INTRODUCCIÓN A LA METODOLOGÍA MOLECULAR `Derechos Reservados Pontificia Universidad Javeriana Instituto de Genética Humana Bogotá COLOMBIA

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1 INTRODUCCIÓN A LA METODOLOGÍA MOLECULAR 2002 `Derechos Reservados Pontificia Universidad Javeriana Instituto de Genética Humana Bogotá COLOMBIA

2 Equipos de Laboratorio Un equipo de laboratorio es un conjunto de instrumentos con funciones específicas, útiles para desarrollar un trabajo de diagnóstico y/o investigación. Las aplicaciones son variadas, según el campo del conocimiento en el que se involucren y el propósito que se les asigne.

3 Equipos de Laboratorio Elección: Función Instalación Mantenimiento Manual de Funcionamiento

4 Equipos de Laboratorio Purificación de agua: Desionizador Destilador Calefacción: Horno Baño María Incubadora Seguridad Biológica: Cámara de Flujo Laminar: I, II y III. Separación: Centrífugación Análisis Molecular: Termociclador Cámaras de Electroforesis Cromatografía

5 Purificación de Agua Técnicas de Purificación: Desionización (Desmineralización) Destilación

6 Purificación de Agua DESIONIZADOR o Desmineralizador Eliminación de iones inorgánicos mediante el uso de resinas absorbentes.

7 Purificación de Agua DESTILADOR Eliminación de materia orgánica no volatil.

8 Sistemas de Calefacción HORNO Sistema cerrado que produce aire caliente, seco o húmedo, a elevadas temperaturas.

9 Sistemas de Calefacción BAÑO MARÍA Baño María con Recircularización. Sistema controlado de calentamiento de agua a temperaturas constantes.

10 Sistemas de Calefacción INCUBADORA Particularmente útil para el mantenimiento de cultivos celulares bajo condiciones controladas de temperatura, humedad y niveles de gas :

11 Seguridad Biológica Existen 3 tipos de cámaras de seguridad biológica: Clase I, II y III.

12 Seguridad Biológica CÁMARA DE FLUJO LAMINAR TIPO I Cámara de manipulación abierta por delante, ventilada con corriente de aire sin recircular.

13 Seguridad Biológica CÁMARA DE FLUJO LAMINAR TIPO II Cámara abierta por delante con corriente de aire hacia adentro y salida del mismo a través de un filtro especial.

14 Seguridad Biológica CÁMARA DE FLUJO LAMINAR TIPO III Estructura completamente cerrada y ventilada, impermeable a los gases y mantenida bajo presión negativa.

15 Separación CENTRÍFUGA Fuerza centrífuga aplicada sobre las partículas en rotación, que aumenta con el el radio del campo rotacional y con la velocidad de rotación.

16 Separación en Gradiente Método que utiliza la propiedad de sedimentación de las partículas con base en su masa, para la separación de las mismas en una solución.

17 Separación en Gradiente Separación Descendente Separación Ascendente Una vez separadas las partículas (organelos) en un gradiente de densidad es importante recuperar los componentes de manera independiente.

18 Termociclador. Consiste básicamente en una plataforma metálica, la cual se somete a cambios continuos de temperatura controlados electrónicamente.

19 Electroforesis en gel de Agarosa.

20 Electroforesis en gel de Agarosa.

21 Electroforesis en gel de Agarosa.

22 Electroforesis Horizontal Gel de Agarosa coloreado con Bromuro de Etidio. Movimiento de partículas cargadas bajo la influencia de un campo eléctrico.

23 Electroforesis en gel de Poliacrilamida

24 Electroforesis Vertical Gel de Poliacrilamida coloreado con Plata.

25 Southern Blot Northern Blot Utilizado para realizar análisis de ácidos nucleicos (DNA y RNA).

26 Western Blot Prueba confirmatoria para VIH CN CP Especialmente útil para el análisis de proteínas.

27 Cromatografía Es una técnica de separación de mezclas complejas de solutos, basándose en la diferente velocidad con que se mueve cada uno de los solutos a través de un medio poroso, arrastrado por un disolvente en movimiento, en una solución.

28 Cromatografía La retención o permanencia de los componentes de la mezcla en las fases es debido a diferentes fenómenos: Adsorción : Fijación de una sustancia en la superficie de un sólido. Reparto: Distribución de un soluto entre dos fases inmiscibles entre sí. (coeficiente de reparto) Intercambio iónico: El desplazamiento de un ión desde una matriz, por otro que puede ser retenido más fuertemente.

29 Cromatografía La migración está determinada por el desplazamiento de disolventes adecuados y la separación por el hecho de que los diferentes componentes de la mezcla se mueven en el medio poroso a diferentes velocidades. Fase móvil (gas o líquido) y una fase estacionaria (sólido, líquido).

30 Cromatografía Cromatografía Líqudia: fase móvil es un líquido y la fase estacionaria puede ser líquido o sólido. Fase estacionaria: ( microesferas de sílice, alúmina, oxido de magnesio, carbón vegeta, florisil (síilica gel + magnesio) o fractales. FaseMóvil: metanol, etanol, acetona, éter, benceno. Cromatografía Gaseosa: fase móvil es un gas portador suministrado a alta presión, y la fase estacionaria puede ser un líqudio (OV-17) o sólido (sílice).

31 Cromatografía Columna Plana: El soporte es una placa plana o los intersticios de un papel Se usa un tubo cilíndrico Capa fina Papel (partición) Cromatografía en papel. Cromatografía en capa fina de aminoácidos. Cromatografía en capa fina de carbohidratos.

32 Cromatografía por Afinidad Matríz: esferas en donde se establece el enlace covalente con el ligando, el cual es el responsable de la absorción específica del analito. Cuantificación de solutos.

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