor efecto inhibitorio contra este patógeno. Crescente (Comunicación personal) determinó que especies pertenecientes a la familia Bignonaceae presentan propiedades antifúngicas e inhiben el crecimiento micelial de R. solani por su contenido de monoterpenos, alcaloides (actinidina) y flavonoides. Así mismo, los EE de jengibre presentan alcaloides (Casanova et al.,

4 2004) y en esta investigación se observó un efecto inhibitorio de los mismos sobre este patógeno; el cual se podría atribuir a estos MS. A juicio de Albornoz (1980) y Swain (1997) los fenoles normalmente están asociados con el efecto fungicida, no obstante en el caso de los EE de Jengibre parecen estar asociados a los alcaloides y a los aceites esenciales. CONCLUSIONES. Los extractos etanólicos de Jengibre (Zingiber oficinale Roscoe) fueron efectivos a concentraciones del 10%. La efectividad de los EE a las concentraciones evaluadas, se perdió a los nueve días de iniciado el ensayo. RECOMENDACIONES. Hacer las aplicaciones cada 7 días a concentraciones iguales o mayores al 10%. Realizar ensayos a fin de evaluar el efecto del genotipo criollo, solo o combinado con el japonés. BIBLIOGRAFIA Batista, A.; J. Pino, J.; L. Rodríguez; G. Padrón y G. Palomar Caracterización de los compuestos pungentes en la tintura de jengibre al 50 %. Rev. Cubana Plant. Med. 8(3):2-7. Cardona, R.; H. Rodríguez y H. Nass Manchas bandeadas en maíz causadas por Rizoctonia solani en el estado Portuguesa. Fitopatol. Venez. 12: Casanova, R.; J. Castillo; Y. Him; M. E. Sanabria y D. Rodríguez Metabolitos secundarios en dos variedades de Jengibre. I Seminario Presente y futuro de la investigación y aprovechamiento de las plantas medicinales en Venezuela. IDEA. Fundación Instituto de Estudios Avanzados. Caracas, 8 al 10 de Diciembre. Dubey, N y N. Kishore Fungitoxicity of some higher plants and synergistic activity of their essential oils. Tropic. Sci.27: FAO Código intenacional de conducta para la distribución y utilización de plaguicidas. Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación. Roma, Italia. 36pp. Him de F. Y Micropropagación de jengibre (Zingiber officinale Roscoe) por organogénesis y embriogénesis. Trabajo presentado como requisito parcial para optar al título de Magíster Sciebtiarum, Universidad Central de Venezuela (UCV). 120 p. Leal, F Especias: cultivos promisorios para Venezuela. Rev. Fac. Agron. 23: Muller-Riebau, F.; Berger, B. y O. Yegen Chemical composition and fungitoxic properties to Phitopatogenic fungi of essential oils of selected aromatic plants growing wild in Turkey. J. Agric. Food Chem. 43: Pérez de Alejo J.; R. Miranda y G. Rodríguez Acción estimulante del extracto fluido del Zingiber officinale Roscoe. (Jengibre). Rev. Cubana Plant Med. 1(1):42-5.

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