Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1 Clone 22C3. N.º de catálogo M3653. Uso previsto
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- Josefa Lucía Aguirre Miguélez
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1 Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1 Clone 22C3 N.º de catálogo M3653 Uso previsto Sinónimos del antígeno Resumen y explicación Para uso diagnóstico in vitro. Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1, Clone 22C3, está indicado para su uso en inmunohistoquímica. Este anticuerpo marca PD-L1 en tejido normal y neoplásico. La interpretación clínica de los resultados de cualquier tinción, o su ausencia, debe complementarse con estudios morfológicos mediante los controles adecuados y debe evaluarla un anatomopatólogo cualificado en el contexto de la historia clínica del paciente y de otras pruebas diagnósticas. Este anticuerpo está indicado para su uso después de realizar el diagnóstico primario del tumor mediante histopatología convencional con tinciones histoquímicas no inmunológicas. Ligando 1 de muerte celular programada (1). La unión de los ligandos para PD-1, PD-L1 y PD-L2, al receptor PD-1 que se encuentra en las células T, inhibe la proliferación de células T y la producción de citocina (2). En algunos tumores, tiene lugar un aumento de la expresión de los ligandos para PD-1 y señalizar esta ruta puede contribuir a la inhibición de la vigilancia inmunitaria activa de los tumores por parte de las células T (3). El bloqueo de la interacción de PD-1 con PD-L1 y PD-L2 libera la inhibición mediada por la ruta de PD-1 de la respuesta inmunitaria, incluida la respuesta inmunitaria antitumoral (4). Consulte las Instrucciones generales para la tinción inmunohistoquímica de Dako o las instrucciones del sistema de detección de los procedimientos de IHC. Reactivo suministrado Inmunógeno Especificidad Precauciones Anticuerpo monoclonal de ratón suministrado en forma líquida en Tris-HCl a 0,05 mol/l, azida sódica a 0,015 mol/l y albúmina de suero bovino al 1% y con un ph de 7,2. Clon: 22C3 (5). Isotipo: IgG1. Concentración de IgG de ratón en mg/l: Ver la etiqueta del vial. La concentración de proteína puede variar de un lote a otro, pero este cambio no afecta a la dilución óptima de uso. El título de cada lote se compara y ajusta mediante un lote de referencia para asegurar que el resultado de la tinción inmunohistoquímica sea consistente entre los distintos lotes. Dominio extracelular humano de PD-L1 (Phe19-Thr239) unido a un fragmento de IgG1 humana (Catálogo de R&D Systems n.º 156-B7-100) (5) En las pruebas de inmunoelectrotransferencia (Western blot) de proteína PD-L1 humana recombinante, Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1, Clone 22C3 marca una banda que corresponde a ~40 kda (5). 1. Para usuarios profesionales. 2. Este producto contiene azida sódica (NaN 3), un compuesto químico altamente tóxico en su forma pura. A las concentraciones en las que está presente en el producto, aunque no se clasifican como peligrosas, la azida sódica puede reaccionar con las cañerías de plomo y cobre, lo que formará acumulaciones de azidas metálicas muy explosivas. Tras desechar el producto, abra el grifo y deje que salga abundante agua para despejar las cañerías de cualquier acumulación de azidas. 3. Como con cualquier producto derivado de fuentes biológicas, deben utilizarse los procedimientos de manipulación apropiados. 4. Utilice el equipo de protección personal adecuado para evitar el contacto con los ojos y la piel. 5. La solución no utilizada debe desecharse de acuerdo a las normativas locales, nacionales y de la UE. Almacenamiento Preparación de las muestras Almacénelo a una temperatura de 2-8 C. No lo utili ce después de la fecha de caducidad impresa en el vial. Si los reactivos se almacenan en condiciones diferentes a las especificadas, el usuario debe comprobarlas. No existen signos evidentes que indiquen inestabilidad en este producto. Por lo tanto, los controles positivo y negativo deberán realizarse de manera simultánea con las muestras del paciente. Si observa tinciones inesperadas que no puedan atribuirse a las variaciones en los procedimientos de laboratorio y se sospecha que existe un problema con el anticuerpo, póngase en contacto con el servicio de asistencia técnica de Dako. Cortes de parafina: El anticuerpo se puede utilizar para la marcación de cortes de tejido fijados con formol e incluidos en parafina. Las muestras de tejido deben cortarse en secciones de aproximadamente 4 µm. Pretratamiento: Consulte EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (n.º de catálogo K8005) para obtener instrucciones sobre cómo realizar el pretratamiento de los portaobjetos. ( ) P04435ES_01/M3653/ p. 1/4
2 Procedimiento de tinción Estas solo son pautas orientativas. Las condiciones óptimas pueden variar en función del tipo de muestra y del método de preparación y deberán ser validadas individualmente en cada laboratorio. El rendimiento de este anticuerpo debe ser establecido por parte del usuario si se utiliza con otros sistemas de tinción manual o plataformas automatizadas. Dilución: La dilución recomendada de Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1, Clone 22C3, n.º de catálogo M3653, es de 1:50. Diluya el anticuerpo en Dako Antibody Diluent with Background-Reducing Components (n.º de catálogo S3022). Incube los cortes de tejido pretratados durante 30 minutos a temperatura ambiente. Control negativo: El reactivo de control negativo recomendado es Dako Negative Control, Mouse IgG1 (n.º de catálogo X0931), diluido en la misma concentración de IgG1 que el anticuerpo primario. A menos que se haya establecido la estabilidad del anticuerpo y del control negativo diluidos en el procedimiento de tinción actual, diluya estos reactivos inmediatamente antes de su uso. Los controles positivo y negativo deberán realizarse de manera simultánea con las muestras de pacientes. Visualización: El sistema de visualización HRP recomendado EnVision FLEX usa 30 minutos de incubación a temperatura ambiente. El tiempo de incubación para EnVision FLEX+ Mouse (LINKER) (n.º de catálogo K8021/K8022) es de 30 minutos a temperatura ambiente. Siga el procedimiento correspondiente al sistema o sistemas de visualización seleccionados. Nota: Utilice EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (n.º de catálogo K8005) para HIER. El tiempo de incubación para DAB Enhancer (S ) es de 5 minutos a temperatura ambiente. Contratinción: La contratinción recomendada es EnVision FLEX Hematoxylin (n.º de catálogo K8008/K8018). Para obtener resultados óptimos, se recomienda un medio de montaje no acuoso permanente. Controles: Los tejidos de control positivo y negativo deberán realizarse de manera simultánea empleando el mismo protocolo que para las muestras del paciente. El tejido de control positivo debe incluir la amígdala y las células/estructuras deben mostrar patrones de reacción como se describe para este tejido en la sección Características de resultados. Interpretación de la tinción Características de resultados El patrón de tinción celular es membranoso. Tejidos normales: Se observó tinción de la membrana plasmática en células inmunitarias y células de origen epitelial. Se observó tinción citoplasmática en algunos tipos de células pero no se registró como tinción positiva. En la Tabla 1 aparece un resumen de la inmunorreactividad de PD-L1 junto con el panel recomendado de tejidos normales. Todos los tejidos se fijaron con formol y se incluyeron en parafina, y se tiñeron con Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, Clone 22C3 según estas instrucciones de uso. No se observaron resultados inesperados en los tipos de células o los tipos de tejidos analizados. La tinción observada coincidió con la encontrada en la literatura para la expresión IHC de PD-L1 en tejidos normales (1, 2). Tabla 1: Resumen de la reactividad en tejido normal de Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, Clone 22C3 Tipo de tejido Elementos tisulares Tipo de tejido Elementos tisulares (n.º analizado) positivos (n.º analizado) positivos Amígdala (3) 3/3 epitelio de la cripta Mama (3) 0/3 2/3 macrófagos Médula ósea (3) 3/3 megacariocito Bazo (3) 2/3 macrófagos Músculo, cardiaco (3) 0/3 Células mesoteliales (2) 0/2 Músculo, esquelético (3) 0/3 Cerebelo (3) 0/3 Nervio, periférico (3) 0/3 Cerebro (3) 0/3 Ovario (3) 0/3 Colon (3) 1/3 linfocitos Páncreas (3) 0/3 1/3 macrófagos Paratiroides (3) 1/3 epitelio glandular Cuello uterino (3) 1/3 células epiteliales Piel (3) 0/3 Esófago (3) 0/3 Próstata (2) 2/2 epitelio Estómago (3) 2/3 linfocitos Pulmón (3) 3/3 macrófagos 1/3 glándulas gástricas Riñón (3) 1/3 epitelio tubular Glándula salivar (3) 0/3 Suprarrenal (3) 0/3 Hígado (3) 1/3 macrófagos Testículo (3) 0/3 1/3 hepatocitos Timo (3) 3/3 médula Hipófisis (3) 1/3 hipófisis anterior Tiroides (3) 0/3 Intestino delgado (3) 0/3 1/3 hipófisis posterior Útero (3) 0/3 ( ) P04435ES_01/M3653/ p. 2/4
3 Tejidos anómalos: Se observó tinción de la membrana plasmática en células inmunitarias y células de origen epitelial. Se observó tinción citoplasmática en algunos tipos de células pero no se registró como tinción positiva. En la Tabla 2 aparece un resumen de la inmunorreactividad de PD-L1 junto con el panel de tejidos neoplásicos. Todos los tejidos se fijaron con formol y se incluyeron en parafina, y se tiñeron con Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, Clone 22C3 según estas instrucciones de uso. No se observaron resultados inesperados en las muestras de tumores analizadas. La tinción observada coincidió con la encontrada en la literatura para la expresión IHC de PD-L1 en tejidos neoplásicos (1-4). Tabla 2: Resumen de la reactividad en tejido neoplásico de Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, Clone 22C3 Tipo de tumor Adenocarcinoma Ubicación Apéndice Cabeza y cuello, bóveda del paladar Colon 0/5 Colon, con metástasis en el hígado Colon, mucinoso Cuello uterino, tipo endocervical Esófago Estómago 0/6 Estómago, mucinoso Gastrointestinal, con metástasis en el pulmón Positivo para PD-L1/total N=159 Glándula parótida/salival 0/2 Intestino delgado 0/2 Mama, DCIS 0/2 Mama, ductal invasivo 0/7 Mama, ductal invasivo con metástasis en el ganglio linfático Ovario, endometrioide Ovario, mucinoso Ovario, seroso Ovarios Páncreas 0/2 Páncreas, ductal 0/3 Próstata 0/5 Pulmón 1/4 Recto 0/4 Tiroides, folicular Tiroides, folicular papilar Tiroides, papilar 0/3 Útero, célula clara Útero, endometrio 0/3 Vesícula biliar 1/5 Astrocitoma Cerebro 0/3 Carcinoma Nasofaríngeo, NPC Carcinoma corticosuprarrenal Suprarrenal Carcinoma de células basales Piel Carcinoma de células en anillo de sello Carcinoma de células en anillo de sello de colon con metástasis en el ovario Colon ( ) P04435ES_01/M3653/ p. 3/4
4 Carcinoma de células escamosas Cabeza y cuello 0/2 Carcinoma de células escamosas de esófago con metástasis en el ganglio linfático Cuello uterino 2/5 Esófago 0/7 Piel 0/2 Pulmón 1/2 Útero Carcinoma de células pequeñas Pulmón Carcinoma de células renales Célula clara Riñón 0/6 Papilar Riñón Carcinoma de células transicionales Riñón Vejiga 0/6 Carcinoma embrionario Testículo Carcinoma hepatocelular Hígado 0/5 Carcinoma medular Tiroides Condrosarcoma Hueso Cordoma Cavidad pélvica Ependimoma Cerebro Espermatocitoma Testículo 0/2 Feocromocitoma Suprarrenal Glioblastoma Cerebro Hepatoblastoma Hígado Leiomiosarcoma Linfoma Tejido blando, pared torácica Vejiga Anaplásico de células grandes Ganglio linfático Difuso de células B Ganglio linfático 0/4 Hodgkin Ganglio linfático 2/2 No Hodgkin Ganglio linfático 1/1 Meduloblastoma Cerebro Melanoma Cavidad nasal Recto Meningioma Cerebro 0/2 Mesotelioma Peritoneo Neuroblastoma Retroperitoneo Neurofibroma Tejido blando, región lumbar Osteosarcoma Hueso 0/2 Rabdomiosarcoma Próstata Retroperitoneo Tejido blando, embrionario Sarcoma sinovial Cavidad pélvica Seminoma Testículo 0/2 Timoma Mediastino 1/1 Tumor de células de islotes Páncreas Tumor intersticial Tumor neuroectodérmico primitivo (PNET) Colon Intestino delgado Recto Retroperitoneo ( ) P04435ES_01/M3653/ p. 4/4
5 Referencias 1. Okazaki T, Honjo T. PD-1 and PD-1 ligands: from discovery to clinical application. International Immunol 2007(19); 7: Brown JA, Dorfman DM, Ma F-R, Sullivan EL, Munoz O, Wood CR, et al. Blockade of Programmed Death-1 Ligands on Dendritic Cells Enhances T Cell Activation and Cytokine Production. J Immunol 2003;170: Cooper WA, Tran T, Vilain RE, Madore J, Seliger CI, Kohonen-Cornish M, et al. PD-L1 expression is a favorable prognostic factor in early stage non-small cell carcinoma. Lung Cancer 2015; 89: Chen B, Chapuy B, Ouyang J et al. PD-L1 Expression Is Characteristic of a Subset of Aggressive B-cell Lymphomas and Virus-Associated Malignancies. Clin Cancer Res 2013; 19: Ellison AR. Technical Report: Characterization of monoclonal mouse anti-pd-l1 antibody clone 22C3. D29539/rev01/C22282, 2015 Edición 03/16 ( ) P04435ES_01/M3653/ p. 5/4
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