Muestra. Membrana Inmunoreactiva Material Absorbente. Figura 1: Tecnología en Plataforma de Flujo Rápido MedMira
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- Emilio Correa Barbero
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1 Prueba Rápida de Anticuerpos VIH Para Suero, Plasma y Sangre Completa Folleto Anexo INTENCION DE USO La Prueba Rápida del Anticuerpo VIH MiraCare es una prueba de inmunoensayo cualitativo de un solo uso para la detección de anticuerpos de Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH) Tipo 1 y Tipo 2 en suero humano, plasma o sangre completa. La Prueba Rápida del Anticuerpo VIH MiraCare esta diseñada para su uso por profesionales de la salud en el auxilio en el diagnostico de la infección con VIH-1 y/o VIH-2. INTRODUCCION Al menos dos retrovirus de inmunodeficiencia humana (VIH-1 y VIH-2) son conocidos por causar Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA). El VIH es transmitido principalmente por tener relaciones sexuales sin protección, exposición directa a la sangre o productos sanguíneos, compartir jeringas con personas con adicción a las drogas infectados con VIH, o por una mujer infectada por VIH durante el nacimiento, así como al amamantar. Cualquier persona expuesta al VIH (VIH-1 y/o VIH-2) producirá los anticuerpos que son indicadores de la infección VIH. La detección de dichos anticuerpos, representa un resultado positivo de VIH (indicando que el individuo esta infectado de VIH), pero no necesariamente indica un diagnóstico de SIDA. La ausencia de anticuerpos al momento de la prueba (indicando que el individuo no esta infectado con VIH) es indicativo de un resultado negativo de VIH sin embargo no descarta totalmente una infección VIH. Puede llevar hasta tres meses, tras la exposición al VIH, el desarrollo de estos anticuerpos. La Prueba Rápida del Anticuerpo VIH MiraCare (miracare HIV) es un dispositivo de flujo rápido desarrollado y fabricado por MedMira Laboratories (CANADA). Esta prueba detecta cualitativamente la presencia de anticuerpos VIH- 1 y/o VIH-2 en muestras de suero, plasma o sangre completa. El procedimiento simple de la prueba miracare HIV implica el colocar una gota de suero, plasma o sangre completa a través del pre-filtro a una membrana de prueba recubierta y permitir que ésta fluya a través de la membrana. Si la muestra contiene anticuerpos VIH-1 y/o VIH-2, éstos serán capturados en la membrana, resultando en un complejo altamente especifico de antígenos-anticuerpos. El resultado de la prueba es visualizado en colores por medio de una reacción con el apropiado agente de detección y puede ser interpretado inmediatamente. Muestra Membrana Inmunoreactiva Material Absorbente Figura 1: Tecnología en Plataforma de Flujo Rápido MedMira Para demostrar su innovadora plataforma de prueba de flujo, MedMira utiliza una sola solución buffer para la preparación y ejecución de la prueba y del agente colorimétrico, que permite la interpretación visual del resultado. El proceso de prueba es completado en 3 minutos. No son necesarios ni la precisión de una pipeta, ni refrigeración o equipo especial, incluyendo cronómetro, para realizar la prueba miracare HIV. PRECAUCION 1. La Prueba miracare HIV es para hacer un diagnóstico in vitro para profesionales de la salud. Este producto no debe ser usado como autodiagnóstico. 2. Lea completa y cuidadosamente este instructivo previo al uso de la Prueba miracare HIV. Si las indicaciones no son seguidas exactamente, ésto puede generar resultados inexactos.
2 COMPONENTES Envoltura Mylar conteniendo: 1. 1 cartucho de prueba fijado a una Unidad de Filtración de Muestra de color azul 2. 1 tapa InstantGold (Color verde) 3. 1 pipeta desechable 4. 1 frasco gotero Universal Buffer (Tapa color blanco) 5. 1 frasco gotero de solución diluyente Buffer (Tapa color rojo) 6. 1 lanceta 7. 1 aplicador de alcohol PRECAUCIONES Por favor lea los siguientes puntos con cuidado antes de realizar la prueba. No la utilice después de la fecha de caducidad impresa en la parte exterior de la caja o en la envoltura Mylar. Manténgase en un lugar seco de 2-30 C. Mantenga las pruebas en la envoltura Mylar hasta su uso. Manténganse fuera del alcance de los niños. Para uso en diagnóstico in vitro solamente. No para usarse internamente. No abra la envoltura Mylar hasta estar listo para llevar a cabo la prueba. Deseche con cuidado todos los materiales de prueba después de usarlos. Recomendaciones de Seguridad: 1. Maneje las muestras, los controles de Prueba VIH MedMira, y todos los materiales que toquen las pruebas como si fueran éstas capaces de transmitir agentes infecciosos. 2. No fume, coma o beba en áreas donde las muestras, o agentes reactivos sean manejados. No use la pipeta con la boca. 3. Utilice guantes desechables cuando maneje muestras de pacientes. 4. Disponga de todas las muestras y materiales utilizados en la Prueba miracare HIV de acuerdo con las normas de eliminación de residuos infecciosos. 5. Se utiliza azida sódica como conservante en el Medmira Buffer Universal y en el diluyente buffer. Para prevenir la formación de plomo o azida de cobre, enjuague abundamente con agua después de desechar las soluciones que contengan azida de sodio. Precauciones de Manejo 1. Use cada cartucho de prueba, la unidad de filtración de muestra (azul), la lanceta, la tapa InstantGold (verde), y la pipeta desechable una sola vez y deséchelas. No reutilice estos componentes. 2. No toque la membrana inmunoreactiva de prueba. 3. Extreme precauciones en el manejo de los componentes de la prueba para prevenir contaminación. 4. Es necesaria una iluminación adecuada para leer los Resultados de la Prueba. Recogida de la muestra 1. La Prueba miracare HIV se puede utilizar para probar el suero, el plasma o las muestras de sangre completa. El Plasma obtenido utilizando EDTA, heparina, o citrato de sodio como anticoagulantes es adecuado para realizar la prueba. 2. Las muestras pueden ser analizadas inmediatamente una vez recibidas o bien ser almacenadas durante un máximo de cinco (5) días a una temperatura de 2-8 C. Las muestras de suero o plasma deberán ser almacenadas a una temperatura de -20 C o inferior si se requiere un almacenamiento superior a cinco (5) días. 3. Partículas en suspensión pueden bloquear la membrana de prueba o producir un color oscuro en el fondo haciendo la interpretación de resultados difíciles. Las muestras diluidas, turbias o viscosas no deberán ser usadas para la prueba. 4. Muestras que no pasen a través de la membrana dentro de treinta (30) segundos pueden ser inapropiadas para ser examinadas.
3 Manejo de la muestra 1. Para Suero o Plasma que ha sido previamente congelado: a. Descongele completamente a temperatura ambiente (15-27 C) y mezcle completamente golpeando suavemente el fondo del tubo tapado. b. Centrífugue una alicuota del espécimen en un tubo pequeño y tapado a la temperatura ambiente (15-27 C) en 6000 rpm por lo menos cinco (5) minutos y utilice sólo el sobrenadante claro para probar. 2. Evite múltiples ciclos de congelación- descongelación. Una muestra no se debe congelar y descongelar más que dos veces antes de ser utilizada con la Prueba miracare HIV. PREPARACION GENERAL DE LA PRUEBA 1. Quite la envoltura Mylar de la caja. 2. Antes de abrir la envoltura Mylar asegúrese de la integridad de la envoltura Mylar esta intacta. Si la envoltura Mylar no esta intacta, deseche la envoltura Mylar y todo su contenido y obtenga una nueva envoltura Mylar. 3. Siguiendo las esquinas marcadas, abra la envoltura Mylar. Coloque todos los componentes en una superficie limpia y plana. Quite la tapa del frasco gotero del diluyente Buffer (Tapa color rojo) y colóquelo en una superficie limpia y plana. 4. Asegúrese que la Unidad de Filtración de Muestras azul esté colocada firmemente en la cavidad del plástico blanco del cartucho de prueba. RECOLECCION DE LA MUESTRA Para Sangre Completa en Dedo: 1. Utilizando el aplicador de alcohol, limpie su dedo índice. Deje secar. 2. Quite la tapa de plástico blanca de la lanceta y colóquela en la parte limpia de su dedo índice. Perfore la piel presionando firmemente. Coloque el dedo hacia abajo y presione suavemente cerca de la perforación. 3. Apriete la parte externa de la pipeta desechable y colóquela en el centro de la gota de sangre. Lentamente libere la presión para atraer la gota de sangre dentro del canal de la pipeta. 4. Aplique una (1) gota de sangre dentro del frasco gotero del Diluyente Buffer (Tapa color rojo) colocando la punta de la pipeta desechable dentro del frasco y apriete suavemente la parte externa de la pipeta. Cuidadosamente golpee la base del frasco para mezclar. Prosiga inmediatamente con el PROCESO DE PRUEBA. Para Suero, Plasma o Sangre Completa por Pinchadura en la Vena: 1. Apriete la parte externa de la pipeta desechable y colóquela en la muestra de suero, plasma o sangre. Lentamente libere la presión para atraer la gota de sangre dentro del canal de la pipeta. 2. Aplique una (1) gota dentro del frasco gotero del Diluyente Buffer (Tapa color rojo) colocando la punta de la pipeta desechable dentro del frasco y apriete suavemente la parte externa de la pipeta. Cuidadosamente golpee la base del frasco para mezclar. Prosiga inmediatamente con el PROCESO DE PRUEBA. PROCESO DE PRUEBA Todas las soluciones deben ser completamente absorbidas dentro de la membrana de prueba antes de proceder al siguiente paso del proceso de prueba. Una vez iniciada la prueba, todos los pasos subsecuentes deben ser completados sin interrupción. Realice la prueba sobre una superficie plana. Lea el resultado de la prueba inmediatamente. En caso contrario, los resultados pueden ser inexactos. 1. Aplique seis (6) gotas del frasco gotero Universal Buffer (Tapa color blanca) en el centro de la Unidad de Filtración de Pruebas azul. Permita que la solución se absorba a través de la Unidad de Filtración Azul completamente. 2. Vacié el contenido del frasco gotero Diluyente Buffer (Tapa color rojo) conteniendo la muestra (como se menciona en la Recogida de la Muestra) en el centro de la Unidad de Filtración de Pruebas azul. Permita que la solución se absorba a través de la Unidad de Filtración Azul completamente.
4 3. Quite la Unidad de Filtración de Pruebas azul doblando cuidadosamente la manija con un movimiento circular y hacia adelante. 4. Coloque la Tapa InstantGold (color verde) sin apretar dentro de la boca del cartucho de prueba. Aplique doce (12) gotas del Buffer Universal MedMira al centro de la Tapa InstantGold. Permita que el Buffer Universal se absorba a traves de la Tapa InstantGold completamente. 5. Remueva la Tapa InstantGold doblando cuidadosamente la manija con un movimiento circular y hacia adelante. Lea el resultado INMEDIATAMENTE. CONTROL DE CALIDAD Es responsabilidad de cada usuario de la Prueba Rápida del Anticuerpo VIH MiraCare establecer el adecuado programa de aseguramiento de calidad para asegurar el apropiado funcionamiento del dispositivo bajo sus condiciones de uso. Características Inherentes del Control La Prueba miracare HIV incluye un proceso inherente y un Control de Línea del reactivo que demuestra la validez del proceso de prueba y de la función del reactivo. Una línea vertical roja bajo la C (Área de Control) en el cartucho de prueba indica que la muestra ha sido añadida al cartucho de prueba, y que los reactivos de prueba están funcionando adecuadamente. La Línea de Control aparecerá en todas las pruebas válidas, independientemente si el resultado del examen es Reactivo o No Reactivo (véase la sección Como Leer los Resultados de la Prueba).
5 COMO LEER LOS RESULTADOS DE LA PRUEBA RESULTADO DE PRUEBA NO REACTIVO Probable no-exposición al VIH-1 y/o VIH-2 La presencia de una línea roja en la región de control (C) significa que el individuo probablemente no ha sido expuesto al VIH-1 y/o VIH-2, pero no excluye la posibilidad de exposición or infección con VIH-1/2. Después de una reciente exposición al VIH, puede llevar varios meses que la respuesta de anticuerpos llegue a niveles detectables. Si existe motivo de preocupación, la prueba debe repetirse dentro de tres o seis meses o consultar a un medico. RESULTADO DE PRUEBA REACTIVO Probable exposición al VIH-1 o VIH-2 La presencia de dos líneas una, en la región de prueba (T) y otra en la región de control (C) significa que el individuo pudo estar expuesto al VIH-1 y/o VIH-2. Una línea puede ser más delgada que la otra, y no tienen que ser iguales. Significa que los anticuerpos del VIH-1 y/o VIH-2 están probablemente presentes en la sangre del individuo y que debe de visitar al doctor lo antes posible. Todos los resultados reactivos deben ser confirmados y evaluados con respecto a una evaluación clínica global antes de realizarse un diagnóstico. RESULTADO DE PRUEBA INVALIDO El resultado es inválido si ninguna línea roja aparece en la región de control (C), incluso si una línea roja aparece en la región de prueba (T). Así mismo la presencia de una línea dividida bajo la (C) indica que ha habido un problema, sea con el aparato de prueba o la muestra, durante el proceso de prueba. El proceso de prueba debe repetirse con una nueva prueba miracare HIV. Si el problema persiste, contacte a su distribuidor local. LIMITACIONES DE LA PRUEBA 1. Esta prueba debe ser usada de acuerdo con las instrucciones del paquete para asegurar resultados exactos. 2. Esta prueba es para uso único con suero, plasma o sangre completa. Usar otro tipo de muestras puede producir resultados no exactos. 3. Los resultados de la prueba deben ser leídos e interpretados inmediatamente después de completar el proceso de prueba. Un retraso en la lectura de los resultados puede generar resultados inexactos. 4. El resultado de la prueba reactiva sugiere la presencia de anticuerpos anti-vih en la muestra. 5. La intensidad de la línea roja (Resultado de prueba Reactivo) no necesariamente está correlacionada con el título de anticuerpos de la muestra. 6. Una prueba de resultado No-Reactivo indica la ausencia de anticuerpos al VIH detectables en la muestra, pero no excluye la posibilidad de exposición o infección de VIH.
6 CARACTERÍSTICAS DEL FUNCIONAMIENTO SENSIBILIDAD Estudios de sensibilidad fueron llevados acabo usando muestras positivas de anticuerpos VIH-1 obtenidas de 582 individuos quienes resultaron VIH positivos de la Western Blot. Las pruebas rápidas de VIH reaccionaron con 580 de los 582 con una sensibilidad de 99.7%. La prueba rápida de VIH se encontró que fue 100% sensible cuando 54 subgrupos VIH-1 del grupo M, 10 VIH-1 grupo O y 299 muestras VIH-2 fueron probadas (Tabla 1). La sensibilidad general de la prueba rápida de VIH fue de 99.7% cuando 1,512 muestras de la Western Blot confirmadas como positivas (diferentes subgrupos) fueron analizadas (Tabla 2). Tabla 1. Sensibilidad con VIH-1 grupo M, grupo O, y VIH-2 Muestra (grupo, Número de Sensibilidad subgrupo) pruebas VIH-1 (M,A) % VIH-1 (M,B) % VIH-1 (M,C) % VIH-1 (M,D) 5 100% VIH-1 (M,E) 3 100% VIH-1 (M,F) 3 100% VIH-1 (M,G) 2 100% VIH-1 (O) % VIH % Tabla 2. Sensibilidad con VIH-1 Subgrupo por Región País Prevalencia Número de Sensibilidad muestras Canadá B % India C,A, B % Perú B, F % Tanzania C, A, D % Tailandia E, B % Trinidad B % Estados Unidos B % ESPECIFICIDAD La especificidad general de la prueba rápida del VIH fue de 99.7% cuando 11,216 muestras negativas fueron analizadas. REACTIVIDAD CON PANELES DE SEROCONVERSION Treinta paneles de seroconversión fueron probados en comparación con un EIA anti-vih 1, 2 aprobado. Cada panel consistió en una serie secuencial de pruebas obtenidas de un solo individuo bajo seroconversión. Los 30 paneles de seroconversión consistieron en 143 muestras. En este estudio, la prueba rápida VIH fue capaz de detectar seronversión de forma similar a la del test EIA VIH-1,2 utilizado como referencia. REACTIVIDAD FRENTE A PANELES DE SEROCONVERSIÓN CON BAJO TÍTULO DE ANTICUERPOS ANTI-VIH 1 Un panel bajo en anticuerpo título VIH-1 que consta de 15 muestras, obtenidas de una fuente comercial, fue puesto a prueba en comparación con pruebas anti-vih EIA aprobadas. La prueba rápida VIH fue capaz de detectar anticuerpos de VIH-1 similar a las pruebas anti-vih EIA aprobadas. ESTUDIOS DE INTERFERENCIA Estudios de interferencia fueron llevados a cabo en 1220 muestras, los resultados indicaron que el EDTA, heparina, citrato de sodio, niveles anormales de marcadores químicos (por ejemplo fosfatasa alcalina, aminotransferasa alanina, lactato dehidrogenasa, hormona estimuladora de la tiroides, glucosa, colesterol, amilasa y varios iones) seromarcadores asociados con condiciones médicas no relacionadas, (por ejemplo factor reumatoide, mononucleosis infecciosa, Helicobacter pylori, hepatitis A, B o C, virus herpes simplex, micoplasma, paperas, sarampión, rubéola y sífilis) y muestras obtenidas de mujeres embarazadas no interfirieron con la prueba.
7 REPETIBILIDAD Y REPRODUCIBILIDAD Se evaluaron tres paneles enmascarados a partir de tres lotes del producto, que fueron evaluados en tres días distintos y en tres lugares diferentes. Los resultados de estos estudios mostraron una repetibilidad y reproducibilidad del 100% EQUIVALENCIA DEL SUJETO DE ANALISIS Al analizar con esta prueba suero, plasma y sangre completa del mismo individuo se obtuvo una correlación del 100% con los resultados obtenidos con un test EIA de referencia. GARANTIA DEL PRODUCTO MedMira Laboratories Inc. garantizan la calidad de este producto mientras sea conservado y utilizado como se indica. Cualquier componente de la prueba que se encuentre defectuoso será reemplazado sin ningún cargo y después de haber sido devuelto el producto defectuoso. Esta garantía no cubre la utilización del producto para otros usos no previstos por MedMira Laboratories quien no se responsabiliza de los daños causados. M MedMira Laboratories Inc. 155 Chain Lake Drive, Suite 1 Halifax, Nova Scotia. Canada B3S 1B3 Teléfono: Fax: P EU Auth. Rep. Advena Ltd. PO Box 30 Leominster HR60ZQ UK C 0318
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