Oferta de líneas para la realización del Trabajo Fin de Máster en el Máster Universitario en Biomedicina Experimental 2015/2016 Los alumnos matriculados en la asignatura disponen hasta el viernes 30 de octubre de 2015 a las 14:00 para hacer la selección de los temas de su interés para la elaboración del trabajo fin de máster, en orden de preferencia. Para ello debe utilizarse la herramienta a su disposición en el Campus Virtual. Se debe contactar con los tutores de las líneas en las que se esté interesado, tanto para resolver las posibles dudas como para que éstos conozcan del interés del alumno. La asignación de las líneas para la realización del Trabajo Fin de Máster será realizada por la Comisión Académica asumiendo, en la medida de lo posible, las opciones puestas de manifiesto por los estudiantes y tutores. Al final de este documento se detallan los criterios de evaluación y el formato para la presentación de los trabajos Índice: Detalle de las líneas de investigación ofertadas... 2 1. Caracterización de la exposición personal a ondas electromagnéticas de radiofrecuencia, efectos sobre la salud, hipersensibilidad y percepción de la salud.... 2 2. Descifrando el papel de las adhesinas en el establecimiento de infecciones causadas por el hongo patógeno humano Candida glabrata... 2 3. Sobre-expresión y caracterización de enzimas con potencial función en el ensamblaje de la pared celular de hongos... 3 4. Efectos de la infusión central de leptina sobre la localización subcelular de receptores β- adrenérgicos en hígado de ratas Wistar de mediana edad. Influencia de la adiposidad.... 3 5. Estudio de la ruta de señalización de p38 en terapia antitumoral en sarcomas.... 4 6. Estudio de ERk5 como nueva diana antitumoral y sus implicaciones en quimio y radio terapia.... 4 7. Evaluación de inhibidores de bromodomain en combinación con inhibidores de polo-like quinasas en cáncer de mama triple negativo.... 4 8. Efecto de compuestos bioactivos del azafrán de La Mancha sobre la diferenciación de adipocitos.... 5 9. Análisis de la afectación neuronal en el sistema olfativo rostral humano en la enfermedad de Parkinson.... 6 10. Análisis de la afectación neuronal en el sistema olfativo caudal humano en la enfermedad de Parkinson.... 6 11. Análisis de la afectación neuronal en el núcleo olfativo anterior sobre tejido neurológico de pacientes diagnosticados con la enfermedad de Alzheimer... 7 12. Identificación del dominio transmembrana de la polimerasa del virus de la hepatitis E (VHE).... 7 13. Análisis funcional de variantes del gen candidato de glaucoma GPATCH3.... 7 14. Caracterización funcional del gen candidato de glaucoma LRP2 en embriones de pez cebra.... 8 15. Inactivación de GSK3β por p38 MAPK: implicaciones para la neurogénesis y neurodegeneración.... 8 16. Factores endocrinos que regulan la actividad rítmica del hipocampo.... 9 Criterios de evaluación... 10 Extensión y estructura para la presentación de los trabajos... 10 Pág. 1 de 10
Detalle de las líneas de investigación ofertadas 1. Caracterización de la exposición personal a ondas electromagnéticas de radiofrecuencia, efectos sobre la salud, hipersensibilidad y percepción de la salud. Tutor/es: Alberto Nájera López (Alberto.Najera@uclm.es) Laboratorio: Salud, Medicina y Sociedad (Medida de la Exposición a Ondas Electromagnéticas de Radiofrecuencia (MORFEO)), CRIB (Facultad de Medicina de Albacete) Resumen: Se propone la realización de medidas con exposímetros personales de ondas de radiofrecuencia (de FM a WiFi Max, un total de 14 bandas de frecuencia) en zonas donde la presencia de una antena de telefonía móvil ha generado alarma social. Con los datos registrados en estas zonas y en zonas donde, a pesar de haber antenas, no se ha producido esa alarma social, utilizar encuestas/test de percepción de riesgo y estado de salud con el fin de determinar diferencias significativas y factores que puedan influir en cambios en la percepción de la Salud. Se ofrece también la posibilidad de realizar diferentes enfoques del problema: geoestadística, hipersensibilidad, efectos sobre la salud, etc. 2. Descifrando el papel de las adhesinas en el establecimiento de infecciones causadas por el hongo patógeno humano Candida glabrata Tutor/es: Piet de Groot (Piet.deGroot@uclm.es) y Antonio Mas López (Antonio.Mas@uclm.es) Laboratorio: Molecular Mycology, CRIB (Edificio del CRIB-IDINE) Resumen: Las infecciones fúngicas son una causa frecuente de infección en humanos, especialmente las causadas por levaduras del género Candida. En pacientes inmunocomprometidos, Candida puede causar infecciones sistémicas que ponen en riesgo la vida del paciente y son difíciles de diagnosticar y tratar. Por tanto, el desarrollo de antifúngicos más efectivos y nuevas estrategias terapéuticas es urgente y necesario. El grupo de Micología Molecular pretende obtener un mayor conocimiento de los procesos moleculares que permiten el establecimiento de infecciones fúngicas en humanos.,la pared celular de Candida es una diana importante en el desarrollo de nuevos antifúngicos por ser la superficie de contacto entre hongo y hospedador. En este proyecto, nos centraremos en el papel que juegan las proteínas de la pared celular tipo adhesina en el anclaje a los tejidos humanos y en la formación de biofilms, que preceden al establecimiento de la infección. Objetivo: Clonar, expresar y purificar adhesinas de la pared celular del patógeno humano C.glabrata relevantes en infecciones, para su posterior caracterización funcional y estructural. Metodología: En nuestro laboratorio, disponemos de aislados clínicos de C. glabrata que muestran fenotipos hiperadherentes a superficies acrílicas, silicona y plásticos. Recientemente, hemos identificado nuevas adhesinas de la pared celular en estos aislados clínicos hiperadherentes. El objetivo en este proyecto es la clonación de algunas de estas adhesinas. Los genes clonados se expresarán en E. coli para realizar experimentos de purificación con el objetivo de obtener suficiente proteína pura para poder realizar pruebas de caracterización funcional, unión a ligandos y estudios estructurales avanzados. Otro de los objetivos es identificar más adhesinas relevantes, clínicamente hablando, de los aislados de fenotipos hiperadherentes. Dependiendo de los intereses del estudiante, el proyecto puede enfocarse desde el punto de vista de la biología celular, biología molecular o de la bioquímica. Este proyecto puede incluir aislamientos de pared celular para la realización de estudios proteómicos, trabajos de clonación, expresión y purificación de proteínas. Las técnicas utilizadas en este proyecto incluyen aislamiento de pared celular, pruebas de adhesividad, PCR, técnicas de clonaje, SDS-PAGE, Western e inmunoblotting, FPLC, purificación de proteínas y técnicas de microscopía. Pág. 2 de 10
Idioma: Español o inglés 3. Sobre-expresión y caracterización de enzimas con potencial función en el ensamblaje de la pared celular de hongos Tutor/es: Piet de Groot (Piet.deGroot@uclm.es) y Antonio Mas López (Antonio.Mas@uclm.es) Laboratorio: Molecular Mycology, CRIB (Edificio del CRIB-IDINE) Resumen: Las infecciones fúngicas son una causa frecuente de infección en humanos, especialmente las causadas por levaduras del género Candida. En pacientes inmunocomprometidos, Candida puede causar infecciones sistémicas que ponen en riesgo la vida del paciente y son difíciles de diagnosticar y tratar. Por tanto, el desarrollo de antifúngicos más efectivos y nuevas estrategias terapéuticas es urgente y necesario. Nuestro grupo de Micología Molecular pretende obtener un mayor conocimiento de los procesos moleculares que permiten el establecimiento de infecciones fúngicas en humanos. Por ser la superficie de contacto entre hongo y hospedador, la pared celular de Candida es una diana importante en el desarrollo de nuevos antifúngicos. La pared celular de Candida es una matriz compuesta de polisacáridos y proteínas. Aunque los componentes individuales de la pared celular de hongos se conocen bastante bien, todavía no está claro cómo estas moléculas se ensamblan en complejos macromoleculares. El conocimiento de cómo los hongos construyen la estructura de su pared celular puede abrir el camino al desarrollo de nuevas terapias antifúngicas. Por tanto, en este proyecto nos centramos en la caracterización funcional de proteínas que juegan un papel destacado en la formación de la pared celular de hongos. Objetivo: Sobre-expresión y caracterización funcional de enzimas/proteínas con datos previos experimentales y bioinformáticos que indiquen que participan, aunque se desconozca cómo, en el ensamblaje de la pared celular de hongos. Metodología: En nuestro laboratorio estamos actualmente clonando algunas proteínas importantes en el ensamblaje de la pared celular. Estas proteínas serán sobre-expresadas y purificadas para análisis funcionales. Estos estudios incluyen incubaciones con posibles sustratos y/o fracciones de la pared celular y otros ensayos bioquímicos. Las técnicas utilizadas en este proyecto incluyen aquellas necesarias para el aislamiento de la pared celular, ensayos bioquímicos, PCR, técnicas de clonaje, SDS-PAGE, Western e inmunoblotting, FPLC, purificación de proteínas y técnicas de microscopía. Idioma: Español o inglés 4. Efectos de la infusión central de leptina sobre la localización subcelular de receptores β- adrenérgicos en hígado de ratas Wistar de mediana edad. Influencia de la adiposidad. Tutor/es: Nilda Gallardo Alpízar (Nilda.Gallardo@uclm.es) Laboratorio: Diabetes y Obesidad con el Envejecimiento, CRIB (Facultad de CC. y Tecnologías Químicas de Ciudad Real) Resumen: La leptina modifica el metabolismo hepático a través del sistema neuroendocrino. De esta forma la leptina colabora en la homeostasis de glucosa y de lípidos y en el mantenimiento del peso corporal. Sin embargo, en roedores como en humanos, las acciones centrales de la leptina que repercuten en la funcionalidad de tejidos como el hígado, disminuyen o se modifican con el envejecimiento y con el incremento de adiposidad, siendo frecuente el desarrollo de esteatosis hepática. Por esta razón, nos proponemos estudiar in vivo, los cambios que tienen lugar en la regulación simpática del hígado, en un modelo animal de prediabetes que se manifiesta asociada al envejecimiento. Con la finalidad de profundizar Pág. 3 de 10
en la regulación del metabolismo hepático por el hipotálamo realizaremos el estudio en animales de mediana edad (8 meses), alimentados ad libitum o bajo previa restricción nutricional (3 meses), que han recibido tratamiento central de leptina (0.2 μg leptina / día, durante 7 días). El estudiante deberá determinar, en todos los animales sometidos a estudio, los niveles séricos de las catecolaminas adrenalina y noradrenalina, con el empleo de ELISAS específicos para ratas. Asimismo, el estudiante deberá obtener extractos totales de hígado y fracciones subcelulares enriquecidas en membranas plasmáticas e internas, en las que determinará mediante Western-Blot, los niveles relativos de los receptores β- adrenérgicos seleccionados. 5. Estudio de la ruta de señalización de p38 en terapia antitumoral en sarcomas. Tutor/es: Ricardo Sánchez Prieto (Ricardo.Sanchez@uclm.es) y María José Ruiz Hidalgo (Maria.RHidalgo@uclm.es) Laboratorio: Oncología Molecular, CRIB (Edificio F. Medicina de Albacete) Resumen: El alumno se familiarizará con técnicas básicas de investigación oncológica., bioquímica de proteínas, técnicas básicas de biológica molecular (Manejo de cultivos, preparación de plásmidos, q-rt-pcr ect.) medidas de viabilidad celular, uso de vectores expresión, uso de interferencias, inhibidores de proteínas quinasas así como tareas de generales de laboratorio. 6. Estudio de ERk5 como nueva diana antitumoral y sus implicaciones en quimio y radio terapia. Tutor/es: Ricardo Sánchez Prieto (Ricardo.Sanchez@uclm.es) y María José Ruiz Hidalgo (Maria.RHidalgo@uclm.es) Laboratorio: Oncología Molecular, CRIB (Edificio F. Medicina de Albacete) Resumen: El alumno se familiarizará con técnicas básicas de investigación oncológica., bioquímica de proteínas, técnicas básicas de biológica molecular y celular (Manejo de cultivos, preparación de plásmidos q-rt-pcr ect.) medidas de viabilidad celular, uso de vectores expresión, uso de interferencias, inhibidores de proteínas quinasas así como tareas de generales de laboratorio. 7. Evaluación de inhibidores de bromodomain en combinación con inhibidores de polo-like quinasas en cáncer de mama triple negativo. Tutor/es: Alberto Ocaña Fernández (albertoo@sescam.jccm.es), Miguel Burgos Lozano (Miguel.Burgos@uclm.es) y Beatriz Domingo Moreno (Beatriz.Domingo@uclm.es) Laboratorio: Unidad Investigación Traslacional, Complejo Hospitalario Univ. de Albacete Resumen: El cáncer de mama triple negativo comprende el 15% de todos los subtipos de cáncer de mama, siendo el más agresivo debido a su alta tasa de mortalidad y su recurrencia a corto plazo, con una supervivencia escasa. El tratamiento actual para esta enfermedad consiste en la quimioterapia tradicional ya que no se han identificado dianas que puedan usarse terapéuticamente. En esta investigación se utilizarán dos drogas: JQ1, que es un inhibidor de bromodomain y Volasertib, un inhibidor de polo-like quinasas. Los inhibidores de bromodomain pertenecen a una nueva familia de compuestos que evitan la expresión de genes relevantes en cáncer, principalmente factores de transcripción. Los inhibidores de polo-like quinasas, afectan a las quinasas polo-like que participan en la formación del uso mitótico, produciendo su inhibición arresto mitótico. Esperamos que la combinación de ambos sea sinérgica Para evaluar su actividad utilizaremos modelos celulares, donde se realizarán estudios de Pág. 4 de 10
proliferación con contaje celular y MTTs, así como estudios clonogénicos y en matrigel. Su acción conjunta se estudiará bioquímicamente por western-blot. Su efecto sobre mitosis se analizará con microscopía marcando con immunofluorescencia o bioquímicamente evaluando ph3. 8. Efecto de compuestos bioactivos del azafrán de La Mancha sobre la diferenciación de adipocitos. Tutor/es: Silvia Llorens Folgado (Silvia.Llorens@uclm.es) Laboratorio: Fisiología y Dinámica Celular, CRIB (Edificio F. Medicina de Albacete) Resumen: La obesidad está considerada como la principal enfermedad metabólica en el mundo debido a su creciente tasa de prevalencia. La OMS define la obesidad como una acumulación anormal o excesiva de grasa (en forma de triglicéridos) en el tejido adiposo blanco, que implica un riesgo para la salud dado que lleva asociada todo un conjunto de trastornos metabólicos y sistémicos incluyendo diabetes mellitus, hipertensión, aterosclerosis y cáncer. Los adipocitos son el principal componente del tejido adiposo y juegan un importante papel en el mantenimiento de la salud. Constituye un verdadero órgano endocrino que libera adipoquinas (leptina, adiponectina, resistina) a la circulación, implicadas en la regulación del metabolismo. El conocimiento de la biología del adipocito es crucial para determinar las bases moleculares del desarrollo de la obesidad ya que la diferenciación del adipocito y la cantidad de grasa que se acumule en él están íntimamente ligados al desarrollo de la obesidad. La diferenciación de los adipocitos (adipogénesis) es el proceso en el que las células precursoras dan lugar a adipocitos maduros. Este proceso consta de dos etapas, temprana (proliferación de preadipocitos) y tardía (los preadipocitos adoptan el fenotipo de adipocito produciéndose cambios morfológicos en la célula y síntesis y acumulación de grasa (lipogénesis)). La diferenciación adipocitaria patológica, confiere un incremento en el número y tamaño de los adipocitos (hiperplasia e hipertrofia, respectivamente) debido a un exceso de acumulación lipídica, afectando igualmente a la expresión y secreción de las adipoquinas. La hiperplasia e hipertrofia de los adipocitos condicionan un aumento de tejido graso en los individuos obesos e implican la progresión de la dicha condición metabólica. Conocer cómo se produce y regula la adipogénesis es fundamental para poder establecer estrategias preventivas y/o terapéuticas de la obesidad. El tratamiento de la obesidad incluye una modificación del estilo de vida, fármacos y cirugía bariátrica. Los tratamientos tradicionales basados en las dietas hipocalóricas y el aumento de la actividad física han tenido cierto éxito en el control de la obesidad sin embargo, estas estrategias suelen dar lugar a reducciones de peso limitadas y temporales. Por otro lado, tanto la farmacología empleada así como la cirugía bariátrica en el tratamiento de la obesidad producen graves efectos secundarios. Todo ello, provoca la búsqueda de nuevas estrategias frente a la obesidad entre las que existe un creciente interés en el estudio de aproximaciones terapéuticas a partir de productos naturales para la prevención y el tratamiento de la obesidad, que reduzcan los efectos secundarios adversos. Las plantas utilizadas como anti-obesidad suelen presentar una gran actividad antioxidante, el azafrán contiene varios compuestos bioactivos los cuales se caracterizan por ser potentes antioxidantes, con actividad antiinflamatoria, antiaterogénica, anticarcinogénica, incrementan sensibilidad a la insulina etc. Nuestro objetivo será comprobar la capacidad de algunos componentes bioactivos derivados del azafrán, de modular la adipogénesis, lipogénesis y/o lipólisis en adipocitos. Se realizarán cultivos celulares y se empleará espectroscopía de fluorescencia, espectroscopía UV-Vis y enzimoinmunoensayos Pág. 5 de 10
9. Análisis de la afectación neuronal en el sistema olfativo rostral humano en la enfermedad de Parkinson. Tutor/es: Alino Martínez Márcos (Alino.Martinez@uclm.es) e Isabel Úbeda Bañón (Isabel.Ubeda@uclm.es) Laboratorio: Neuroplasticidad y Neurodegeneración, CRIB (F. Medicina de Ciudad Real) Resumen: La enfermedad de Parkinson (EP) es un trastorno neurodegenerativo, mayoritariamente idiopático y caracterizado neuropatológicamente por la aparición de depósitos patológicos de alfa-sinucleína, entre otras proteínas, que forman los cuerpos de Lewy. Estos depósitos aparecen de forma temporal y predecible en distintas zonas del sistema nervioso. Existen evidencias de una fase preclínica que comenzaría años e incluso décadas antes que los síntomas lleven al diagnóstico. Este periodo estaría caracterizado por síntomas tempranos entre los que destaca la pérdida de olfacción. En este estudio se pretende analizar la pérdida neuronal en el sistema olfativo rostral humano (bulbo olfativo, pedúnculo olfativo y núcleo olfativo anterior). Para ello se utilizará material neurológico humano procedente de enfermos de Parkinson y de individuos control, proporcionado los bancos de cerebros biobanc HCB-IDIBAPS (Barcelona), Biobanc-Mur (Murcia) y btcien (Madrid). Se realizarán técnicas de inmunohistoquímica/inmunofluorescencia con marcadores neuronales (Neu-N) en secciones de 50 µm seriadas. Posteriormente se tomarán fotografías y se realizará un recuento estereológico del número de neuronas en las diferentes estructuras olfativas rostrales, analizando el efecto de la EP en la pérdida neuronal. Los resultados de la pérdida neuronal asociado a la alfa-sinucleína pueden ser objeto de publicación. 10. Análisis de la afectación neuronal en el sistema olfativo caudal humano en la enfermedad de Parkinson. Tutor/es: Alino Martínez Márcos (Alino.Martinez@uclm.es) y Alicia Flores Cuadrado (AliciaMaria.Flores@alu.uclm.es) Laboratorio: Neuroplasticidad y Neurodegeneración, CRIB (F. Medicina de Ciudad Real) Resumen: La enfermedad de Parkinson (EP) es un trastorno neurodegenerativo, mayoritariamente idiopático y caracterizado neuropatológicamente por la aparición de depósitos patológicos de alfa-sinucleína, entre otras proteínas, que forman los cuerpos de Lewy. Estos depósitos aparecen de forma temporal y predecible en distintas zonas del sistema nervioso. Existen evidencias de una fase preclínica que comenzaría años e incluso décadas antes que los síntomas lleven al diagnóstico. Este periodo estaría caracterizado por síntomas tempranos entre los que destaca la pérdida de olfacción. En este estudio se pretende analizar la pérdida neuronal en el sistema olfativo caudal humano (amígdala e hipocampo). Para ello se utilizará material neurológico humano procedente de enfermos de Parkinson y de individuos control, proporcionado los bancos de cerebros biobanc HCB-IDIBAPS (Barcelona), Biobanc-Mur (Murcia) y btcien (Madrid). Se realizarán técnicas de inmunohistoquímica/inmunofluorescencia con marcadores neuronales (Neu-N) en secciones de 50 µm seriadas. Posteriormente se tomarán fotografías y se realizará un recuento estereológico del número de neuronas en las diferentes estructuras olfativas caudales, analizando el efecto de la EP en la pérdida neuronal. Los resultados de la pérdida neuronal asociado a la alfa-sinucleína pueden ser objeto de publicación. Pág. 6 de 10
11. Análisis de la afectación neuronal en el núcleo olfativo anterior sobre tejido neurológico de pacientes diagnosticados con la enfermedad de Alzheimer. Tutor/es: Alino Martínez Márcos (Alino.Martinez@uclm.es) y Daniel Saiz Sánchez (Daniel.Saiz@uclm.es) Laboratorio: Neuroplasticidad y Neurodegeneración, CRIB (F. Medicina de Ciudad Real) Resumen: La enfermedad de Alzheimer (EA) es el trastorno neurodegenerativo más prevalente de nuestra sociedad. Su diagnóstico se basa en la pérdida progresiva de funciones cognitivas como déficit de memoria, desorientación, etc. Sin embargo, es habitual que la pérdida del olfato (hiposmia y anosmia) suceda en estadios tempranos de la enfermedad (antes incluso que los déficit cognitivos característicos). La corteza cerebral sufre la acumulación extracelular progresiva y predecible del péptido patológico β-amiloide en forma de placas seniles. El sistema olfativo es uno de los más profusamente afectados y especialmente el núcleo olfativo anterior. En este estudio se pretende analizar la pérdida neuronal total y la afectación diferencial de interneuronas en el núcleo olfativo anterior de pacientes diagnosticados con la EA. Para ello se utilizará material neurológico humano procedente de enfermos de Alzheimer y de individuos control, proporcionado los bancos de cerebros biobanc HCB-IDIBAPS (Barcelona), Biobanc-Mur (Murcia) y btcien (Madrid). Se realizarán técnicas de inmunohistoquímica/inmunofluorescencia en secciones de 50 µm seriadas. Posteriormente se tomarán fotografías mediante microscopía confocal y de epifluorescencia y se realizará un recuento estereológico de los marcadores utilizados. Los resultados en torno a la afectación del núcleo olfativo anterior pueden ser objeto de publicación. 12. Identificación del dominio transmembrana de la polimerasa del virus de la hepatitis E (VHE). Tutor/es: Pilar Clemente Casares (Pilar.CCasares@uclm.es) y Antonio Mas López (Antonio.Mas@uclm.es) Laboratorio: Virología Molecular, CRIB (Edificio del CRIB-IDINE) Resumen: El objetivo de este proyecto es identificar en qué punto de la secuencia de la polimerasa del VHE se encuentra el dominio transmembrana que la ancla al retículo endoplasmático. Para ello se obtendrán mutantes de deleción de la polimerasa y se clonarán en vectores que permitan la sobre-expresión de dichas proteínas en bacterias. Se optimizará el protocolo de purificación de estas proteínas mediante técnicas cromatográficas y se estudiarán las posibles diferencias existentes en los patrones de purificación. Estos mismos mutantes se fusionarán mediante técnicas de biología molecular a una proteína fluorescente y se clonarán en vectores de expresión en eucariotas. Las nuevas construcciones se transfectarán en células eucariotas y se estudiará su distribución celular y su asociación con el retículo endoplasmático mediante microscopía confocal. 13. Análisis funcional de variantes del gen candidato de glaucoma GPATCH3. Tutor/es: Julio Escribano Martinez (Julio.Escribano@uclm.es) Laboratorio: Genética Molecular Humana, IDINE (Edificio F. Medicina de Albacete) Resumen: Las técnicas de secuenciación masiva de ADN genómico permiten la identificación de genes candidato con mutaciones en homocigosis o heterocigosis compuesta en pacientes con patologías de herencia recesiva como el glaucoma congénito primario. Frecuentemente, los genes candidatos obtenidos con esta metodología están poco caracterizados y su función biológica es desconocida, lo que dificulta la determinación de las posibles alteraciones funcionales derivadas de las mutaciones presentes en los pacientes. En este contexto, la utilización del pez cebra como modelo funcional resulta de utilidad para la Pág. 7 de 10
determinación de la función génica y la compresión de los defectos funcionales causados por las variantes génicas. El alumno participará en: i) el análisis funcional del gen GPATCH3 en embriones de pez cebra; y ii) la caracterización de las versiones mutantes en cultivos celulares. 14. Caracterización funcional del gen candidato de glaucoma LRP2 en embriones de pez cebra. Tutor/es: José Daniel Aroca Aguilar (JoseDaniel.Aroca@uclm.es) Laboratorio: Genética Molecular Humana, IDINE (Edificio F. Medicina de Albacete) Resumen: Nuestro grupo ha identificado la presencia de variantes en el gen LRP2 en pacientes de glaucoma congénito mediante secuenciación masiva del exoma. Aunque la función de este gen es desconocida se ha descrito la aparición de fenotipos similares a glaucoma en peces cebra (Danio rerio) con mutaciones en uno de sus ortólogos (lrp2a). El pez cebra es un modelo animal ampliamente utilizado en la caracterización funcional de genes mediante el análisis del patrón de expresión y la inhibición selectiva de expresión génica mediante morfolinos. El alumno participará en el análisis funcional del gen LRP2 en larvas de pez cebra mediante: i) el análisis de su expresión utilizando técnicas inmunohistoquímicas e hibridación in-situ fluorescente; y ii) la determinación del fenotipo resultante de la inhibición de la expresión de sus ortólogos (lrp2a y lrp2b). 15. Inactivación de GSK3β por p38 MAPK: implicaciones para la neurogénesis y neurodegeneración. Tutor/es: Pedro Tranque Gómez (Pedro.Tranque@uclm.es) y Miriam Fernández Fernández (Miriam.Fernandez@uclm.es) Laboratorio: Neuroglía, IDINE (Edificio F. Medicina de Albacete) Resumen: En el sistema nervioso, la proteína glucógeno sintasa quinasa 3 (GSK3) ejerce funciones clave para el control de la supervivencia celular, la neurogénesis y la neuroinflamación. La inactivación por fosforilación de Ser9 es un mecanismo de regulación de GSK3α y -β extensamente estudiado por su relevancia en neurodegeneración. Por el contrario, la nueva vía de inhibición por fosforilación de Ser389 es específica de GSK3β, inducida por p38 MAPK, y aún no ha sido caracterizada en el sistema nervioso. Desde el grupo de Neuroglía del IDINE estamos interesados en mapear la distribución regional de fosfo-ser389 GSK3β y su localización subcelular en distintas áreas del cerebro y médula espinal, incluyendo los nichos neurogénicos del hipocampo y zona subventricular. En estos experimentos analizaremos la posible correspondencia entre la localización nuclear de fosfo-ser389 GSK3β y su inductor p38 MAPK. Desde el punto de vista técnico, el trabajo a realizar requiere el manejo de animales de experimentación, la realización de cultivos celulares y la aplicación de técnicas de imagen y bioquímicas. La disponibilidad de un anticuerpo específico de pser389-gsk3β hará posible la localización de esta forma fosforilada de GSK3 tanto mediante inmunofluorescencia de cerebro como mediante Western blot de muestras de áreas cerebrales específicas. CANDIDATO Ofrecemos tutelar el aprendizaje de las distintas facetas del trabajo de laboratorio: adquisición de técnicas, uso de herramientas informáticas, planificación y gestión de experimentos, y comunicación de resultados. Valoramos el expediente académico, la motivación, la capacidad de trabajo en equipo, el conocimiento de inglés y el uso de herramientas informáticas. Pág. 8 de 10
16. Factores endocrinos que regulan la actividad rítmica del hipocampo. Tutor/es: Eduardo Martín Montiel (Eduardo.Martin@uclm.es) y Pedro Tranque Gómez (Pedro.Tranque@uclm.es) Laboratorio: Neurofisiología y Plasticidad Sináptica, IDINE (Edificio del CRIB-IDINE) Resumen: El sistema nervioso central posee una actividad rítmica que tiene un papel fundamental en el procesamiento y almacenamiento de la información. La participación del sistema endocrino en la regulación de estos ritmos a nivel de estructuras como el hipocampo no está completamente estudiada. EL objetivo del presente trabajo es investigar el papel del 17 β estradiol en la regulación de la actividad rítmica del hipocampo durante la fase de adquisición y consolidación de la memoria. Para llevar a cabo este objetivo se emplearán técnicas electrofisiológicas y de comportamiento, empleando herramientas informáticas para el procesamiento de los datos. Técnicamente, se llevarán a cabo implante crónicos de electrodos en el hipocampo para realizar registros de los potenciales de campo en animales despiertos. El animal será entrenado para cumplir una tarea y estudiar las modificaciones de la actividad rítmica del hipocampo en diferentes condiciones experimentales. CANDIDATO Se supervisará cada etapa del trabajo en las que el candidato adquirirá experiencia en técnicas quirúrgicas, anestesia, empleo de un dispositivo estereotáxico, uso de sistemas de registros electrofisiológicos, adquisición y procesamiento de los datos con distintas herramientas informáticas, diseño de experimentos difusión de los resultados Pág. 9 de 10
Criterios de evaluación Los estudiantes serán evaluados atendiendo a: - Valoración del tutor (25%) - Valoración de la memoria, de la exposición y de la defensa oral (75%) Extensión y estructura para la presentación de los trabajos Para la presentación por escrito de los trabajos de tipo experimental se recomienda utilizar el formato de los trabajos científicos, con los apartados que se detallan a continuación. En el caso de los trabajos de tipo bibliográfico se adaptará a sus características. - Título - Autor - Resumen - Introducción: Estado de la cuestión Objetivos Hipótesis - Material y métodos - Resultados - Discusión - Conclusiones - Bibliografía La extensión de las memorias será entre 15 y 30 páginas. Si se incluye un paper, debe acompañarse de resumen en español de todas sus partes. En estos casos, se debe mencionar explícitamente la contribución del estudiante al trabajo. El tiempo de exposición de la defensa del Trabajo será de un máximo de 15 min. El tiempo de debate se establecerá por el Tribunal. Pág. 10 de 10