Efecto de la concentración de sacarosa en la producción de antocianinas a partir de cultivos celulares de Vitis vinífera L. var. Red globe.

Transcripción

1 Efecto de la concentración de sacarosa en la producción de antocianinas a partir de cultivos celulares de Vitis vinífera L. var. Red globe. Antonieta Miñano, Julio Chico, Eloy López, Manuel Sisniegas, Miguel Bobadilla. Integrantes: Calderón Borra, Marián Origone, Andrea

2 Introducción: Vitis vinífera produce Compuesto bioactivo: ANTOCIANINA Utilidades de antocianinas: Importante cardiotónico Antioxidante Propiedades anticancerígenas Colorante atóxico utilizado en la industria alimentaria y de medicamentos Presente en hojas, semillas y frutos

3 La baja productividad de antocianinas es superada por: Selección de líneas celulares l muy productivas Optimización de las condiciones del medio de cultivo Adición de precursores biosintéticos y elicitores Sobre expresión de genes codificantes de enzimas biosintéticas Aumento en la excresión de compuestos deseados Para estimular la producción se emplean: Variaciones de temperatura Variaciones de luz Variaciones en la concentración de sacarosa, nitrógeno y amonio Uso de biorreactores

4 Vitis vinífera produce antocianinas En los cultivos celulares en suspensión se trabajó con dos medios : Medio Basal (MB) y Medio Inductor (MI) Objetivo: Determinar la concentración de sacarosa que permita Determinar la concentración de sacarosa que permita obtener la mayor producción de antocianinas en cultivos celulares de Vitis vinífera L. var. Red globe.

5 Materiales y métodos: Se partió de explantos de hj hojas de plántulas látl Obtención de callos: en cámara de siembra Segmentos de hoja (1 cm) en MB 16h. De luz 25 ºC Incubación: 8hs, de oscuridad 85% humedad Macroelementos Microelementos (Murashige-Skoog) Vitaminas 3 g Sacarosa 0.3 g Fitagel 0.01 ml 2,4-D Obtención de Callos a los 30 días ph 5,8

6 Cultivos Celulares: Se utilizaron dos medios líquidos: Medio de Mantenimiento (MM) MI Suplementado con Kinetina, ANA y Sacarosa a diferentes concentraciones 1) 2 callos desintegración filtrado por tamiz de nylon Callos rogizos 1.5 cm 20 ml MM Incubación 7 días luz continua 25ºC 85 % humedad agitador cél/ml 125 ml total (MM) 2) MM MI para tratamiento T (0 mm) A (58 mm) B (132 mm) C (175mM) matraces 15 ml de MI agitador luz continua 25ºC 85 % humedad Incubac. 4 semanas

7 Además se evaluó semanalmente la forma celular, contenido y presencia de antocianinas a la vez que se renovaron los medios.

8 Evaluación del crecimiento e celular: 1) Conteo de células con cámara de Neunbauer: 2) Determinación de la viabilidad: teñido de las células con azul de metileno. Cosecha de las células: 1) Células separadas por papel de filtro. 2) Células llevadas a estufa durante 24 hs.

9 Extracción y lectura de antocianinas: Mediante espectrofotómetro UV a 535 nm.

10 Resultados: La producción de antocianinas va aumentando conforme se incrementa la concentración de sacarosa, siendo la máxima producción de 1.97 µm a 175 mm de sacarosa (tratamiento C). Se identifica el punto mayor de producción de antocianinas al obtenido con el tratamiento B, a 132 mm de sacarosa.

11 Los tratamientos desarrollaron un patrón relativamente estable en las cuatro semanas en los tratamientos A, B y C, mientras que en T se observó un aumento continuo del crecimiento celular.

12 Conclusión: Se determinó que la producción de antocianinas aumenta a medida que se incrementa la concentración de sacarosa hasta 175 mm, lo que indicaría que las células aumentan su capacidad de sintetizar antocianinas a medida que la concentración de sacarosa se incrementa. Sin embargo cuando se alcanzó la concentración de 58 mm estimuló una menor producción de antocianinas. Se determinó que un aumento en la concentración de sacarosa crean estrés osmótico, inhibiendo el crecimiento celular, pero favoreciendo la acumulación de antocianinas. En cada especie de Vitis, la concentración de sacarosa varía para obtener una máxima producción de antocianinas. En el presente trabajo concentraciones de 175 mm (tratamiento C) darán una máxima producción, pero 132 mm (tratamiento B) es el punto óptimo para la producción de antocianinas. nas.