Definición. Definición (IUPAC) graphein = escribir. chroma = color INTERACCIÓN. Mikhail Tswett, 1906

Transcripción

1 Definición Definición (IUPAC) La cromatografía es un método físico de separación en el cual los componentes a separar se distribuyen entre dos fases, una que es estacionaria (fase estacionaria) mientras que la otra (la fase móvil) se mueve en una dirección determinada. INTERACCIÓN Mikhail Tswett, 1906 chroma = color graphein = escribir

2 Historia Tswett: Descubrimiento de la cromatografía 1930 Khunn y Lederer: Redescubrimiento de la cromatografía líquida 1940 Martin y Synge: Teoría de la cromatografía de partición 1952 Martin y Singe: Cromatografía de gases ª Reunión de Cromatografistas (Londres) Teoría de Van Deemter 1969 Primeros equipos comerciales Expansión de la Cromatografía de gases Expansión de la HPLC Nuevas columnas y fases de HPLC

3 Naturaleza de las dos fases: Cromatografía gas-líquido (GLC) Fase móvil: Gases inertes (N 2, H 2, He, Ar) Fase estacionaria: Polímeros orgánicos o líquidos de alto punto de ebullición adsrobidos en materiales inertes o depositados en las paredes internas de un tubo capilar Cromatografía gas-sólido (GSC) Fase móvil: Gases inertes (N 2, H 2, He, Ar) Fase estacionaria: Alúmina, sílica Cromatografía líquido-líquido (HPLC) Fase móvil: Disolventes orgánicos o acuosos con o sin modificadores Fase estacionaria: Moléculas orgánicas unidas mediante enlaces covalentes a un soporte de sílica Cromatografía líquido-sólido (columna) Fase móvil: Disolventes orgánicos o acuosos Fase estacionaria: Alúmina, sílica, florisil Cromatografía de fluidos supercríticos

4 Mecanismo de separación: Cromatografía de reparto Fase estacionaria líquida. El mecanismo de separación fundamental es el reparto o partición Cromatografía de adsorción Fase estacionaria sólida. Se basa en la distinta magnitud de las interacciones de la mezcla con la superficie activa de la fase estacionaria Cromatografía de intercambio iónico Fase estacionaria sólida. Es un sólido con capacidad para intercambiar iones con la fase móvil Cromatografía de exclusión Fase estacionaria sólida. Es un sólido reticular con tamaños de retícula del mismo orden que las moléculas de la muestra a separar. Las moléculas serán capaces de penetrar en más o menos huecos según su tamaño, forma, etc. Cromatografía de afinidad Fase estacionaria sólida. Se utiliza una interacción específica entre el analito y la fase estacionaria. Por ejemplo: inmunoafinidad.

5 Metodología de trabajo Cromatografía frontal Se introduce la muestra de forma continua en el sistema cromatográfico, constituyendo ella misma la fase móvil. Agua impurificada con deriv. halogenados Carbón activo Agua pura Cromatografía de desplazamiento La fase móvil contiene un componente más afín a la fase estacionaria que los componentes de la muestra y es capaz de desplazarlos de ella. Cromatografía de elución La muestra se introduce en un momento determinado y la fase móvil circula continuamente. Los componentes de la muestra salen de la columna como zonas, que en el caso ideal presentan una distribución gaussiana de concentración y están separadas unas de otras.

6 Metodología de trabajo

7 Parámetro a medir Cromatografía de tiempo constante Cromatografía de capa fina, cromatografía de papel... TIEMPO DE REALIZACIÓN CONSTANTE SEPARACIÓN EN EL ESPACIO

8 Parámetro a medir Cromatografía de recorrido constante GLC, HPLC, cromatografía en columna... Fase móvil Fase estacionaria Al detector Fase móvil Fase estacionaria Al detector RECORRIDO (ESPACIO) CONSTANTE SEPARACIÓN EN EL TIEMPO

9 Cromatografía de Tswett 1906 Separación de pigmentos vegetales en columna rellena con carbonato cálcico y elución con éter dietílico Cromatografía de elución Cromatografía de columna (recorrido constante) Cromatografía de líquidos (LSC) Cromatografía de adsorción

10 Cromatógrafo Esquema básico de un cromatógrafo 1 1. Fuente de fase móvil 2. Sistema de regulación y medida del caudal o presión de la fase móvil 3. Sistema de inyección de muestra 4. Columna 5. Recipiente termostatizado para controlar la temperatura de la columna 6. Sistema de detección 7. Sistema de amplificación y tratamiento de la señal eléctrica.

11 Cromatograma Cromatograma: Cromatografía de gases: Benceno, acetato de etilo, cloroformo Cromatografía de gases: Mezcla de gran número de bifenilos clorados 0.5 Se ñal (V) Tiempo (mi n)

12 Objetivo Objetivo: El objetivo de la técnica cromatográfica es la obtención de un cromatograma que permita el análisis cualitativo y cuantitativo de todos y cada uno de los analitos presentes en una muestra Para alcanzar el objetivo se necesita: Detector con suficiente sensibilidad Tiempos de retención a los que se eluyen los diferentes analitos distintos Anchura de banda del pico correspondiente a cada analito sea suficientemente pequeña para que no se produzca solapamiento.