Transcripción y Procesamiento del RNA

Transcripción

1 Transcripción y Procesamiento del RNA

2 Transcripción Síntesis de RNA a partir de DNA DNA Transcripción Otros snrna, snorna, sirna, mirna RNA de transferencia trna RNA ribosomal rrna RNA mensajero mrna

3 Tipos de RNA

4 Estructura química del RNA

5 RNA puede formar estructuras secundarias

6 Transcripción Solamente los segmentos de DNA que corresponden a genes son copiados a RNA Una de las dos cadenas de DNA es copiada a RNA Cadena codificante Cadena molde La secuencia de RNA es complementaria a la cadena molde e idéntica a la cadena codificante

7 RNA polimerasa procariote RNAP holoenzima α 2 ββ σ 460 kda La RNA pol cubre aprox. 60 nt 40 upstream y 20 downstream Gen Producto Función rpoa rpob 2 subunidades α (37kDa) Subunidad β(151kda) ensamblaje de las unidades Centro catalítico rpoc β (157kDa) Centro catalítico Dirección rpod σ (32-90kDa) Reconocimiento del promotor (especificidad)

8 Promotores bacterianos Promotor Secuencia -10 o caja Pribnow TATAAT Secuencia -35 TTGACAT

9 Secuencias conservadas en promotores de procariontes Promotor fuerte Promotor débil

10 Factores sigma σ Fac. σ Gen Masa (kda) Uso σ 70 rpod 70 general σ 32 rpoh 32 choque térmico σ 24 rpoe 24 choque térmico σ 54 rpon 54 nitrógeno σ 28 flia 28 flagelar

11 Reconocimiento y formación del complejo cerrado

12 Burbuja de 17pb

13

14 Elongación

15 Etapas de la transcripción Iniciación Elongación Terminación

16 Termino de la transcripción Terminadores intrínsecos

17 Termino de la transcripción Dependiente de Rho

18 Fidelidad de la transcripción Las RNA polimerasas no tienen actividad de edición por tanto son menos fieles

19

20 Transcripción en eucariotes Pierre Chambon y Robert Roeder Eucariotes tienen 3 tipos de RNA polimerasas nucleares, más las organelares. Tipos Localización Transcritos Copias/ cél I Nucleolo rrna 18S, 5.8S y 28S 40,000 II Nucleoplasma mrna 40,000 III nucleoplasma trna y rrna 5S 20,000 Todas las RNA polimerasas eucariotas son proteínas grandes en forma de agregados de 500 kda ó más. Generalmente tienen de 8 a 14 subunidades, siendo algunas de ellas comunes a las tres.

21 Promotores eucariotes (RNA polimerasa II) (URE) Caja TATA o caja Hogness -25 / -35 Elementos regulatorios río arriba URE Enhancers (incrementadores o reguladores)

22 Factores Transcripcionales Todas las RNA polimerasas requieren factores transcripcionales basales (TF)

23 Formación del complejo de iniciación RNApol II TBP

24 Factores transcripcionales basales de RNA pol II 30 proteínas!!

25

26 Polimerasa Promotor Factores transcripcionales basales RNA pol I No tiene caja TATA UBF, SL1 (contiene TBP) RNA pol III TBP TF III A, TF III B y TF IIIC rrna 5S TF III B y TF IIIC trna

27 También existen factores transcripcionales moduladores o enhancers y mediadores

28 PROCESAMIENTO POST-TRANSCRIPCIONAL DEL RNA

29 RNA ribosomal rrna Más abundante en la célula Principal componente de los ribosomas Procariotes 16S, 23S, 5S Eucariotes 18S, 28S, 5.8S, 5S Transcripción por RNA pol I RNA transferencia trna Más pequeño 75nt Transporta aminoácidos hasta el ribosoma Extremo 3 tiene el triplete característico CCA independientemente del aminoácido que transporte Transcripción por RNA pol III

30 Procesamiento RNA ribosomal procariote Región espaciadora Corte específico RNasaIII, RNasaP y RNasa E Otras nucleasas

31 Nucleolo Procesamiento RNA ribosomal eucariote Región espaciadora Los cortes son catalizados por RNAs pequeños del nucleolo (snornas) y proteínas del spliceosoma

32 Eucariotes y procariotes Procesamiento RNA transferencia y ribosomal

33 Procesamiento RNA transferencia Procesamiento del extremo 5 RNasa P Se encuentra en todos los organismos Ribonucleoproteína RNA (ribozima) 377 nt (actividad catalítica) + Proteína 20 kda Nucleasas RNasa D Procesamiento extremo 3 Nucleasas eliminan un grupo de bases RNasa D elimina nucleótidos restantes en 3

34 Procesamiento RNA transferencia eucariote Cortes endonucleolíticos seguidos de reacción de ligación

35 Procesamiento RNA transferencia trna nucleotidiltransferasa Transfiere la secuencia CCA característica de TODOS los trna maduros Metilación o desaminación de bases Bases pseudouracilo, ribotimidina y dihidrouracilo

36 Bases modificadas presentes en los trna

37 EN PROCARIOTES, LA TRANSCRIPCION Y LA TRADUCCION SON PROCESOS SIMULTANEOS NO HAY MODIFICACION DEL RNA MENSAJERO RIBOSOMA RNAm RNA POL DNA

38 Procesamiento mrna eucariote CAPPING RNAm

39 Procesamiento mrna eucariote Poliadenilación 3 Poli A-polimerasa

40 Procesamiento mrna eucariote Splicing Remoción de intrones

41 Spliceosoma: RNAs U1-U proteínas = snrnps Procesamiento mrna eucariote Splicing Remoción de intrones

42 Corte por reconocimiento de bases (apareo) A

43 Splicing alternativo

44 Resumen procesamiento mrna eucariote