Contenido. Las bases moleculares de la resistencia a pesticidas en la garrapata ...

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2 Contenido Pagina Historia de la parasitologia veterinaria en Mexico con enfasis en las campanas contra garrapatas y gusano barrenador del ganado. Hector Quiroz Romero *-+a#.~, I Importancia de la garrapata Boophilus en la exportacton de 30 Juan Ramon Gonzalez Saenz Pardo... Las bases moleculares de la resistencia a pesticidas en la garrapata - Boophilus microplus Rodrigo Rosario-Cruz... +m lnfluencia de la resistencia a acaricidas de la aarra~ata Rhipicephalus ( Boophilus) microplus en Mbxico, sgbre ' las importaciones de ganado por parte de 10s Estados Unidos Robert J. Miller... Resistencia a ivermectina de poblaciones de Rhipicephalus microplus en Brasil Guilherme M. Klafke..... Avances en el conocimiento de la resistencia de Bo a 10s ixodicidas en el sureste de Mexico Roger Ivan Rodriguez-Mvas Desarrollo de vacunas contra garrapatas - Jose de la Fuente.... H Establecimiento de metodologias para el descubrimiento d ant igenos protectores contra Rhipicephalus (Boophilus) microplus 1 Consuelo Almazan.....! Vacunas contra la babesiosis bovina: Actualidad y perspectiva - Julio V. Figueroa Millan ? - " -a -,*.? - '.: -. molecular de cepas de Babe bigemina y su aplicaci6n para el desarrollo de estrategias mejoradas de control 96 Juan Mosqueda... La anaplasmosis bovina en Mexico.:m

3 RAvances en el sonocimiento de la resistencia de Boo~~~lus.~ic~plus a 10s w P' Aodicidas en el sureste de Mexico ' - 'Ii 8,. "r.,- M'uez-viva. R.1 Trees A.J. *, Hodgkinson J.E *, ~osado-~@uilar $A: goultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad AuMnoma de Yucaan. ~ts'ri'da,'yp&gn, M6xi n. 153 carretera MMbrida, Yucatan, M6xico. Tel. (9999) Coreo electrc5nico: %B@uady. micos en la ganaderia bovina a nivel mundial. Los ixodicidas juegan un imp~rtant'e~ en el control de las garrapatas; sin embargo, su uso irrational ha ocasionado la n de cepas de Boophilus microplus resistentes a las principales clases dg. En este articulo se presenta 10s avances de 10s estudios sobre la resistencia d$ lus a 10s ixodicidas en el sureste de Mexico. En la actualidad el amitraz (Am) e;s a mas utilizado en 10s ranchos bovinos (40-75%) seguido de lo 4 pfosforados (OF) (9-30%) y piretroides sinteticos (PS) (7-22%). La resistencia de 'hplus a 10s PS es la mas seria ya que 66-95% de 10s ranchos presentan distintok, ' h dos de resistencia. La resistencia al Am va en aumento, per0 en la actualidad ea unto con 10s OF pueden seguir usandose en 10s ranchos en programas de control. B intensivo del Am y PS a nivel de campo pueden generar cepas de B. microplug Rtentes; sin embargo, la generacion de resistencia a 10s PS es magbr. Se demos I+ eel uso de otro ixodicida para el contro'k de garrapatas resisten- a IQS P8 y OF crmite la reversi6n a la susceptibilidad. Asimismo, se ha detemlnade que la resistencia a s PS es producida principalmente por una mutacion en el canal de sodio de B. microplus las esterasas no se asocian con la resistencia. La tecnica de PCR-mutaci6n en el canal odb es una herramienta para identificar individuos resistentes a 40s PS en cepas que rtd tick-borne diseases are rt%ponsible for severe economic losses in cattle livestock ide. Acaricides have played an important role in the control of ticks; however, as a equence of its extensive use, B, microplus has developed resistance to major classes ricides. The present paper describes the current advance on B. microplus resistan! icides in the Southern of Mexico. Currently, the majorrty of cattle farmers (40-75%) m'itraz (Am) to control ticks, followd by organophosphates (OP) (9-30%) and ic pyrethroids (SP) (7-22%). Between 66 and 95% of the farms have different level croplus resistant to SP. The resistance to Am is increasing, but actually both Am can be used in tick control programs. The intensive use of Am and SP to control n gnerate B. micmplus resistance strains; however, the generation of SP; ce is the'most serious. The use of another acaricide to control tick resistance to SR. I

4 Simposium Internacional: Garrapatas, Babesiosis y Anaplasrnosis Cd. Victoria, Tamaulipas. M6xico 15,16 y 17 de octubre de 2007 and OP does not allow reversion to susceptibility. Also, it was determined that resistant to SP is mainly produced by a mutation in the sodium channel of B. microplus and the esterase are not associated with resistance. The PCR-mutation in the sodium channel is a tool to identify resistani&.i.ndividuals to SP in strains that still are toxicologically susceptible.\ to the acaricide. Keywords: Boophilus microplus, resistence, pirethroids, amitraz, organophosphates, resistence mechanism. Las garrapatas y enfermedades que transmiten limitan la explotaci6n de bovinos a nivel mundial. Dentro de las garrapatas mhs problemhticas encontramos al genero Boophilus, y de las cinco especies que integran a este genero a nivel mundial, dos de ellas, 8. microplus y B. annulatus se encuentran en Mexico. El impact0 economico negativo de B. microplus a la ganaderia bovina se debe a efectos directos e indirectos (Rodriguez-Vivas y Dorninguez, 1998). Su efecto directo sobre la producci66 es resultado del dafio \a las pieles por acci6n de las picaduras, perdida de sangre y efectos toxicos. Ademhs existe un efecto directo sobre la ganancia de peso de 10s animales y en la producci6n de leche (Rodriguez-Vivas et al., 2004). Las garrapatas tambien producen bajas en la fertilidad del ganado, mayor tiempo de la engorda y dificultad en la irnportacion de razas mejoradas para incrementar la calidad genetica en hreas infestadas por garrapatas. El efedo indirect0 esta dado por 10s agentes que transmiten como Babesia bovis, Babesia bigemina y Anaplasma marginale (Rod rig uez-vivas y Doming uez, 1 998; Rodriguez-Vivas et al., 2004). La estrategia mas utilizada para el control de garrapatas consiste en la aplicaci6n de ixodicidas, sobre el cuerpo de 10s animates infestados a intervalos especificos deterrninados por la regi6n ecol6gica, especies a las que se va a combatir y por la eficacia residual del ixodicida. Los principales produdos que se han utilizado para el control de las garrapatas incluyen a 10s organoclorados, organofosforados (OF), piretroides sinteticos (PS), amitraz (Am) y lactonas macrociclicas. Los ixodicidas han sido utilizados con exit0 en el control de las garrapatas; sin embargo, su uso irrational ha ocasionado la generation de cepas de garrapatas resistentes a la accion de estos pesticidas (Rodriguez- Vivas et al., 2006a, b). El objetivo del presente articulo es presentar 10s avances de 10s estudios sobre la resistencia de 6. microplus a tos ixodicidas en el sureste de Mexico. Uso de lxidicidas para el control de garrapatas en ranchos bovinos En un estudio realizado recientemente se determino que el 100% de 10s ranchos bovinos en el sureste de Mkxico utilizan ixodicidas para el control de garrapatas (Rodriguez-Mvas et al., 2006a). El Am es la sustancia quimica mas utilizada (40-75% de 10s ranchos) seguida por la familia de 10s OF (9-30%) y PS (7-22%). En menor proporcion se, utilizan las f&nilpirazolonas y mezclas de organofosforados con PS. Asimismo, se reporta el uso de oias alternativas para el control de garrapatas, tales como el uso de quemas de potreros, endectocidas y vacuna. Estas medidas son de gran utilidad para

5 Simposium Internacional: Garrapatas, Babesiosis y Anaplasmosis Cd. Victoria, Tamaulipas. Mexico 15,16 y 17 de octubre de 2007 contribuir a retrasar el proceso de selection genetica de la resistencia de las garrapatas a 10s productos quimicos y prologar la vida rjtil de 10s ixodicidas existentes. Distribucion de la resistencia de Boophilus microplus a 10s ixidicidas' La resistencia de 5. microplus a 10s ixodicidas se encuentra distribuida en el sureste de Mexico (Cuadro I), principalmente la resistencia a 10s PS que presentan prevalencias del 59 al 95%, situacion similar a lo ocurrido en Australia despuks del uso intensivo de PS para el control de garrapatas (Nolan et al., 1989). Existe una marcada reaccion cruzada entre las sustancias quimicas de la familia de 10s PS. Esto probablemente se deba al similar mecanismo de resistencia de 6. microplus entre 10s PS. A pesar de que 10s OF son 10s productos que mas se han utilizado para el control de garrapatas en el sureste de Mexico, el problema de la resistencia es todavia manejable, principalmente con el uso del coumafos y clorfenvinfos donde las prevalencias de ranchos con B. microplus resistentes son inferiores al 50%. El diazinon es el OF que presenta mayor prevalencia de resistencia, esto se debe a que cuando el desarrollo de la misma esta iniaando hacia 10s OF, c d m el dazin6nes el primerpdncipio activo en presentar resistencia, aunque este no haya sido utilizado como ixodicida previamente. Se Cree que este c ~portamie~oe~a relacionado con la baja efectividad del diazinon para controlar garrapatas. Por esta caracteristica, la FA0 lo considera como uno de 10s principios adios utilizados en las pruebas de diagnostic0 de resistencia hacia 10s OF, ya que cuando la resistencia se presenta solamente a este principio activo, sirve como indicador para rotar el grupo quimico con la intencion de que la resistencia no se siga desarrollando en el resto de 10s principios adivos del grupo. Este tipo de resistencia ha sido observada en varios paises, donde 10s primeros reportes de resistencia a 10s OF fueron debidos al diazinbn (Rodriguez-Vivas et al., 2005). En Mexico el primer reporte de resistencia de 5. microplus al Am se realizo en el at (Soberanes et al., 2002). Rodriguez-Vivas et al. (200bb) encontraron que la prevalencia de resistencia al Am en ranchos del estado de Yucatan es baja (Cuadro I), situacion que coincide en Australia, donde la prevalencia a este producto es baja a pesar de su uso frecuente (Kemp et al., 2003). Sin embargo, en ranchos de 10s estados de Quintana Roo, Tabasco y Chiapas el problema de resistencia al Ammayor, probablemente asociado al mayor uso de este producto para controlar garrapatas. Rodriguez-Vivas et al. (2007) reportaron que el 88% de 10s ranchos con B. microplus resistentes a PS en el sureste de Mexico son tambien resistentes a OF, sugiriendo una asociacidn en la resistencia a ambas familias de ixodicidas. Esta asociacion probablemente se debe a que en Mexico 10s OF y PS fueron usados de manera intensiva ~ I ~ ~ ~ s A 9gam 8 & el 1control 9 ~ de garrapatas, ---- mientras que el uso generalizado del Am fue posterior (ti et al., 2005). El uso de ixodicidas con una frecuencia mayor a 6 veceslafio se ha asociado con mayor resistencia a 10s ixodicidas en el sureste de Mexico (Rodtjguez-Vivas et al., 2006a, 2007). Estos resultados son similares a 10s reportados en otros estudios. En Australia se encontro que el uso de ixodicidas con una frecuencia mayor a 5 veceslat70 fue un factor.

6 Simposium International: Garrapatas, Babesiosis y Anaplasmosis Cd. Victoria, Tamaulipas. Mexico 15,16 y 17 de octubre de 2007 de riesgo en el desarrollo de cepas de garrapatas resistentes a flumetrina, deltametrina y cipermetrina (~onsson, 2000), concluyendo que la alta frecuencia de tratamientos predispone a la selection de resistencia. Al respecto, Kunz y Kemp (1994), mencionan que la presion de sel,ecci6n impuesta por medio de insecticidas conduce a un mayor control o a un desarrollo.m& r&pido de resistencia. El cruzamiento de 10s individuos sobrevivientes a estas aplicaciones iniciales se traduce en sobrepoblaciones de individuos capaces de resistir el product0 quimico y posteriormente transmitir esta caracteristica a su progenie. Nivel de resistencia de Boophilus micropus a 10s ixodicidas La resistencia de B. microplus al Am en ranchos bovinos del sureste de Mexico va en aumento; sin embargo, el nivel de resistencia al Am es todavia baja. Rodriguez-Was et al. (2006b) estudiaron 98 cepas de B. microplus en el estado de Yucatan y determinaron que solo el 2.04% de 10s ranchos presentan >30% de sobrevivencia larval cuando las garrapatas son expuestas a una dosis discriminante de Am (0.0002%), lo que indica que una baja proportion de ranchos con gampatas resistentes presentan altos niveles de resistencia (Cuadro 2), lo que favorece el uso de este ixodicida para el control de garrapatas en el sureste de Mkico. El nivel de resistencia de B. microplus a 10s OF presenta similar comportamiento ya que el 9.18% y 4.08% de 10s ranchos presentan >30% de sobrevivencia larval cuando las garrapatas son expuestas a una dosis discriminante de coumafos (0.2%) y clorfenvinfos (0.2%) respectivamente (Cuadro 3). Ademas el 54.08% y 64.28% de 10s ranchos presentan garrapatas susceptibles a estos dos OF. Esta situaci6n favorece el uso eficiente de estos ixodicidas para el control de garrapatas en al menos el 50% de 10s ranchos bovinos del estado de YucatAn. La resistencia de B. microplus a 10s PS en ranchos bovinos del sureste de Mexico es el mas serio (Cuadro I). El 28.57%, 29.60% y 25.5% de 10s ranchos en el estado de YucaGn presentan garrapatas B. microplus altamente resistentes cuando son expuestas a dosis discriminantes de flumetrina (0.01%), deltametrina (0.09%) y cipermetrina (0.05%) respectivamente (Cuadro 4). Esta situaci6n pone de manifiesto que 10s PS solo deben de utilizarse en ranchos con garrapatas susceptibles por cortos periodos para prolongar su vida Qtil. Nuestro grupo de trabajo estudiaron 43 ranchos de tres municipios del estado de YucatAn y determinaron el Cndice de resistencia (IR) de B. microplus a la cipermetrina. Encontraron una variacion marcada en 10s indices de resistencia en 10s ranchos estudiados con un,rango general de 0.62 a El 33%, 45% y 32% de 10s ranchos estudiados presentaron garrapatas clasificadas como resistentes (IR= >5), tolerantes (IR= 3-5) y susceptibles (IR=' <3) respedivamente. Fjlecanismos de resistencia a 10s Piretroides., En un estudip.(ealizado por RosarioGruz et al. (2005) se evaluo el mecanismo de resistencia de nueve aspas 6. micmplus resistentes a 10s PS. Se demostr6 que en cepas resistentes a 10s PS se presentan altas frecuencias de larvas con genotipos RS

7 Simposium International: Garrapatas, Babesiosis y Anaplasmosis Cd. Victoria, Tamaulipas. Mdxico '1 5, 16 y 17 de octubre de 2007 (resistente-susceptible) o RR (resistente-resistente), contrario a lo ocurrido con &pas susceptibles a 10s PS donde las frecuencias son nulas o bajas. El mecanismo de resistencia de B. microplus a 10s PS, es producido principalmente por la sustitucion de Phe+ Ile en el fragmento transrnembranal del dominio Ill del canal?!le sodio (He et al., 1999; Guerrero et al., 2001), produciendo una modification de la estructura del canal con alteracibn en la proyecci6n estereoquimica del sitio de uni6n del canal con las moleculas de 10s PS, lo cual le confiere a la garrapata la caracteristica de resistencia por 'el mecanismo denominado como modificaci6n del sitio blanco. La amplificaci6n de este fragmento permitieron a Rosario-Cruz et al. (2005) identificar el mecanismo de resistencia y 10s diferentes genotipos de garrapatas en cepas de campo, per0 lo mas importante es la capacidad de detectar bajas frecuencias de alelos mutados, que permiten identificar este tip0 de resistencia en poblaciones de garrapatas que toxicol6gicamente son todavia susceptibles, lo cual nos permitira en el futuro, anticipar al problema y generar mejores decisiones administrativas que permitan tener un mejor control y usar racionalmente las moleculas de pesticidas pertenecientes a esta familia de compuestos. En otro estudio realizado por Rodriguez-Vivas et al. (2006~) se estudid la frecuencia de genotipos en larvas de B. micmplus que sobreviven y mueren a dosis discriminante de cipermetrina (0.05%) en seis cepas de campo. Las larvas sobrevivientes y muertas fueron genotipificadas mediante la tkcnica de PCR- Alelo especifico. Las cepas susceptibles tuvieron mortalidad de 100% a la dosis discriminante de cipermetrina y todas las larvas poseian dos copias del alelo susceptible (genotipo SS). En ambas cepas el 96% de las larvas que,murieron poseian al menos una copia del alelo S (SS: 49.3%, RS: 46.7%). El 100% de las larvas que sobrevivieron a la cipermetrina poseian al menos una copia del alelo R (RS: 41.7%, RR: 58.3%). Asimismo se demostr6 diferencia estadistica entre la sobrevivencia larvaria y la presencia del alelo R (larvas muertas: 27.3% vs. larvas vivas 78.3%). En este estudio se concluyo que en las larvas que sobrevivieron a la cipermetrina al 0.05%, esta presente la mutaci6n que conduce a la sustituci6n del aminoacido Phe+ Ile que les confiere resistencia a 10s PS. Ademas se encontr6 que la presencia del genotipo SR no siempre se expresa fenotipicamente con la sobrevivencia de las larvas; sin embargo, la presencia del genotipo RR generalmente se expresa fenotipicamente con la sobrevivencia de las larvas. La mutaci6n en el gen del canal de sodio que conlleva a la sustituci6n del aminoacido fenilalanina por isoleucina (He et al., 1999) es el principal mecanismo que confiere resistencia a 10s PS en cepas del sureste de Mkxico. Existen otros mecanisrnos de resistencia de B. mick~plus a 10s PS, tales como la actividad de la esterasas (Rosario- Cruz et al., 1997; Guerrero y Pruett, 2003); sin embako, en estudios previos se ha determinado que las esterasas no juegan un papel importante en la resistencia de B. microplus a 10s PS en cepas aisladas en el estado de Yucatan, M6xico (Rosario-Cruz et al., 2005). Actualmente nuestro equipo de trabajo ha clonado 'y secuenciado el gen del canal de sodio de 32 cepas de B. micmplus de ranchos del estado de Yucatan con la intension de identiicar posibles mutaciones que puedart. estar contribuyendo a la \-\'a generaci6n de resistencia a 10s PS. 't Generacion de: Resistencia

8 Simposium International: Garrapatas, Babesiosis y Anaplasmosis Cd. Victoria, Tamaulipas. Mdxico 15,16 y 17 de octubre de 2007 Rosado-Aguilar (2004) investigo el efecto de la presion de seleccion con Am sobre garrapatas 6. microplus en condiciones de campo en tres ranchos bovinos del estado de Yucatan. Los bovinos fueron batiados cada 30 dias durante 15 meses. En 10s tres ranchos se increment6 el indice,-id? resistencia (IR) de 3 a 22 veces, pasando de ser ranchos con garrapatas susceptibles a ranchos con garrapatas resistentes. Los IR de las tres cepas de B. microplus evaluadas por Rosado (2004) fueron similares a las cepas reportadas por Li et al. (2004) en 11 de 15 cepas de varias areas de Mexico con valores bajos (IR= ) de resistencia al Am. Sin embargo, 10s IR encontrados en 10s tres ranchos no tuvieron la magnitud de resistencia reportada con la cepa B. microplus denominada San Alfonso (41.9) resistente al Am y reportada en Mexico (Soberanes et al., 2002). Rodriguez-Vivas et al. (2007) evaluaron la respuesta fenotipica y genotipica de B. microplus a la cipermetrina en respuesta a la presencia o ausencia de presion de seleccion durante 24 meses en poblaciones de campo de 11 ranchos en el estado de Yucatan. Los cinco ranchos tratados con cipermetrina incrementaron su IR de veces, mientras que 10s seis ranchos tratados con Am, el IR a la cipermetrina permanecio estable durante 10s 24 meses del estudio. La frecuencia del alelo resistente en 10s ranchos tratados con cipermetrina se incremento de un rango inicial de 6-47% a un rango de 66-95%, mientras que en 10s ranchos del grupo tratado con Am la frecuencia deb alelo resistente permanecio estable. En tres ranchos tratados con cipermetrina se present6 una correlacion positiva entre el IR y la frecuencia del alelo resistente (?= 0.930, p= 0.007;?= 0.930, p= 0.007; 0.825, p= 0.01). Nuevamente se demostd que la mutacion en el gen del canal de sodio es el principal mecanismo que confiere resistencia a 10s PS en las cepas de B. microplus en el estado de Yucatan. Asimismo, en el estudio realizado por Rodriguez-Vivas et al. (2007) se demostro que el uso de otro ixodicida para el control de garrapatas resistentes a 10s PS no permite la reversion a la susceptibilidad. En el estado de Yucatan, ranchos con garrapatas resistentes a 10s PS y OF no han revertido su susceptibilidad cuando se dejan de presionar por al menos 4 afios. Sin embargo, recientemente Jonsson y Hope (2007) menciona que el mod0 de heredabilidad es un importante factor en la velocidad de emergencia de la resistencia. La resistencia heredada de forma dominante es mas probable que emeja mas rapidamente que la forma recesiva. La resistencia de caracter poligenetico es probable que surja de manera lenta que la resistencia monogenetica (Kemp et al., 1999). Estos mismos autores determinaron en Australia que el tip0 de resistencia de B. microplus al amitraz es de tipo dominancia incompleta. Sin embargo, Li et al. (2005) determinaron que la resistencia al Am es de tip0 recesiva con fuerte efecto materno. Estos estudios sugieren que cepas de B. microplus resistentes al Am pueden revertir su susceptibilidad cuando no son presionadas con el mismo ixodicida. Similares estudios han permitido demostrar el efecto de la presion de seleccion con PS en la generacion de resistencia en garrapatas. Coetzee et al. (1987) desarrollaron resistencia al fenvalerato en B. decoloratus durante un period0 de 18 meses (en 5-6 generaciones de garrapatas). Asimismo, en un estudio controlado, Davey y George (1 998) desarrollaron resistencia a la permetrina en una cepa de B. microplus mediante la supresion de larvas conel ixodicida. En cinco generaciones el IR se incremento 4 veces.

9 Simposium International: Garrapatas, Babesiosis y Anaplasmosis Cd.-Victoria, Tamaulipas. M6xico 15, 16 v 17 de octubre de 2007 Conclusiones Se concluye que la resistencia de B. microplus a 10s ixodicidas p presenta en forma de multiresistencia y es un problema actual en la ganaderia del sureste de MClxico, donde ciertos factores estan influyendo para que se presenten cepas resistentes. En la actualidad el Am es el ixodicida mas utilizado en 10s ranchos bovinos, seguido de 10s OF y PS. La resistencia de B. microplus a 10s PS es la mas seria ya que 66-95% de 10s ranchos presentan distintos grados de resistencia. La resistencia al Am va en aumento, per0 en la actualidad juntos con 10s OF pueden seguir usandose en 10s ranchos en programas de control. El uso intensivo del Am y PS a nivel de campo pueden generar cepas de B. microplus resistentes; sin embargo, la generaci6n de resistencia a 10s PS es mayor. Se demostr6 que el uso de otro ixodicida para el control de garrapatas resistentes a 10s PS y OF no permite la reversi6n a la susceptibilidad. Asimismo, se ha determinado que la resistencia a 10s PS es producida principalmente por una mutacion en el canal de sodio de las garrapatas y las esterasas no se asocian con la resistencia. La tecnica de PCRmutaci6n en el canal de sodio es una herramienta para identicar individuos resistentes a 10s PS en cepas que toxicol6gicamente son susceptibles al ixodicida. Asimismo, se concluye que la presi6n en el tratamiento con Am y PS favorece lentamente a la generaci6n de resistencia; y cepas de campo resistentes a 10s PS y OF cuando se dejaron de presionar por dos aiios con 10s mismos ixodicidas no regresaron a la susceptibilidad. Referencias 1. Coetzee B.B., Stanford G.D., Davis. DA.T., Resistance by the blue tick (Boophilus decoloratus) to a range of ixodicides. Onderstp. J. Vet. Res. 54: Davey, B.R., George, E.J In vitro and in vivo evaluations of a strain of Boophilus microplus (Acari: Ixodidae) selected for resistance to permethrin. J. Med. Entomol. 35(6): Guerrero F.D., Davey, R.B., Miller R.J., Use of an allele-specific polymerase chain reaction assay to genotype pyrethroid resistant strains of Boophilus microplus (Acari:lxodidae). J. Med. Entomol. 38: Guerrero, F.D., Pruett, J.H., Status and future prospects of molecular diagnosis of acaricide resistance in Boophilus microplus. Trends Entomol. 3: He, H., Chen A. C., Davey, R.B., Ivie, G.E., George, J.E Identification of a point mutation in the para-type sodium channel gene from a pyrethroid-resistant cattle tick. Biochem. Biophysiol. Res. Com. 261 : Jonsson N.N., Mayer D.G., Green P.E., Possible risk factors on Queensland dairy farms for acaricide resistance in cattle tick (Boophilus microplus). Vet. Parasitol. 88: Jonsson, N.N., Hope, M Progress in the epidemiology and diagnosis of amitraz resistance in the cattle tick Boophilus microplus. Vet Parasitol. 146(3-4): Kemp, D.H., McKena,R.V., Thullner, R., Willadsen, P., Strategies for tick control in a world of acaricide resistance. In: Proceedings of the IV International Seminar of Animal Parasitology, October 20-22, Puerto Vallarta, ~exic;, 5p Kemp, D.H., Holdsworth, P.A., Green, P.E Registration of products for Boophilus control; suggestions for change from experiences in Australia. In: V lnternational

10 Simposium Internacional: Garrapatas, Babesiosis y Anaplasmosis Cd. Victoria, Tamauli~as. M6xico v 17 de octubre de 2007 Seminar in Animal Parasitology. World situation of parasite resistance in veterinary medicine. Rodriguez, C.S., Mendoza, G.P., Orcillez, A.G., Garcia, V.Z., Fragoso, S.H. Ed. October 1-3,2003. Merida, Yucatan, Mexico. pp Kunz S.E.,Kemp ~.~$,,1,994. Insecticides and acaricides: resistance and environmental impacts. Rev. Sci. Tech. Off. Int. Epiz. 13: Li, A.Y., Davey, R.B., Fragoso, H.S. and J.E. George Characterization of amitraz resistance in Boophilus microplus (Acari: Ixodidae) and its implications in resistance management. Proc. V International Animal Parasitology: World Situation of Parasite Resistance in Veterinary Medicine. Merida, Yucatan, Mexico. pp Li, A.Y., Davey, R. B., Miller, R.J., George, J.E., Mode of inheritance of amitraz resistance in a Brazilian strain of the southern cattle tick, Boophilus microplus (Acari: Ixodidae). Exp. Appl. Acarol. 37: Nolan, J.; Wilson, J.T.; Green, P.E.; Bird, P.E Synthetic pyrethroid resistance in field samples in the cattle tick (Boophilus microplus). Australian Vet. J. 66: Rodriguez-Vivas, R.I.; Diaz M.O.C.; Villegas P0.S.L.; Ramirez C.G.T.; Hodgkinson J.E.; Trees A.J. 2006c. Frecuencia de genotipos en cepas de garrapatas Boophilus microplus identificadas fenotipicamente como resistentes y susceptibles a la cipermetrina. VII Congreso Nacional de Parasitologia Veterinaria. Acapulco, Guerrero del28 al 30 de Septiembre de p Rodriguez-Vivas R.I., Alonso-Diaz M.A., Rodriguez-Arevalo F., Fragoso-Sanchez H., Santamaria V.M., Rosario-Cruz R., 2006a. Prevalence and potential risk factors for organophosphate and pyrethroid resistance in Boophilus microplus ticks on cattle ranches from the State of Yucatan, Mexico. Vet. Parasitol. 136: Rodriguez-Vivas R.I., Dominguez A.J.L., Grupos entomologicos de importancia veterinaria en Yucatan, Mexico. Rev. Biomed. 9: Rodriguez-Vivas R.I., Rivas, A.L., Chowell, G., Fragoso, S.H., Rosario, C.R., Garcia, Z., Smith, S.D., Williams, J. J., Schwager S.J., Spatial distribution of acaricide profiles (Boophilus microplus strains susceptible or resistant to acaricides) in southeastern Mexico. Vet. Parasitol. 146: Rodriguez-Vivas, R.I., Mata-Mendez, Y., Perez-Gutierrez, E., Wagner, G The effect of management factors on the seroprevalence of Anaplasma marginale in Bos indicus cattle in the Mexican tropics. Trop. Ani. Hlth Prod. 36: Rodriguez-Vivas, R. I., Rodriguez-Arevalo, F., Alonso-Diaz, M.A., Fragoso-Sanchez, H., Santamaria, V.M., Rosario-Cruz, R., 2006b. Amitraz resistance in Boophilus microplus ticks in cattle farms from the state of Yucatan, Mexico: prevalence and potential risk factors. Prev. Vet. Med. 75: Rodriguez-Vivas, R.I.; Hodgkinson, J.E., Rosado-Aguilar, J.A., Villegas, P.S.L., Trees, A.J. (2007). Effect of cypermethrin selection pressure and substitution with amitraz on phonotype and genotype meansures of cypermethrin resistance in field opulations of Boophilus microplus (Acari: Ixodidae) in the Mexican tropics. The 21' P International Conference if the World Association for the Advancement of Veterinary Parasitology Ausgust Gent, Belgium. pp Rosado-Aguilar, J..A Evolucion de la resistencia a las amidinas cicliclas en garrapatas BoophJus microplus sometidas a presion quimica con el mismo product0 en tres ranchos del -estado de Yucatan, Mexico. Tesis de Maestria. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Aut6noma de Yucatan. Merida, Mexico.

11 Simposium International: Garrapatas, Babesiosis y Anaplasmosis Cd. Victoria, Tamaulipas. M6xiw 15, 16 y 17 de octubre de 2007 pp Rosario-Cruz R., Guerrero F.D., Miller R.J., Rodriguez-Vivas R. I., Dominguez-Garcia D.I., Cornel A.J., Hernandez-Ortiz R., George J.E., Roles played by esterase activity and by a sodium channel mutation involved in Gkthroid resistance in populations of Boophilus microplus (Acari: Ixodidae) collected from Yucatan, Mexico. J. Med. Entomol. 42(6): Rosario-Cruz, R., Miranda, M. E., Garcia, V.Z., Ortiz, E.M., Detection of esterase activity in susceptible and resistant Boophilus microplus tick strains. Bull. Entomol. Res. 87: Soberanes, C.N., Santamaria, V.M., Fragoso, S.H., Garcia, V.Z., Primer caso de resistencia al amitraz en la garrapata del ganado Boophilus microplus en Mexico. Tec. Pec. Mex. 40: Grupo quimico Amidinas Organofosforados Piretroides sinteticos Sustancia quimica Amitraz - Coumafos Clorfenvinfos Diazin6n Cipermetrina Deltametrina Flumetrina Yucatan % a Tabasm % I Chiapas % Cuadro 1. Prevalencia de ranchos bovinos con garrapatas Boophilus microplus resistentes a ixodicidas en ranchos bovinos en el sureste de Mexico. Sobrevivencia Larval (%) No. de cepas Frecuencia de ranchos (%) > 30 2' 2.04 Fuente: Rodriguez-Vivas et al. (2006b) Cuadro 2. Sobrevivencia larval de 98 cepas de Boophilus microplus evaluadas mediante la prueba de inmersi6n larval usando dosis discriminante con amitraz (0.0002%) en ranchos bovinos de Yucatan, M6xico. Diazinbn Coumafos Clorfenvinfos.\.. ~ Sobrevive No. de Frecuencia de No. de FrecueiicCa No. de Frecuenci ncia larval Cepas ranchos (%) cepas de ranchos cepas a de (%) (%) ranchos

12 Simposium Internacional: Garrapatas, Babesiosis y Anaplasmosis - Cd. Victoria, Tamaulipas. Mexico 15,16 y 17 de octubre de 2007 Cuadro 3. Sobrevivencia larval de 98 cepas de Boophilus microplus evaluadas mediante la prueba de paquetes de larvas usando dosis discriminante con coumafos (0.2%), clorfenvinfos (0.2%) y diazin6n (0.08%) en ranchos bovinos de Yucatan, Mexico. Flumetrina Deltametrina Cipermetrina Sobrevivencia No. de Frecuencia No. de Frecuencia No. de Frecuencia larval (%) cepas de ranchos cepas De ranchos Cpas de ranchos (%) (%I (%) Cuadro 4. Mortalidad larval de 98 cepas de Boophilus microplus evaluadas mediante la prueba de paquetes de larvas usando dosis discriminante con flumetrina (0.01%), deltametrina (0.09%) y cipermetrina (0.05%) en ranchos bovinos de Yucatan, Mexico.