VARIABILIDAD EN EL NUMERO DE OVULACIONES Y EMBRIONES OBTENIDOS EN CABRAS MURCIANO-GRANADINAS SUPEROVULADAS CON FSH OVINA GONZÁLEZ-BULNES 1, A.; SANTIAGO 1, J.; CARRIZOSA 2, J.A.; URRUTIA 2, B.; GARCÍA GARCÍA 1, R.M.; DÍAZ 2, C.; COCERO 1, M.J. y LÓPEZ SEBASTIÁN 1, A. 1 Departamento de Reproducción Animal y Conservación de Recursos Zoogenéticos. SGIT-INIA. Avda. Puerta de Hierro s/n. 28040-Madrid 2 CIDA. Consejería de Medio Ambiente, Agricultura y Agua. 30150-La Alberca (Murcia) RESUMEN El presente trabajo muestra los resultados obtenidos en siete superovulaciones con posterior recogida de embriones, en un total de 136 cabras Murciano-Granadinas. El tratamiento consistió en ocho dosis de 1,25ml de Ovagen administradas cada 12 horas desde 60 horas antes de la retirada de una esponja intravaginal con 45mg de FGA, mantenida durante 16 días para sincronizar el celo junto con una dosis de 100?g de cloprostenol coincidiendo con la primera inyección de FSH. La cubrición se realizó por monta natural entre 24 y 48 horas después de la retirada del progestágeno. La respuesta media al tratamiento de superovulación fue de 14,4?0,5 cuerpos lúteos (CL) y 11,6?0,6 embriones (ET), lo que supone una tasa de recuperación (ET/CL) del 80,5?2,2%. Un total de 7,3?0,5 embriones fueron calificados como viables (EV), por lo que la tasa de viabilidad (EV/ET) fue del 64,2?2,7%. Existieron diferencias significativas entre experiencias tanto en el número de CL (P<0,01), ET (p<0,05) y EV (P<0,005) como en la tasa de viabilidad (P<0,05). Estos resultados muestran que los rendimientos superovulatorios de la raza Murciano-Granadina son válidos para la aplicación de la técnica, pero presentan una alta variabilidad individual, independiente de la raza, el preparado hormonal y el protocolo utilizado. Palabras clave: cabras, embriones, superovulación, FSH. INTRODUCCIÓN La administración de protocolos de superovulación para la obtención y posterior transferencia de embriones constituye el método idóneo para la difusión de la descendencia de hembras selectas de la especie caprina, al igual que en otras especies de mamíferos. Estos protocolos consisten, esencialmente, en la administración de varias dosis de FSH para aumentar el desarrollo folicular y, con ello, el número de folículos preovulatorios, ovulaciones y embriones. Sin embargo, la eficacia de estas técnicas se encuentra muy limitada por una alta variabilidad en los resultados obtenidos tanto entre lotes de tratamiento como entre animales del mismo lote. Los estudios realizados por diferentes autores y revisados por Cognie (1999) muestran que dicha variabilidad estaría determinada tanto por factores dependientes del protocolo de superovulación -tipo y pureza del preparado hormonal o su protocolo de administración-, por factores dependientes del animal -raza, edad, nutrición, estados de anestro o
status ovárico- como por la interacción entre ellos. En los últimos años, el uso de preparados hormonales con FSH altamente purificada (Ovagen TM ) y la adecuación de los protocolos y el manejo de los animales ha mejorado notablemente los resultados obtenidos, pero aún persiste una alta variabilidad. Por ello, el objetivo del presente trabajo fue evaluar los rendimientos obtenidos con la aplicación de técnicas de superovulación y recogida de embriones, en cuanto número de ovulaciones, embriones totales y viables, en el caso de la raza Murciano-Granadina y valorar la posible variabilidad entre replicados en que se utilizó el mismo tipo de hormona (Ovagen TM ) y el mismo protocolo de administración. MATERIAL Y MÉTODOS El presente trabajo muestra los resultados obtenidos en siete superovulaciones con posterior recogida de embriones, en un total de 136 cabras Murciano-Granadinas pertenecientes al rebaño experimental del CIDA en Guadalupe (Murcia). El celo fue sincronizado en todos los animales mediante la utilización de esponjas intravaginales con 45 mg de acetato de fluorogestona (Chronogest, Intervet Int.) mantenidas durante 16 días. Además, se administró una dosis intramuscular de 100? g de cloprostenol (Estrumate, Mallinckrodt Vet) coincidiendo con la primera inyección de FSH. La superovulación se realizó con ocho dosis de 1,25 ml de FSH ovina (OVAGEN TM, ICP, Auckland, NZ), distribuidas en dos inyecciones diarias que comenzaron en el día 14, 60 horas antes de la retirada del progestágeno. La octava dosis de FSH se administró sólo a aquellos animales que no presentaron celo al realizar monta controlada a las 24 horas de la retirada de la esponja. Esta cubrición controlada se repitió a las 36 y 48 horas de la retirada del progestágeno. Cada hembra recibió un mínimo de dos saltos, el primero en el momento de la aparición del celo y el segundo 12 horas después. La valoración de la respuesta superovulatoria se realizó en el día 8 tras la retirada del progestágeno, mediante determinación del número de cuerpos lúteos por laparoscopía y mediante la evaluación de los embriones obtenidos por lavado quirúrgico del aparato genital. Puesto que las superovulaciones se realizaron dentro de un programa de obtención y conservación de embriones, se consideraron como viables los embriones de grado 1 y 2 en la clasificación de Butler y Biggers (1989). El análisis estadístico estudió la respuesta superovulatoria obtenida y las posibles variaciones entre lotes y épocas del año mediante análisis de varianza (ANOVA).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN La respuesta media al tratamiento de superovulación fue de 14,4?0,5 cuerpos lúteos (CL) y 11,6?0,6 embriones (ET), lo que supone una tasa de recuperación (ET/CL) del 80,5?2,2%. Un total de 7,3?0,5 embriones fueron calificados como viables (EV), por lo que la tasa de viabilidad (EV/ET) fue del 64,2?2,7%. En la Tabla I se observa la existencia de diferencias significativas entre lotes de tratamiento tanto en el número de CL (P<0,01), ET (p<0,05) y EV (P<0,005), como en la tasa de viabilidad (P<0,05). Tabla I. Rendimientos superovulatorios en cabras de raza Murciano-Granadina en diferentes lotes de tratamiento. Lote Cuerpos lúteos Totales recuperación viables viabilidad 1 16,8?1,1 14,4?1,2 83,1?5,2 9,5?1,1 69,5?5,5 2 15,0?1,1 13,7?1,4 88,9?5,5 10,1?1,3 70,5?4,1 3 15,1?1,5 13,7?1,4 88,9?5,5 10,1?1,3 70,5?4,1 4 11,0?1,3 9,3?1,2 85,1?4,5 6,5?1,1 67,9?6,6 5 12,6?1,4 10,2?1,6 77,2?6,2 5,9?1,3 64,4?8,6 6 10,6?1,6 6,7?1,1 67,7?7,3 2,5?0,9 32,5?11,1 7 15,7?1,5 9,8?1,4 67,7?7,5 4,8?1,1 48,4?8,9 Significación P<0,01 P<0,05 P=0,183 P<0,005 P<0,05 Estas variaciones entre lotes pueden deberse en parte a efectos determinados por la época del año en que se realizaron, ya que se observaron diferencias significativas determinadas por el mes del año (Tabla II), tanto en el número de embriones totales obtenidos (P<0,05) como en el número de embriones viables (P<0.005) y en la tasa de viabilidad (P<0,01).
Tabla II. Rendimientos superovulatorios en cabras de raza Murciano-Granadina en diferentes meses del año. Mes Cuerpos lúteos Totales recuperación viables viabilidad Abril 12,6?1,4 10,2?1,6 77,2?6,2 5,9?1,3 64,4?8,6 Mayo 10,6?1,6 6,7?1,1 67,7?7,3 2,5?0,9 32,5?11,1 Junio 14,5?0,7 11,5?0,7 80,3?2,7 7,1?0,6 62,6?3,3 Diciembre 15,0?1,1 13,7?1,4 88,9?5,5 10,1?1,3 70,5?4,1 Significación P=0,123 P<0,05 P=0,106 P<0,005 P<0,01 Las mayores diferencias se observaron entre los meses de mayo y diciembre, que se corresponderían con las épocas de anestro estacional profundo y estación reproductiva, respectivamente (Falagan et al., 1993). Esto confirma estudios anteriores que señalan que las técnicas de superovulación y recogida de embriones en caprino pueden verse afectadas por la época del año (Cocero et al., 1995). Sin embargo, persiste la variabilidad entre lotes realizados en el mismo mes, lo que señalaría la existencia de efectos individuales dependientes del animal. CONCLUSIONES Estos resultados muestran que los rendimientos superovulatorios de la raza Murciano- Granadina son válidos para la aplicación de la técnica, pero presentan una alta variabilidad estacional y una alta variabilidad individual, independiente de la raza, el preparado hormonal y el protocolo utilizado. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS BUTLER, J.F.; BIGGERS, J.D. 1989. Assesing the viability of preimplantational embryos in vitro. Theriogenology, 31, 115-126. COCERO MJ, LÓPEZ SEBASTIÁN A, GARCÍA LÓPEZ M, ORMAZABAL JJ, SANTIAGO MORENO J, GONZÁLEZ DE BULNES A, REUS E. 1995. Resultados preliminares obtenidos en la aplicación de un programa de transferencia de embriones frescos y
congelados en cabras Cachemira. Información Técnica Económico Agraria, Vol. Extra 16, 451-453. COGNIE Y. State of the art in sheep-goat embryo transfer. Theriogenology, 51, 105-116. FALAGÁN A, URRUTIA B, CARRIZOSA JA LAFUENTE A 1993. Estudio preliminar sobre la reproducción fuera de estación en cabras Murciano-Granadinas. Informacion Tecnica Economico Agraria, vol. Extra 12, 451-453. VARIABILITY IN NUMBER OF OVULATIONS AND EMBRYOS OBTAINED IN MURCIANO-GRANADINA GOATS SUPEROVULATED WITH OVINE FSH SUMMARY Current work analyzes results from seven superovulatory treatments and embryo recoveries performed in a total of 136 Murciano-Granadina goats. Superovulation was induced with eight doses of 1,25ml of Ovagen every 12h from 60h before the withdrawal of a 45mg FGA intravaginal sponge inserted 16 days for oestrus synchronization plus a single dose of 100?g of cloprostenol coincidentally with the first FSH injection. Does were hand-mated between 24 and 48h after sponge removal. Ovarian response to the treatment consist of 14,4?0,5 corpora lutea (CL) and 11,6?0,6 recovered embryos (RE), so the recovery rate (RE/CL) reached 80,5?2,2%. A total of 7,3?0,5 embryos were viable (VE), so viability rate (VE/RE) reached 64,2?2,7%. There were found significant differences between experiments in number of CL (P<0,01), RE (p<0,05) and VE (P<0,005), as well as in viability rate (P<0,05). These results indicate that superovulatory yields of Murciano-Granadina breed allow the practice of the technique but there is a high individual variability, not determined by the breed, hormonal preparation or administration protocol. Key words: embryos, FSH, goats, superovulation.