Estados singulete y triplete
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- Ana María Sáez Serrano
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1 Fluorescencia
2 Estados singulete y triplete π* π* π* Singulete fundamental π π π Singulete excitado Triplete excitado
3 Niveles de energía moleculares
4 Fluoreno y bifenilo fluoreno bifenilo
5 Fluoresceína y fenolftaleína C C fluoresceína fenolftaleína
6 Quelatos H H H H Al 3+ H N=N S Na 3 N=N S Na 3 Pontacromo BBR Pontacromo BBR Al 3+
7 Ion anilinio y anilina H H H N (+) H N: H H + N H H + N H.. ion anilinio anilina
8 Fluorescencia y concentración Ley de Beer: T=P/P 0 =10 -εbc (Fracción de radiación transmitida) 1 P/P 0 = εbc (Fracción de radiación absorbida) CANTIDAD de radiación absorbida = P 0 P = P 0 (1 10 -εbc ) Intensidad de radiación fluorescente: I f =kφ(p 0 P) φ=rend. cuántico εbc =.3εbC-(.3εbC) /! + (.3εbC) 3 /3! -... I f kp o Si εbc<0.05, I f =kφp 0.3ebC fluorescencia no uniforme fluorescencia uniforme C
9 Instrumentación
10 Espectros de excitación y emisión
11 Aplicaciones SUSTANCIAS INRGANICAS Análisis directo Formación de quelatos fluorecentes Determinaciones indirectas SUSTANCIAS RGANICAS Vitaminas Química clínica Análisis forense Fármacos y drogas, etc.
12 Quelatos fluorescentes Especie Reactivo Sensibilidad (µg/ml) Ag + Al 3+ Al 3+ Cu + Li + Sn 4+ Butilrodamina S Morina Rojo de alizarina R Luminocupferrón 8-hidroxiquinoleína Flavonol
13 Determinaciones indirectas Especie Reactivo Sensibilidad (µg/ml) Cl F P 4 3 Nitrato de uranilo Al morina Al morina S 3 K S 3 K N Pd/ + 4 CN + Pd(CN) 4 S 3 K N Mg + N Mg/ fluorescente
14 Vitaminas Vitamina Reactivo λ ex λ em A B 1 B B 6 B 1 C fluorescencia nativa + ferricianuro fluorescencia nativa +KMn4 fluorescencia nativa ac. dehidroascórbico + o-fenilendiamina D D 3 + ac. tricloroacètico E K fluorescencia nativa
15 Huellas digitales latentes agua: % Huella digital: 0.1 mg (latente) Residuo: 1 µg sust. inorg.: NaCl, etc. Aminoácidos, lípidos, etc.. H H N = [I] [II]. N H Zn Cl [III] H
16 Fármacos y drogas Sustancia Condiciones λ ex (nm) λ em (nm) Sensibilidad (µg/ml) Adrenalina Ac. salicílico Ampicilina Aspirina Atropina Codeina Digital Estreptomicin a LSD Morfina Pentotal Quinina ph 1 ph 11 hidrólisis HAc CHCl3 eosina ph 1 HCl-glicerina ph 13 ph 7 ph 1 ph 13 ph ,
17 Quimioluminiscencia Es el fenómeno que ocurre en las luciérnagas: una reacción química con un muy alto rendimiento energético produce una molécula potencialmente fluorescente. (No hay excitación luminosa como en la fluorescencia) Usualmente son reacciones redox catalizadas por enzimas que involucran o H y un sustrato orgánico oxidable. La energía se libera como luz visible.
18 Quimioluminiscencia Equipo: luminómetro. Componentes : Compartimiento de muestra aislado de la luz Fotomultiplicador de alta sensibilidad También puede haber un sistema para hacer llegar la muestra a la cámara. Soluciones de concentración conocida curva stándard de luz emitida luz del problema concentración Las medidas deben hacerse en unos pocos segundos ya que la luz se emite a menudo como una ráfaga corta inmediatamente después de la mezcla de los reactivos.
19 ANÁLISIS DE LS CNTAMINANTES DEL AIRE N DETERMINACIÓN DE CNTAMINANTES EN AIRE PR MÉTDS QUIMILUMINISCENTES : N, 3, H S y S La quimioluminiscencia se produce cuando una reacción n química genera una especie electrónicamente excitada, que emite luz cuando vuelve al estado fundamental o que transfiere su energía a a otra especie que, posteriormente, da lugar a una emisión DETERMINACIÓN QUIMILUMINISCENTE DE N El ozono procedente de un electrogenerador y las muestras de la atmósfera son arrastradas de forma continua al recipiente de reacción, donde se sigue el curso c de la reacción luminis- cente mediante un tubo fotomultiplicador. N + 3 N + También n se determinan óxidos de nitrógeno de estados de oxidación superiores. El conte- nido de dióxido de nitrógeno, N, en los gases de escape de los automóviles se determina por descomposición n térmica t del gas a 700 o C en un tubo de acero. N N + DETERMINACIÓN QUIMILUMINISCENTE DE 3 - Una determinación n se basa en la luminiscencia producida cuando el analito ( 3 ) reacciona con el colorante rodamina B, adsorbido sobre una superficie de gel de sílice s activada. Respuesta lineal para [ 3 ] = < 1 ppb 400 ppb. - tra determinación n de 3 en fase gaseosa se basa en la quimioluminiscencia que produce cuando el 3 reacciona con etileno. DETERMINACIÓN DE H S Y S La muestra se quema en una llama de hidrógeno para dar un dímero d de azufre, que posteriormente se descompone emitiendo luz. 4 H + S S + H N S + h ν S + hν
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