ENUMERACIÓN DE MICROORGANISMOS EN ALIMENTOS: ENUMERACIÓN ENTEROBACTERIAS, COLIFORMES Y E. COLI

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1 Instituto de Salud Pública Ministerio de Salud DEPARTAMENTO SALUD AMBIENTAL PROGRAMA DE EVALUACIÓN EXTERNA DE CALIDAD PEEC MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS ENUMERACIÓN DE MICROORGANISMOS EN ALIMENTOS: ENUMERACIÓN ENTEROBACTERIAS, COLIFORMES Y E. COLI INFORME FINAL ENSAYO DE APTITUD PEEC MA03A-2015 V.0

2 ELABORADO POR: Coordinador (S) Ensayos de aptitud Soraya Sandoval V.0 Autorizado por: Jefe (S) Roberto Bravo Mendez Subdepartamento de Metrología y Desarrollo Tecnológico Sección Metrología Ambiental y de Alimentos Instituto de Salud Pública de Chile Avda. Marathón 1000, Ñuñoa Santiago de Chile

3 PROGRAMA DE EVALUACIÓN EXTERNA DE CALIDAD PEEC MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS ENUMERACIÓN DE MICROORGANISMOS EN ALIMENTOS: ENUMERACIÓN ENTEROBACTERIAS, COLIFORMES Y E. COLI CONTENIDO 1. LISTA DE PARTICIPANTES 4 2. RESPONSABLES 6 3. INTRODUCCIÓN 6 4. MATERIAL DE ENSAYO 6 5. CRONOGRAMA 7 6. ANÁLISIS ESTADÍSTICO 7 7. RESULTADOS INFORMADOS POR LOS PARTICIPANTES 7 8. ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE LOS RESULTADOS INFORMADOS 8 9. EVALUACIÓN DE DESEMPEÑO COMENTARIOS Y SUGERENCIAS REFERENCIAS ANEXOS 10 3 de 21

4 1. LISTA DE PARTICIPANTES 5M S.A. ALIMENTOS MULTIEXPORT S.A. AQUAGESTION ASELAB LTDA BRONOR LTDA. CECTA USACH CENTRO DE ANALISIS DE ALIMENTOS CERTIFICACIONES DEL PERÚ S.A. CERTILAB LABORATORIOS CESMEC S.A SEDE IQUIQUE CESMEC S.A SEDE CESMEC S.A. SEDE CONCEPCIÓN CORTHORN QUALITY CHILE S.A. DIANA NATURALS CHILE DICTUC FRUSUR GCL, GESTIÓN DE CALIDAD Y LABORATORIO GCL, GESTIÓN DE CALIDAD Y LABORATORIO SEDE CONCEPCIÓN INTERTEK CALEB BRETT CHILE S.A. INTERTEK CALEB BRETT CHILE S.A. SEDE TALCAHUANO LABORATORIO AMBIENTAL / SEREMI DE SALUD ARAUCANÍA LABORATORIO AMBIENTAL DE SAN FELIPE DE LA SEREMI DE SALUD REGIÓN DE VALPARAÍSO LABORATORIO AMBIENTAL DE VIÑA DEL MAR DE LA SEREMI DE SALUD REGIÓN VALPARAÍSO LABORATORIO AMBIENTAL DEL MAULE / SEREMI DE SALUD MAULE LABORATORIO AMBIENTAL LLANQUIHUE / SEREMI DE SALUD REGIÓN DE LOS LAGOS LABORATORIO AMBIENTAL ÑUBLE DELEGACIÓN PROVINCIAL ÑUBLE SEREMI DE SALUD DEL BIO BÍO LABORATORIO AQUAGROSS LABORATORIO ASEGURAMIENTO CALIDAD DE LA MEDICIÓN / LACM LABORATORIO ASISTEC, ESCUELA DE INGENIERÍA DE ALIMENTOS, PUCV LABORATORIO CENTRAL CONTROL DE CALIDAD LABORATORIO CERMAQ CHILE S.A. (EX CULTIVOS MARINOS CHILOÉ S.A.) LABORATORIO CTS DE SGS CHILE SEDE PUERTO VARAS LABORATORIO CTS DE SGS CHILE SEDE TALCAHUANO PUERTO MONTT PUERTO MONTT SAN FERNANDO ANTOFAGASTA OSORNO LIMA, PERÚ SAN CARLOS IQUIQUE CONCEPCIÓN BUIN SAN CARLOS CONCEPCIÓN IQUIQUE CONCEPCIÓN TEMUCO VALPARAÍSO VIÑA DEL MAR TALCA PUERTO MONTT CHILLÁN CHILLÁN VALDIVIA VALPARAÍSO CHILOÉ PUERTO VARAS 4 de 21

5 LABORATORIO DE ALIMENTOS-IDIC LABORATORIO DE ALIMENTOS-UNIVERSIDAD AUSTRAL DE CHILE LABORATORIO DE ENSAYO AGUAS DECIMA S.A. LABORATORIO DE INOCUIDAD DE LOS ALIMENTOS -LIA LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS Y AGUA DE LA UNIVERSIDAD DE TALCA LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA LINARES- FRUTOS DEL MAIPO LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA LUCCHETTI LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA PROLESUR LOS LAGOS LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA WSS S.A. LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA LINDEROS- FRUTOS DEL MAIPO LABORATORIO DE SALUD AMBIENTAL CONCEPCIÓN LABORATORIO DE SALUD PÚBLICA LABORATORIO DE SALUD PÚBLICA DE LA SEREMI DE SALUD MAGALLANES, PUNTA ARENAS. LABORATORIO DEL AMBIENTE BIO BÍO / SEREMI DE SALUD BIO BÍO LABORATORIO DEL AMBIENTE OSORNO/ SEREMI DE SALUD REGIÓN DE LOS LAGOS LABORATORIO DEL AMBIENTE SEREMI DE SALUD REGIÓN COQUIMBO LABORATORIO DEL AMBIENTE SEREMI SALUD REGIÓN DE LOS RÍOS LABORATORIO DEL AMBIENTE SEREMI SALUD TARAPACÁ LABORATORIO INTERNO SOPRAVAL LABORATORIO LECYCA UNIVERSIDAD DEL BIO BÍO LABORATORIO REGIONAL SAG COYHAIQUE LABORATORIO REGIONAL SAG OSORNO LABORATORIO SALUD AMBIENTAL ANTOFAGASTA LABORATORIO SANITARIO AMBIENTAL SEREMI SALUD RM LABORATORIO SEASLAB LABORATORIO SEMA LTDA. LABOTEC LTDA. LABSER PUERTO MONTT (EX-BIOVAC S.A. PUERTO MONTT) NSF INASSA S.A.C. QUALITY LAB LTDA. SECCIÓN MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS/INSTITUTO DE SALUD PÚBLICA DE CHILE TAAG GENETICS S.A. UNIDAD DE CALIDAD FACULTAD CS. QCAS Y FARMACÉUTICAS UNIVERSIDAD DE CHILE VIAMED TECHNICAL LABORATORY S.A. VALDIVIA VALDIVIA TALCA LINARES VALDIVIA IQUIQUE BUIN CONCEPCIÓN COPIAPÓ PUNTA ARENAS LOS ÁNGELES OSORNO LA SERENA VALDIVIA IQUIQUE CALERA CHILLÁN COYHAIQUE OSORNO ANTOFAGASTA MELIPILLA ANTOFAGASTA PUERTO MONTT LIMA, PERÚ CURICÓ 5 de 21

6 2. RESPONSABLES Personal responsable en la organización y desarrollo de esta ronda: Soraya Sandoval (Coordinador (S) de ensayos de aptitud PEEC). Colaboradores: Gabriel Zambrano (preparación de cajas, etiquetado, preparación y embalaje de ítems de ensayo). 3. INTRODUCCIÓN El presente informe corresponde a la evaluación de la ronda de ensayo interlaboratorio que comprendió la enumeración de Enterobacteriaceae, Coliformes y Escherichia coli, denominada MA03A-2015 y que ha sido organizada por el área coordinación de ensayos de aptitud PEEC de la Sección Metrología Ambiental y de Alimentos. 4. ÍTEM DE ENSAYO - ENVÍO El ítem de ensayo consistió en una cepa liofilizada de Escherichia coli adquirida por la Sección Metrología Ambiental y de Alimentos. El Valor asignado fue por robusta: Tabla 1: Valor asignados. Analito MAD Media Log Mediana Log MADe Enterobacteriaceae 0,0434 3,9197 3,9566 0,06436 Coliformes 0,0485 3,9286 3,9542 0,07192 Escherichia coli 0,0463 3,9172 3,9493 0,06866 Cada uno de los laboratorios participantes recibió una muestra debidamente etiquetada y sellada para la evaluación. Asimismo, se les facilitó una guía de reconstitución del ítem de ensayo y les fueron enviadas las instrucciones para manipular el material y realizar el análisis solicitado. Del mismo modo, se indicó que debían cumplir con las prácticas estándares de seguridad durante el desarrollo del ensayo. 6 de 21

7 5. CRONOGRAMA Envío de material de ensayo 03/Noviembre/2015 Fecha límite de envío de resultados 01/Diciembre/2015 Fecha efectiva envío informe parcial de ensayo de aptitud 09/Diciembre/2015 La ronda debió ser reprogramada. 6. ANÁLISIS ESTADÍSTICO Luego del cierre de la ronda, los resultados son agrupados y transformados a log10 previo al análisis estadístico. Se evaluaron los datos anómalos según el Test de Grubbs. No se evaluaron resultados informados como mayor que (>) o menor que (<). El valor asignado para la evaluación de los ensayos de enumeración es la media robusta de todos los resultados evaluables de los participantes. La desviación estándar del ensayo de aptitud se calculó utilizando la desviación absoluta de la mediana y luego multiplicada por el factor 1,483. Se realiza un análisis estadístico de los resultados cuantitativos para ayudar en la detección de tendencias y lograr la comparación utilizando un indicador de desempeño conocido como z-score. El Z-score estima el error que existe entre el resultado informado y el valor asignado de la ronda, y la desviación estándar del ensayo de aptitud. El z-score es definido por la siguiente ecuación, para esta evaluación: Dónde: Z= Valor Z-score C= Concentración reportada del analito en el material de ensayo X a = Valor asignado (el valor asignado es calculado conforme al análisis estadístico detallado en punto 8 de este documento) σp t = Desviación estándar del ensayo de aptitud. Los criterios de aceptabilidad son clasificados de la siguiente manera: [ Z ] 2: entre -2, 00 y +2,00 el resultado del laboratorio es Satisfactorio. 2<[ Z ]<3: entre -2,01 y < -2,99 y; +2,01 y < +2,99 el resultado del laboratorio es Cuestionable. [ Z ] >3: el resultado del laboratorio es No Satisfactorio. El laboratorio participante deberá ubicarse en las tablas y gráficos de acuerdo al Código Identificación de Laboratorio (CIL) asignado a su laboratorio. 7 de 21

8 7. RESULTADOS INFORMADOS POR LOS PARTICIPANTES Datos De los 67 participantes adscritos, 60 laboratorios (correspondiente al 89,55%) enviaron resultados a través del portal PEEC. Los resultados enviados por los participantes se presentan en la tabla Nº 5, 6 y 7 (Ver anexos) Métodos y Técnicas Respecto de los Métodos de referencia reportados, esta información se presenta en el Gráfico N 7, 8 y 9. (Ver Anexos) 8. ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE LOS RESULTADOS INFORMADOS Para el cálculo del valor asignado se determinó un valor de consenso para cada patógeno, que correspondió a la media robusta de los resultados evaluables, previa transformación logarítmica. Se examinó la presencia de datos anómalos, donde se obtuvo los siguientes resultados: Tabla 2: Resumen análisis estadístico muestra Parámetros Enterobacteriaceae Ufc /ml Coliformes Ufc/mL E. coli Ufc/mL Número de participantes Valor del Certificado de análisis Valor asignado (valor de consenso) Valor asignado (log10) 3,96 3,95 3,95 σpt 0,064 0,072 0,069 Datos anómalos EVALUACIÓN DE DESEMPEÑO Se realizaron gráficas circulares para expresar los resultados satisfactorios obtenidos gráficas 1, 2 y 3. Ver anexos. Los resultados reportados por los participantes y su evaluación se encuentran en Anexos, tabla Nº 3, 4 y 5. La gráfica de distribución de z-score para Enterobacteriaceae, Coliformes y Escherichia coli se aprecia en los gráficos 4,5 y 6. Ver anexos. La gráfica de dispersión de resultados para Enterobacteriaceae, Coliformes y Escherichia coli se aprecia en los gráficos 10,11 y 12. Ver anexos. 8 de 21

9 10. COMENTARIOS Y SUGERENCIAS a) 60 de los 67 laboratorios adscritos enviaron resultados, correspondiendo al 89,6%. b) Se obtuvo El 85,7% de resultados Satisfactorios, y 10,7% de resultados Insatisfactorios para el análisis de Enterobacteriaceae. c) Se obtuvo El 78,6% de resultados Satisfactorios, y 19,6% de resultados Insatisfactorios para el análisis de Coliformes. d) Se obtuvo El 81,4% de resultados Satisfactorios, y 16,9% de resultados Insatisfactorios para el análisis de E. coli. e) Se pudo observar que el método más utilizado por los participantes para el análisis de Enterobacteriaceae es NCh 2676:2002. f) Se pudo observar que el método más utilizado por los participantes para el análisis de Coliformes es AOAC g) Se pudo observar que el método más utilizado por los participantes para el análisis de E. Coli es AOAC h) Sugerimos a los laboratorios que cuenten con un Z-Score dentro del rango cercano a sobrepasar el límite de resultado satisfactorio, cuestionable y superior a 3,00, evaluar las posibles causas de desviación de resultados a fin de realizar las acciones pertinentes. i) La versión final de este informe está publicado en página Web institucional: REFERENCIAS 1. ISO 13528:2005 (E). Statistical methods for use in proficiency testing by interlaboratory comparisons. 2. NCh-ISO , Evaluación de la conformidad requisitos generales para los ensayos de aptitud. 3. NCh-ISO Microbiología de los alimentos para consumo humano y animal Requisitos específicos y directrices para los ensayos de aptitud por comparaciones interlaboratorios. 4. Robust Statistics: a Method of Coping with Outliers. Royal Society of Chemistry, Analytical Methods Committee, Nº 6, A. 5. Thompson, M., Ellison, S.L.R and Wood, R The International Harmonized Protocol for Proficiency 6. Testing of Analytical Chemistry Laboratories (IUPAC Technical Report).Pure Appl. Chem. 78, pp de 21

10 12. ANEXOS Tabla Nº 3. Resultados reportados para Enumeración de Enterobacteriaceae. Laboratorio Res. Enum. UFC/mL Res. (Log 10) Ref. del Método Z-Score Evaluación QAMA , NCh 2676:2002-1,27 S QAMA , NCh 2676:2002 0,26 S QAMA , BAM online Chap. 4-15,73 I QAMA , NCh 2676:2002 0,18 S QAMA , NCh 2676:2002 1,32 S QAMA , NCh 2676:2002-0,5 S QAMA , AOAC ,47 S QAMA , NCh 2676:2002 0,11 S QAMA , ISO :2004 0,47 S QAMA , AOAC ,75 S QAMA , NCh 2676:2002-0,21 S QAMA , NCh 2676:2002 0,18 S QAMA ,90309 AOAC ,83 S QAMA , NCh 2676:2002-0,5 S QAMA , NCh 2676:2002-0,75 S QAMA , NCh 2676:2002-1,27 S QAMA NCh 2676:2002 0,67 S QAMA , ISO :2004-0,67 S QAMA NCh 2676:2002 0,67 S QAMA ,70757 AOAC ,87 I QAMA , NCh 2676:2002-1,19 S QAMA , ISO :2004-0,19 S QAMA , AOAC S QAMA , ISO :2004-5,34 I QAMA , NCh 2676:2002-0,5 S QAMA , ISO :2004 1,47 S QAMA , AOAC ,14 I QAMA , NCh 2676:2002 0,4 S QAMA , AOAC ,11 S 10 de 21

11 QAMA , AOAC ,93 S QAMA , ISO :2004 0,04 S QAMA , ICMSF 2da. Ed 1983 vol. 1-0,75 S QAMA , NCh 2676:2002-0,04 S QAMA , AOAC ,53 I QAMA , NCh 2676:2002-0,19 S QAMA , AOAC ,32 S QAMA , AOAC ,19 S QAMA , NCh 2676:2002 1,44 S QAMA , NCh 2676:2002 0,4 S QAMA , NCh 2676:2002-0,67 S QAMA , AOAC ,9 S QAMA , AOAC ,32 S QAMA , NCh 2676:2002-0,58 S QAMA , AOAC ,9 S QAMA ,0086 AOAC ,81 S QAMA , ISO :2004 0,54 S QAMA , ISO :2004 0,5 S QAMA , ISO :2004 0,33 S QAMA , NCh 2676:2002 0,11 S QAMA , NCh 2676:2002 1,32 S QAMA , NCh 2676:2002 0,04 S QAMA , NCh 2676:2002 2,44 C QAMA , NCh 2676:2002-3,24 I QAMA , NCh 2676:2002-1,27 S QAMA ,78533 AOAC ,66 C QAMA ,94939 ISO :2004-0,11 S Evaluación E Satisfactorio S Cuestionable C No Satisfactorio I 11 de 21

12 Tabla Nº 4. Resultados reportados para Enumeración de Coliformes. Laboratorio Res. Enum. UFC/mL Res. (Log 10) Ref. del Método Z-Score Evaluación QAMA , NCh 2635/1: ,14 S QAMA , NCh 2635/2: ,2 S QAMA , BAM online Chap. 4-12,69 I QAMA , AOAC ,14 S QAMA , BAM online Chap. 4-1,43 S QAMA , AOAC ,33 S QAMA , AOAC ,56 S QAMA , BAM online Chap. 4 0,26 S QAMA , AOAC ,18 S QAMA , NCh 2635/1: ,08 I QAMA NCh 2635/1: ,64 S QAMA , AOAC ,86 S QAMA , NCh 2635/1: ,08 I QAMA , NCh 2635/2: ,1 S QAMA , NCh 2635/1: ,1 S QAMA , NCh 2635/1: ,2 S QAMA , AOAC ,26 S QAMA , NCh 2635/1: ,2 S QAMA , NCh 2635/1: ,05 I QAMA , AOAC ,99 S QAMA , BAM online Chap. 4 0 S QAMA , AOAC ,23 I QAMA ,20412 BAM online Chap. 4-10,43 I QAMA ,90309 NCh 2635/2: ,71 S QAMA , BAM online Chap. 4 1,21 S QAMA , AOAC S QAMA , AOAC ,07 S QAMA , AOAC ,87 S QAMA , AOAC ,64 S QAMA ,90309 AOAC ,71 S QAMA NCh 2635/1: ,64 S 12 de 21

13 QAMA , AOAC ,05 I QAMA , NCh 2635/1: ,21 S QAMA NCh 2635/2: ,64 S QAMA , AOAC ,27 S QAMA , NCh 2635/2: ,21 S QAMA , NCh 2635/2: ,33 S QAMA , NCh 1620/2 15,58 I QAMA , BAM online Chap. 4-1,43 S QAMA , AOAC ,21 S QAMA , NCh 2635/2: ,64 S QAMA , AOAC ,67 C QAMA , AOAC ,64 S QAMA , BAM online Chap. 4 0,33 S QAMA , BAM online Chap. 4 0,29 S QAMA , BAM online Chap. 4 0,13 S QAMA , NCh 2635/1: ,2 S QAMA , NCh 2635/2: ,21 S QAMA , NCh 2635/2: ,07 S QAMA , NCh 2635/2: ,19 I QAMA , BAM online Chap. 4-3,67 I QAMA , AOAC ,49 S QAMA , AOAC ,1 S QAMA , AOAC ,56 S QAMA , AOAC ,7 I QAMA , ISO 4832:2006-0,14 S Evaluación Satisfactorio Cuestionable No Satisfactorio E S C I 13 de 21

14 Tabla Nº 5. Resultados reportados para Enumeración de E. Coli. Laboratorio Res. Enum. UFC/mL Res. (Log 10) Ref. del Método Z-Score Evaluación QAMA , EN ISO :2001-1,52 S QAMA , NCh 2636:2001 0,28 S QAMA , BAM online Chap. 4-14,71 I QAMA , AOAC ,07 S QAMA , AOAC ,7 S QAMA , AOAC ,41 S QAMA , AOAC ,52 S QAMA , BAM online Chap. 4 0,28 S QAMA , AOAC ,17 S QAMA , NCh 2636:2001 0,28 S QAMA BAM online Chap. 4 0,74 S QAMA , AOAC ,83 S QAMA , NCh 2636:2001 0,28 S QAMA , NCh 2636:2001-1,08 S QAMA , NCh 2636:2001-1,08 S QAMA , NCh 2636:2001 0,28 S QAMA , AOAC ,35 S QAMA , NCh 2636:2001 0,28 S QAMA , AOAC ,22 I QAMA , AOAC ,97 S QAMA , BAM online Chap. 4 0,07 S QAMA , AOAC ,52 S QAMA , AOAC ,36 I QAMA ,50515 AOAC ,47 I QAMA , AOAC ,29 S QAMA , BAM online Chap. 4 1,34 S QAMA , AOAC ,28 I QAMA , AOAC ,07 S QAMA ,94939 AOAC S QAMA , AOAC ,6 S QAMA ,90309 AOAC ,67 S QAMA , NCh 2636:2001 0,28 S 14 de 21

15 QAMA , AOAC ,3 I QAMA , AOAC ,41 S QAMA , NCh 2636:2001 1,34 S QAMA AOAC ,74 S QAMA , Metodo In House -0,22 S QAMA , AOAC ,28 S QAMA , ISO :2001 0,41 S QAMA , SISS ME ,39 I QAMA , BAM online Chap. 4-1,43 S QAMA , AOAC ,34 S QAMA AOAC ,74 S QAMA , NCh 2636:2001-1,43 S QAMA , AOAC ,87 C QAMA , AOAC ,6 S QAMA , BAM online Chap. 4 0,41 S QAMA , BAM online Chap. 4 0,38 S QAMA , BAM online Chap. 4 0,21 S QAMA , AOAC ,89 S QAMA , NCh 2636:2001 0,28 S QAMA ISO :2001 0,74 S QAMA , ISO :2001 0,48 S QAMA , NCh 2635/2: ,45 I QAMA , BAM online Chap. 4-3,77 I QAMA , AOAC ,52 S QAMA , AOAC ,52 S QAMA , AOAC ,16 I QAMA , ISO :2001-0,14 S Evaluación Satisfactorio Cuestionable No Satisfactorio E S C I 15 de 21

16 Grafico 1 Distribución porcentaje de Evaluación de desempeño Enterobacteriaceae. Grafico 2. Distribución porcentaje de Evaluación de desempeño Coliformes. 16 de 21

17 Gráfico 3 Distribución porcentaje de Evaluación de desempeño E.coli. Gráfico 4 Distribución datos z-score Enterobacteriaceae 17 de 21

18 Gráfico 5. Distribución datos z-score coliformes Gráfico 6. Distribución datos z-score Escherichia coli 18 de 21

19 Gráfico 7. Método de referencia versus evaluación de resultados para Enterobacteriaceae. Gráfico 8. Método de referencia versus evaluación de resultados para coliformes. 19 de 21

20 Gráfico 9 Método de referencia versus evaluación de resultados para E.coli. Gráfico 10 Dispersión de resultados para Enterobacteriaceae. 20 de 21

21 Gráfico 11 Dispersión de resultados para coliformes. Gráfico 12 Dispersión de resultados para E. coli. 21 de 21