Técnicas espectroscópicas para el control de calidad del azafrán. Albacete, 22/04/2009
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- Julián Santos Gallego
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1 Técnicas espectroscópicas para el control de calidad del azafrán (picrocrocina y safranal) Albacete, 22/04/2009
2 Análisis de la picrocrocina por extracción en fase sólida
3 Preparación del extracto Pesar 500 mg de azafrán Agitar a 1000 rpm durante 1h a T ambiente Tomar 10 ml del extracto Centrifugar durante 5 min a 4000 rpm
4 Acondicionamiento del cartucho C18 Pasar 2 ml de acetonitrilo. 5 ml de agua destilada a un caudal de 5 ml/min. Volver a pasar 2 ml de acetonitrilo seguidos de 5 ml de agua destilada.
5 Extracción de la picrocrocina Tomar 1 ml del sobrenadante centrifugado y hacerlo pasar a un caudal de 2 ml/min. Lavar el cartucho con 10 ml de agua destilada.
6 Extracción de la picrocrocina Eluir la picrocrocina con 10 ml de una disolución aguaacetonitrilo al 12 % recogiendo un volumen de 10 ml.
7 Determinación de la picrocrocina Medir la absorbancia de ésta fracción entre 200 y 700 nm en cubetas de 1 cm, utilizando la disolución de agua-acetonitrilo al 12% como blanco.
8 Resultados Obtención de los resultados. 0,263 PICROCROCINA 0,20 0,15 A 0,10 0,05 0,00-0, , ,0 nm
9 Resultados Expresión de los resultados: A es la absorbancia b a250 nm V es el volumen utilizado en la extracción en ml b es el espesor de la cubeta utilizada (1 cm) m es la masa seca de la muestra de azafrán en gramos: m = masa de azafrán (100-Humedad)
10 Análisis del safranal por extracción con cloroformo
11 Preparación del extracto Pesar 100 mg de azafrán molido y echarlo en un matraz aforado de 10 ml. Añadir 4 ml de cloroformo.
12 Preparación del extracto Colocar el matraz en una gradilla y mantener en el ultrasonidos 15 minutos. La temperatura del agua del ultrasonidos no deberá superar 25ºC.
13 Extracción del safranal Filtrar la disolución con filtros de membrana PTFE de 0,45 mm. Recogerla en un matraz 5 ml y enrasar con cloroformo. Medir la absorbancia entre 200 y 700 nm con una cubeta de 2 mm de espesor, utilizando cloroformo como blanco.
14 Resultados Obtención de los resultados. 1,00 SAFRANAL 08 0,8 0,6 A 04 0,4 0, ,00 190, ,0 NM
15 Resultados Expresión de los resultados: A es la absorbancia a 310 nm V es el volumen utilizado en la extracción en ml (5 ml) b es el espesor de la cubeta utilizada en cm (0,2 cm) m es la masa seca de la muestra de azafrán en gramos: m = masa de azafrán( 100- Humedad)
16 Técnicas HPLC para la determinación de colorantes artificiales y pigmentos naturales polares y no polares en la norma ISO 3632
17 Análisis i de los colorantes no polares Sudan I Sudan II Sudan III Sudan IV Sudan Red 7B Sudan Red B Trans apo-8-carotenal
18 Preparación del extracto Pesar 100 mg de azafrán molido y echarlo en un matraz aforado de 10 ml. Añadir 4 ml de cloroformo. Sonicar durante 15 minutos. La temperatura del agua del ultrasonidos no deberá superar 25 ºC. Filtrar la disolución con filtros de membrana PTFE de 0,45 mm. Recogerla en un matraz 5 ml y enrasar con cloroformo. Evaporar el cloroformo con flujo de nitrógeno. Reconstituir el extracto con 90 µl de cloroformo y 210 µl de la fase móvil A.
19 Condiciones cromatograficas Fase móvil A: Acetonitrilo/Metanol/Agua(45:45:10)(% v/v) Fase móvil B: Cloroformo Velocidad flujo: 15mL/min 1,5 Columna cromatográfica por HPLC, tipo C18 (25 cm x 4 mm i.d.) Columna a T ambiente Time Solvente A Solvente Velocidad (min) (%) B(%) flujo (ml/min)
20 Cromatograma de una disolución estándar de colorantes no polares a 504 nm.
21 Análisis i de los colorantes polares Alizarin Alizarin Red S Bixin Carminic Acid Chrysoidine G Crocin Curcumin Riboflavina 10% Riboflavina-5-monofosfato Sodium Sal Hidrato
22 Preparación del extracto Pesar 500 mg de azafrán molido y echarlo en un matraz aforado de 1 L con 900 ml de agua destilada. Agitar la disolución durante 1 h. Enrasar el matraz con agua destilada y homogenizar la disolución.
23 Método mediante HPLC Condiciones cromatograficas Fase móvil A: 1% Acido acético en Agua HPLC Fase móvil B: 1% Acido acético en Acetonitrilo HPLC Velocidad flujo: 1,0 ml/min Columna cromatográfica por HPLC, tipo C18 (25 cm x 4 mm i.d.) Columna a T ambiente En fase de optimización.
24 Técnicas espectroscópicas para el control de calidad del azafrán (picrocrocina y safranal) Albacete, 22/04/2009
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