TITULACION DE DOSIS DEL EXTRACTO DE PITUITARIA OVINA OVAGEN PARA LAS SUPERESTIMULACION DE VACAS DONANTES DE EMBRIONES G. Brogliatti 1, A. Albrech 1, L. Cutaia 234 1 EOLIA, 2 Syntex SA, 3 Universidad Católica de Córdoba, 4 Instituto de Reproducción Animal Córdoba (IRAC). INTRODUCCIÓN Reproducir los animales de mayor valor comercial ha llevado a desarrollar distintas biotecnologías que permitan obtener la mayor cantidad de descendientes en el menor tiempo posible. Para lograr esto se pueden utilizar técnicas como la transferencia de embriones. El éxito de un programa de transferencia de embriones se mide por el número de terneros que nacen vivos por hembra donante en un determinado lapso de tiempo. Esto está influenciado por los factores relacionados con el número de ovulaciones, la fertilización y la viabilidad de los embriones (Armstrong, 1993). Sin embargo, uno de los costos mayores de la transferencia de embriones es la variabilidad de la respuesta a los tratamientos superovulatorios. Sobre todo considerando que un 25-30 % de las vacas no producen ningún embrión de buena calidad (Looney et al., 1984; Armstrong, 1993). Se ha demostrado que el tipo y pureza de la gonadotropina utilizada es una de las características que afectan el tratamiento superovulatorio (Elsden et al., 1978; García et al., 1982; Monniaux et al., 1983; Murphy et al., 1984; Pawlyshyn et al., 1986; Boland et al., 1991; Bó et al., 1994) OBJETIVOS GENERALES Determinar la dosis optima del extracto de pituitaria Ovagen (ICP Bio, Nueva Zelandia) para inducir la superestimulación de vacas donantes de embriones de razas británicas y cruza Cebú. HIPÓTESIS GENERAL Es posible producir una respuesta superovulatoria con dosis reducidas de Ovagen MATERIALES Y MÉTODOS Experimento 1 Se utilizaron 30 donantes de embriones (Aberdeen Angus y Hereford), multíparas, ciclando y con una condición corporal entre 3.5 y 4.5 (Escala 1 al 5). Las vacas fueron divididas en 3 grupos de tratamiento. Todas las donantes fueron tratadas el Día 0 con un
dispositivo intravaginal (1 g de Progesterona, Syntex, Argentina), junto con 2 mg de EB (Benzoato de Estradiol, Syntex, Argentina) y 50 mg de progesterona (Laboratorio Río de Janeiro, Argentina). El Día 4 se inició el tratamiento superestimulatorio y las vacas fueron divididas al azar en 3 Grupos de tratamiento; las vacas del Grupo Completa (GDC) recibirán una aplicación total de 17,6 mg NIADDK-oFSH-Z (20 ml) de Ovagen en dosis decreciente (Tabla 1). Las vacas del Grupo ¾ (G3/4D) recibieron una dosis total de 13,2 mg NIADDK-oFSH-Z (15 ml) de Ovagen y las vacas del Grupo ½ dosis recibieron una dosis total del 8,8 mg NIADDK-oFSH-Z (10 ml) de Ovagen (G1/2D). Todas las vacas recibieron 2 inyecciones 150 µg de D+ cloprostenol (Ciclase, Syntex) en el Día 6 (AM y PM). Los fueron retirados en el Día 7 por la mañana. El Día 8 AM, las vacas recibieron 0.05 mg de Lecirelina (Gonasyn, Syntex) por vía intramuscular. Se realizó la inseminación artificial (IA) en el Día 8 PM y el Día 9 AM (60 y 72 h de la primera dosis de ) con semen congelado de probada calidad. El Día 15 se colectaron los embriones por método no quirúrgico y fueron evaluados por estadio de desarrollo y calidad. La respuesta superovulatoria fue evaluada como cantidad de total de ova-embriones colectados, ovocitos fertilizados y embriones Calidad 1, 2 y 3, según los parámetros establecidos por la IETS (Wright, JM., 2000). Ultrasonografía En cada réplica se realizaró ultrasonografía transrectal. Las donantes fueron examinadas el Día 0 del tratamiento para determinar ciclicidad y el Día 8 del tratamiento para determinar desarrollo folicular, contabilizando, identificando y diagramando todos los folículos menores a 6 mm, de 6 a 8 mm y folículos mayores a 10 mm. La técnica de seguimiento a utilizar fue la descripta en los trabajos de Bó et al., 1994. Tabla 1.- Grupos de Tratamiento. Grupo Completa (GDC Grupo ¾ (G¾D; n=20) Grupo ½ (G½D; n=20) n=20) Día 0 AM Día 4 AM 4 ml Ovagen 3 ml Ovagen 2 ml Ovagen Día 4 PM 4 ml Ovagen 3 ml Ovagen 2 ml Ovagen Día 5 AM 3 ml Ovagen 2,5 ml Ovagen 1,5 ml Ovagen Día 5 PM 3 ml Ovagen 2,5 ml Ovagen 1,5 ml Ovagen Día 6 AM 2 ml Ovagen + 1,5 ml Ovagen + 1 ml Ovagen + Día 6 PM 2 ml Ovagen + 1,5 ml Ovagen + 1 ml Ovagen + Día 7 AM 1 ml Ovagen + x 0,5 ml Ovagen + x 0,5 ml Ovagen + x Día 7 PM 1 ml Ovagen 0,5 ml Ovagen 0,5 ml Ovagen Día 8 AM 2 ml Gonasyn 2 ml Gonasyn 2 ml Gonasyn
Día 8 PM IA IA IA Día 9 AM IA IA IA Día 15 Colección Colección Colección Experimento 2 Se utilizaron 16 donantes de embriones (Brangus y Braford), ciclando y con una condición corporal entre 3.5 y 4.5 (Escala 1 al 5). Todas las donantes fueron tratadas el Día 0 con un dispositivo intravaginal, junto con 2 mg de EB y 50 mg de progesterona. El Día 4 se inició el tratamiento superovulatorio y las vacas fueron divididas en 3 Grupos de tratamiento. Las vacas del Grupo ¾ (G3/4D) recibieron una dosis total de 13,2 mg NIADDK-oFSH-Z (15 ml) y las vacas del Grupo ½ dosis recibieron una dosis total del 8,8 mg NIADDK-oFSH-Z (10 ml) (G1/2D) y las vacas del Grupo ¼ (G¼D) recibieron 4,4 mg NIADDK-oFSH-Z (5 ml). Todas las vacas recibieron 2 inyecciones 150 µg de D+ cloprostenol (Ciclase, Syntex) en el Día 6 (AM y PM). Los fueron retirados en el Día 7 por la mañana. El Día 8 AM, las vacas recibieron Gonasyn por vía intramuscular. Se realizó inseminación artificial en el Día 8 PM y el Día 9 AM (60 y 72 h de la primera dosis de ) con semen congelado de probada calidad. El Día 15 se colectaron los embriones por método no quirúrgico y fueron evaluados según las normas de la IETS por estadio de desarrollo y calidad. La Evaluación de la respuesta superovulatoria, los exámenes ultrasonográficos y los análisis estadísticos fueron realizados como en el experimento 1. Tabla 1.- Grupos de Tratamiento. Grupo ¾ (n=20) Grupo1/2 (n=20) Grupo 1/4 (n=20) Día 0 AM Día 4 AM 3 ml Ovagen 2 ml Ovagen 1 ml Ovagen Día 4 PM 3 ml Ovagen 2 ml Ovagen 1 ml Ovagen Día 5 AM 2,5 ml Ovagen 1,5 ml Ovagen 0,75 ml Ovagen Día 5 PM 2,5 ml Ovagen 1,5 ml Ovagen 0,75 ml Ovagen Día 6 AM 1,5 ml Ovagen + 1 ml Ovagen + 0,5 ml Ovagen + Día 6 PM 1,5 ml Ovagen + 1 ml Ovagen + 0,5 ml Ovagen + Día 7 AM 0,5 ml Ovagen + x 0,5 ml Ovagen + x 0,25 ml Ovagen + x Día 7 PM 0,5 ml Ovagen 0,5 ml Ovagen 0,25 ml Ovagen Día 8 AM Gonasyn Gonasyn Gonasyn Día 8 PM IA IA IA Día 9 AM IA IA IA Día 15 Colección Colección Colección
RESULTADOS Experimento 1 No se encontraron diferencias significativas entre las cantidades de embriones trasferibles en los tres grupos de tratamientos. Sin embargo se observa una diferencia numérica en favor de la respuesta obtenida en los grupos Completa y ¾. Completa 3/4 1/2 n = 13 n = 13 n = 7 Infertilizados 3,0 ± 1,04 3,3 ± 0,98 1,0 ± 0,4 Degenerados 2,5 ± 0,67 2,1 ± 0,7 0,6 ± 0,6 Transferibles 4,1 ± 1,47 4,5 ± 1,3 0,7 ± 0,5 P=0,19 Experimento 2 No se encontraron diferencias significativas entre las cantidades de embriones trasferibles en los tres grupos de tratamientos. Sin embargo se observa una diferencia numérica en favor de la respuesta obtenida en el grupo ½. CONCLUSIONES 3/4 1/2 1/4 n = 8 n = 5 n = 3 Infertilizados 4,0 ± 2,0 1,6 ± 0,7 0,0 ± 0,0 Degenerados 2,5 ± 0,9 4,0 ± 0,5 0,7 ± 0,7 Transferibles 2,3 ± 0,9 4,0 ± 1,1 0,7 ± 0,7 P=0,5 Concluimos que la dosis recomendada para el tratamiento superovulatrio en vacas británicas en de Completa y/o ¾. Estos datos son consistentes con los obtenidos por IMMUNO-CHEMICAL PRODUCTS Ltd., Auckland, Nueva Zelanda.
Si bien tampoco se encontraron diferencias significativas en la respuesta superovulatorio en el Experimento 2 (Vacas Cruza Cebú), se encontró una diferencia numérica a favor del grupo ½ respecto a los otros dos grupos de tratamiento. Esto es consecuente con lo observado por Baruselli et al (Comunicación personal), en un experimento en donde se valuaron diferentes dosis de Ovagen en vacas Nelore. La cantidad de embriones trasferibles logrados en los grupos Completa y ¾ en vacas Británicas y ½ en vacas Cruza Cebú se encuentra dentro de la media de 4 embriones. REFERENCIAS Armstrong DT. Recent advances in superovulation of cattle. Theriogenology 1993; 39:7-24. Bo GA, Hockley DK, Nasser LF, Mapletoft RJ. Superovulatory response to a single subcutaneous injection of a porcine pituitary extract in beef cattle. Theriogenology 1994; 42: 963-975. Boland M, Goulding D, Roche JF. Alternative gonadotropins for superovulation in cattle. Theriogenology 1991; 35:5-18. Bungarts L, Niemann H. Assessment of the presence of a dominant follicle and selection of dairy cows suitable for superovulation by a single ultrasound examination. J Reprod Fertil 1994; 101:583-591. Elsden RP, Nelson LD, Seidel GE Jr. Superovulation of cows with follicle stimulating hormone and pregnant mare's serum gonadotrophin. Theriogenology 1978; 9:17-26. Looney CR, Oden AJ, Massey JM, Johnson CA, Godke RA. Pregnancy rates following hcg administration at the time of transfer in embryo-recipient cattle. Theriogenology 1984; 21:246. Mapletoft RJ, Bo GA, Pierson RA. Recruitment of follicles for superovulation. Comp Cont Ed 1994; 16:127-141. Monniaux D, Chupin D, Saumande J. Superovulatory responses of cattle. Theriogenology 1983; 19:55-81. Murphy BD, Mapletoft RJ, Manns J, Humphrey WD. Variability in gonadotrophin preparations as a factor in the superovulatory response. Theriogenology 1984; 21:117-125. Pawlyshyn V, Lindsell CE, Braithwaite M, Mapletoft RJ. Superovulation of beef cows with FSH-P: A dose-response trial. Theriogenology 1986; 25:179.
Gabriel A. Bó Director Instituto de Reproducción Animal Córdoba (IRAC) J.L. de Cabrera 106 X5000GVD, Córdoba, Argentina Docente Cátedra de Reproducción Animal Universidad Católica de Córdoba TE/FAX: 54 (0) 351 4710669/0559/5418 Cell: 54 9 351 6 512 393 www.iracbiogen.com.ar