11 knúmero de publicación: kint. Cl. 6 : A61K 31/42

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1 k 19 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPAÑA 11 knúmero de publicación: kint. Cl. 6 : A61K 31/42 A61K 31/36 A61K 31/19 A61K 31/00 12 k TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA T3 86 k Número de solicitud europea: k Fecha de presentación : k Número de publicación de la solicitud: k Fecha de publicación de la solicitud: k 4 Título: Alteración del ritmo y el tipo de crecimiento de pelo. k Prioridad: US 4286 k 73 Titular/es: Joseph H. Handelman 26 West 61 Street New York, NY 023, US k 4 Fecha de la publicación de la mención BOPI: k 72 Inventor/es: Ahluwalia, Gurpreet S.; Shander, Douglas y Harrington, F. Eugene k 4 Fecha de la publicación del folleto de patente: k 74 Agente: Díez de Rivera y Hoces, Alfonso ES T3 Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art 99.1 del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, Madrid

2 ES T3 DESCRIPCION Esta invención se refiere a un método y a una composición para alterar el ritmo y el tipo de crecimiento de pelo en mamíferos, especialmente el crecimiento de pelo estimulado por andrógenos, mediante aplicación tópica a la piel de una composición que contiene un inhibidor de la gamma-glutamil transpeptidasa. Antecedentes de la invención Se ha propuesto anteriormente alterar el ritmo y el tipo de crecimiento de pelo mediante aplicación a la piel de inhibidores de ciertas enzimas tales como inhibidores de la -alfa-reductasa o de la ornitina descarboxilasa, o de materiales antiandrogénicos tales como agentes de unión al receptor de andrógenos citoplasmático, como se describen en las patentes de Estados Unidos nos y Por otra parte, se ha teorizado que otras enzimas, incluida la gamma-glutamil transpeptidasa, están involucradas en diversas fases de la formación del folículo piloso o del crecimiento del pelo, pero la relación entre las diversas enzimas y las reacciones que controlan, así como los efectos de unas con otras y sobre el crecimiento del pelo, no han sido completamente elucidados, como se desprende de Richards y col., Cancer Research, vol. 42, (1982); DeYoung y col., Cancer Research, vol. 38, (1978); y Chase, Physiolo. Zool., vol. 24, 1-8 (191). Se ha encontrado ahora que el ritmo y el tipo de crecimiento de pelo en los mamíferos (incluidos los seres humanos), especialmente el crecimiento de pelo estimulado por andrógenos, se ve alterado mediante aplicación tópica a la piel de una composición que contiene un inhibidor de la gamma-glutamil transpeptidasa. De acuerdo con la presente invención se proporciona el procedimiento de reducir el ritmo y alterar el tipo de crecimiento de pelo en mamíferos, que comprende la etapa de aplicar sobre la piel una composición que contiene un inhibidor de la gamma-glutamil transpeptidasa. También se proporciona de acuerdo con la presente invención la utilización, para reducir el ritmo y alterar el tipo de crecimiento de pelo en mamíferos de una composición tópica que comprende un vehículo no tóxico dermatológicamente aceptable, y un inhibidor de la gamma-glutamil transpeptidasa en concentraciones desde 0,1% hasta %, basadas en el peso total de dicha composición. Entre los inhibidores de la enzima gamma-glutamil transpeptidasa que pueden ser usados en la presente invención se encuentran el ácido (alfa S,S)-amino-3-cloro-4,-dihidro-isoxazolacético(acivicina) ; 1-gamma-L-glutamil-2-(2-carboxi-fenil)-hidrazina (antglutina);, -(4,,6,7-tetrabromo-3-oxo-1(3H)- isobenzofuranilideno)-bis[ácido 2-hidroxibenceno-sulfónico] (bromosulfaleína); ácido N-fumarol-L-2,3- diaminopropanoico, ácido L-2-amino-4-oxo--cloropentanoico (clorocetona); y g-glutamilhidrazona de a- cetoglutarato. Entre éstos, se prefiere la acivicina, la antglutina y la bromosulfaleína. La composición contiene, además del inhibidor, un vehículo o escipiente no tóxico dermatológicamente aceptable que está adaptado para ser extendido sobre la piel. La concentración del inhibidor en la composición puede ser variada en un amplio intervalo hasta una solución saturada, preferiblemente entre 0,1% y % en peso o incluso más; la reducción del crecimiento de pelo aumenta a medida que aumenta la cantidad de inhibidor aplicado por unidad de superficie de la piel. La cantidad máxima eficazmente aplicada se ve limitada únicamente por la velocidad de penetración del inhibidor en la piel. Generalmente, las cantidades eficaces oscilan entre y 0 microgramos o más por centímetro cuadrado de piel. Los siguientes ejemplos específicos pretenden ilustrar más claramente la naturaleza de la presente invención. Ejemplo 1 Se preparó un vehículo o excipiente con la siguiente composición: 2

3 ES T3 Componente Porcentaje de concentración en peso Agua 68% Etanol 16% Propilenglicol % Dipropilenglicol % Alcohol bencílico 4% Carbonato de propileno 2% Se mezcló acivicina (Sigma Chemical Co., St. Louis) con distintas porciones del vehículo anterior, para proporcionar probetas que contenían 1,2 y 6% en peso del inhibidor respectivamente, y el ph se ajustó a ph 7, con hidroxido sódico. Se utilizaron cuatro grupos (de ocho animales en cada grupo) de machos sanos de hamsters Golden Syrian. Estos animales se consideraron modelos aceptables para el crecimiento del pelo de la barba humana, ya que muestran unos órganos laterales de forma ovalada, uno a cada lado, cada uno de, 8 mm de diámetro principal, en los cuales crece un grueso y basto pelo negro similar al pelo de la barba humana. Estos órganos producen pelo en respuesta a los andrógenos de los hamsters. Los órganos laterales de cada hamster se depilaron por aplicación de un depilatorio químico basado en tioglicolato (Surgex), y a un órgano de cada animal se le aplicó -2 mg del vehículo sólo, una vez al día, mientras que al otro órgano de cada animal se le aplicó una cantidad igual de vehículo que contenía el inhibidor. Después de tres semanas de dichas aplicaciones (cinco días a la semana), los órganos laterales se afeitaron y se pesó la cantidad de pelo recogida (masa de pelo) de cada uno. El grado de reducción en el crecimiento de pelo debido al inhibidor se expresó comoladisminución en porcentaje de la masa de pelo del órgano tratado con el inhibidor, comparada con la del órgano tratado sólo con el vehículo. Como testigo, un grupo de ocho animales tenía ambos órganos laterales de cada animal tratados con el vehículo sólo. Los resultados se muestran en la siguiente Tabla 1. TABLA 1 Inhibición del crecimiento del pelo por acivicina Masa de pelo de los órganos laterales de los hamsters (mg) Grupo de Concentración de No tratados Tratados Porcentaje Tratamiento compuesto activo (media) (media) de inhibición Testigo 0,00 0,8 0,61 Acivicina 1,0% 1,04 0,8 18,2 Acivicina 2,0% 1,33 0,6 7,9 Acivicina 6,0% 0,79 0,1 81,0 También se observó que el pelo en el órgano tratado era de naturaleza más vellosa que en el órgano no tratado. Además, se encontró que tratamientos tópicos similares con una solución al 6% de acivicina durante un período de tres semanas provocaban una inhibición de alrededor del 87% en la actividad enzimática del folículo. Ejemplo 2 Se preparó una composición que contenía % en peso de bromosulfaleína disódica en el vehículo descrito en el Ejemplo 1, y se aplicó alosórganos laterales de los hamsters en las mismas condiciones que las descritas en el Ejemplo 1. Se observó una reducción del 32% en la masa de pelo después de tres semanas. Ejemplo 3 La antglutina, descrita como un inhibidor específico de la gamma-glutamil transpeptidasa en la Patente Japonesa número , y considerada como un inhibidor de la enzima gamma-glutamil transpeptidasa por Minato, Archives Biochem, Biophy., vol. 192, 23-2 (1979), se preparó mediante un 3

4 ES T3 procedimiento básicamente igual al descrito por Kinoshita y col., Bull Chem. Soc. Jpn., vol. 4, (1981). La síntesis se llevó a cabo en las siguientes cuatro etapas: Acido 2-hidrazinobenzoico Una solución de acetato sódico (21,7 g, 0,26 moles) en agua (80 ml) se añade a una solución de hidrocloruro de ácido 2-hidrazinobenzoico (Aldrich, 0 g, 0,26 moles) en agua (0 ml), formándose un precipitado espeso. Esta mezcla se refrigera durante tres horas, se filtra, se lava con agua (2x0 ml) y etanol (1 x 0 ml), y se seca al vacío para dar el ácido libre con un rendimiento del 7%. 2.Amida de éster alfa-bencílico del ácido N-t-BOC-L-glutámico y de ácido g-2-hidrazinobenzoico La siguiente reacción se realiza bajo una atmósfera de nitrógeno, usando material de vidrio previamente secado. Se añade una solución de N,N -diciclohexilcarbodiimida (Aldrich, 16,9 g, 0,074 moles) en cloruro de metileno anhidro (0 ml) a una solución de éster alfa-bencílico del ácido N-t-BOC-L-glutámico (Sigma, 2 g, 0,074 moles) y trietilamina (Aldrich,,4 g, 0,3 moles) en cloruro de metileno anhidro ( ml). A esta solución se añade una suspensión de ácido 2-hidrazinobenzoico (23 g, 0,11 moles) en cloruro de metileno anhidro (00 ml). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante toda una noche y se filtra por una almohadilla de Celite 4. El filtrado se evapora a vacío, se redisuelve en cloruro de metileno ( ml) y se lava con agua (3 x 0 ml). La capa orgánica se evapora en vacío y el residuo resultante se purifica por recristalización en etanol/agua para dar el compuesto deseado con un rendimiento del %. 3. Amida de ácido N-t-BOC-L-glutámico y de ácido g-2-hidrazinobenzoico La siguiente reacción se realiza bajo una atmósfera de nitrógeno, usando material de vidrio previamente secado. Se añade un catalizador de paladio sobre carbono (Aldrich, % C, 4,g) a una solución del producto de la etapa 2 ( g, 0,02 moles) y ciclohexeno (Aldrich, 12 ml) en etanol absoluto (22 ml). La mezcla se somete a reflujo durante tres horas, se enfría y se filtra a través de una almohadilla de Celite 4. El filtrado se evapora en vacío para dar el compuesto deseado con un rendimiento mayor del 90%. 4. Preparación de 1-g-L-glutamil-2-(2-carboxifenil)-hidracina-antglutina La siguiente reacción se realiza bajo una atmósfera de nitrógeno, usando material de vidrio previamente secado. Se agitan el producto de la etapa 3 (7,1 g; 0,02 moles) anisol (Aldrich, 29,6 g, 0,26 moles), yácido trifluoroacético (Aldrich, g, 0,046 moles), a 0 C durante tres horas. Se añade éter etílico (0 ml) a la solución de reacción y el precipitado cauchoide resultante se tritura con éter etílico adicional para producir antglutina bruta en forma de un polvo blanco con un rendimiento del %. El producto bruto es posteriormente purificado por medio de cromatografía de intercambio iónico con una columna de intercambio aniónico Dowex 2 x 8, proporcionando 2 mg de un producto cristalino ligeramente amarillo que exhibía unos máximos de absorción de UV (g max) a ph 2 y ph 7 y a 3 y 6 nm muy próximos a los valores encontrados en la bibliografía. La antglutina preparada de la manera anteriormente descrita se disolvió enprobetasdelvehículo descrito en el Ejemplo 1, y se aplicóalosórganos laterales de los grupos de hamsters de la misma manera que la descrita en el Ejemplo 1, utilizándose un grupo de ocho animales para cada composición diferente. Los resultados fueron los siguientes: TABLA 2 Masa de pelo de los órganos laterales de los hamsters (mg) Grupo de Concentración No tratados Tratados Porcentaje de tratamiento del compuesto activo (media) (media) inhibición Testigo 0,00 2,66 2,33 Antglutina 0,% 2,03 1,81,7 Antglutina 1,0% 1,92 1, 16,7 Antglutina 2,0% 2,7 1,8 38,6 Antglutina 6,0% 2,26 0,74 67,2 4

5 ES T3 Se encontró que la antglutina también inhibe la actividad de la gamma-glutamil transpeptidasa del folículo de pelo, para la que la antglutina tenía una fuerte afinidad inhibitoria. Resultados similares pueden esperarse con otros inhibidores de la gamma-glutamil transpeptidasa

6 ES T3 REIVINDICACIONES 1. Procedimiento cosmético para reducir el ritmo y alterar el tipo de crecimiento de pelo en mamíferos, que comprende la etapa de aplicar a la piel una composición que contiene un inhibidor de la gammaglutamil transpeptidasa. 2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque dicho inhibidor es acivicina, bromosulfaleína o antglutina Procedimiento según las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque la cantidad a aplicar es de a 0 microgramos de dicho inhibidor por centímetro cuadrado de piel. 4. Utilización con fines cosméticos para reducir el ritmo y alterar el tipo de crecimiento de pelo en mamíferos de una composición tópica que comprende un vehículo no tóxico dermatológicamente aceptable, y de 0,1 a %, basado en el peso total de dicha composición, de un inhibidor de la gamma-glutamil transpeptidasa.. Utilización según la reivindicación 4, caracterizada porque dicho inhibidor es acivicina, bromosulfaleína o antglutina NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposición Transitoria del RD 2424/1986, de de octubre, relativo a la aplicación del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a España y solicitadas antes del , no producirán ningún efecto en España en la medida en que confieran protección a productos químicos y farmacéuticos como tales. Esta información no prejuzga que la patente esté onoincluída en la mencionada reserva. 6