SIGNOS DE ALARMA EN EL HEMOGRAMA SOCIEDAD ESPAÑOLA DE BIOQUÍMICA CLÍNICA Y PATOLOGÍA MOLECULAR

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1 SIGNOS DE ALARMA EN EL HEMOGRAMA SOCIEDAD ESPAÑOLA DE BIOQUÍMICA CLÍNICA Y PATOLOGÍA MOLECULAR Nuevos Parámetros de Serie Roja Qué aporta el hemograma al diagnóstico clínico?

2 Los modernos analizadores reportan MCV y MCHC, y pueden cuantificar la heterogénea distribución tanto del volumen celular (RDW, ADE) como de la concentración celular de Hb (HDW) Desde hace años el recuento de reticulocitos está automatizado, se reportan tanto el número y como los parámetros reticulocitarios (volumen, Hb reticulocitaria) Algunos analizadores pueden cuantificar subpoblaciones eritrocitarias con volumen o concentración de Hb por encima o por debajo de determinados valores (células microcíticas, hipocromas..) Porcentajes de RBC hipocromos son útiles -Diagnóstico diferencial de anemia microcítica -Déficit funcional de hierro -Anemia hemolítica/esferocitosis

3 Reticulocitos Automatización Compañía Instrumento Método Colorante Parámetros Abbott CELLDYN Ruby CELLDYN Sapphire Absorbancia Fluorescencia Nuevo azul metileno Sybr II IRF IRF MCHr MCVr Beckman Coulter Horiba UniCell DxH LH series ABX Pentra DX120 Impedancia, citometría de flujo VCS Impedancia citometríade flujo fluorescencia Nuevo azul metileno Nuevo azul metileno Naranja de tiazol IRF; MRV;HLR;RSf IRF; MRV; MSCV;HLR IRF; MRV; RETH RHbC Siemens ADVIA 120 Absorbancia Oxazine 750 IRF MCVr; CHr Scatter Sysmex XE5000 XN Fluorescencia Polimetina IRF RetHe ΔHe

4 Información avanzada valor añadido Reticulocitos Permanecen en la sangre 1-2 días hasta que se convierten en eritrocitos maduros El contenido de hemoglobina puede reflejar la cantidad de hierro disponible de manera efectiva Refleja la calidad de la eritropoyesis en el periodo inmediato Eritrocitos Permanecen en la sangre días Las diversas subpoblaciones pueden reflejar el status férrico en las pasadas semanas MCV MCH son las medias del conjunto de RBC; las % de subpoblaciones indican la contribución de los diversos tipos de RBC a las medias

5 Se cuentan el número de pulsos de fL, y el número de partículas que tienen el mismo tamaño y se trasladan los resultados a una gráfica de Volumen / Número de células Se obtiene el histograma de RBC, que proporciona: Número de RBC :el número de pulsos dentro de este rango de tamaños MCV se corresponde con la media del histograma de RBC RDW o ADE Ancho de Distribución del histograma de RBC: se corresponde con el coeficiente de variación de la curva

6 Porcentajes de Subpoblaciones Eritrocitarias / MCV MCH RBC /L Hb g/l MCV fl MCH pg RDW % Hypo % Micro % IDA ACD/IDA Talasemia IDA Evol Los analizadores basados en los principios del citometría de flujo proporcionan información sobre las características individuales de cada célula, detectando pequeños cambios en el número de células rojas con hemoglobinización y/o el volumen inadecuados Una población uniforme supone una situación estable en las semanas previas Si existen diversas subpoblaciones que contribuyen significativamente a la media MCH se deduce que ha habido cambios significativos en la disponibilidad del hierro para la eritropoyesis

7 La teoría de Mie define matemáticamente la dispersión de luz causada por objetos esféricos El índice de refracción depende de λ, Tamaño y estructura interna del objeto Empleando un láser (λ constante para cada analizador) dispersión es únicamente función del tamaño (VOLUMEN) y del índice de refracción (HEMOGLOBINA) del objeto (RBC) High refractive index Low refractive index

8 Tecnología Technicon Angulo Bajo (2-3grados) Dispersión ángulo bajo 2 o - 3 o (Volumen) Dispersión ángulo alto 5 o - 15 o ( concentración Hb ) Angulo Alto (5-15 grados)

9 Abbott CELLDYNN Sapphire ADVIA Siemens Mie Map

10 Deficit funcional de hierro Zarychanski R, Houston DS. Anemia of chronic disease: A harmful disorder or an adaptive, beneficial response? CMAJ 2008; 179(4):

11 NKF-K/DOQI (Kidney / Disease Outcomes Quality Initiative) Valorar el grado de anemia: Hb Valorar el tipo de anemia: MCV y MCH Valorar la eritropoyesis: Reticulocitos Valorar los depósitos de hierro: Ferritina Valorar la inflamación: PCR Valorar el hierro funcional disponible para la eritropoyesis: Saturación de la transferrina CHr (reticulocyte Hb content) (Siemens) Hypo (% eritrocitos hipocromos) (Siemens)

12 Biomarcadores de hipocromía: Estudio avanzado de la eritropoyesis Thomas W et al. Guideline for the laboratory diagnosis of functional iron deficiency. Br J Hematol 2013; 161: MCH, MCV 1B %RBC Hipocromos 1B Hb reticulocitaria 1B Protoporfirina Zn 1B Examen de MO 1B Ferritina 1 A 1 B stfr 1A Sat transferrina 1 A 1 B Eritropoyetina 1 A Hepcidina ue

13 Biomarcadores de Eritroyesis RBC Hipocromos Hb Reticulocitaria RBC Hipocromos Hb Reticulocitaria media RBC Hipocromos Hb Reticulocitaria equivalente Low Hb density Contenido de Hb Reticulocitaria Expresión Hb reticulocitaria Abreviatura (unidades unidades) Hypo(%) CHr(pg) %HPO HPO(%) MCHr(pg) Hypo He(%) RetHe He(pg) LHD(%) RHCc (pg pg) RHE(pg pg) Compañía Siemens Siemens Abbott Abbott Sysmex Sysmex Beckman Coulter Horiba ABX Mindray Urrechaga E, Borque L, Escanero JF. Biomarkers of hypochromia: the contemporary assessment of Iron status and erythropoiesis. Journal of Biomedicine and Biotechnology

14 Histograma RBC : el mapa de Mie 28 41

15 C. Brugnara Use of reticulocyte cellular indices in the diagnosis and treatment of hematological disorders IntJ ClinLabRes 1998; 28: 1-11

16 Abbott CELLDYNN Sapphire Costa et al. Reference values for new red blood cell and platelet parameters on the Abbott Diagnostics Cell-Dyn Sapphire. Clinical Chemistry and Laboratory Medicine 2012; 50(5): Hoffmann et al. Reference intervals of extended erythrocyte and reticulocyte parameters. Clinical Chemistry and Laboratory Medicine 2012; 50(5):

17 Mujer 34 años, anemia ferropénica severa y su evolución tras tratamiento 19 Marzo 18 Abril

18 Tecnología Sysmex RetHe Hb Reticulocitaria equivalente RBC He Hb Eritrocitaria equivalente

19 Ret He vs CHr Garzia et al. Reticulocyte Hemoglobin Equivalent:An Indicator of Reduced Iron Availability in Chronic Kidney Diseases during Erythropoietin Therapy Laboratoryogy Hematol 2007;13:6-11 Brugnara et al. Reticulocyte Hemoglobin Equivalent (Ret He) and Assessment of Irondeficient States. Clinical Laboratory Hematology 2006; 28: L Thomas et al Reticulocyte hemoglobin measurement comparison of two methods in the diagnosis of iron-restricted erythropoiesis Clin Chem Lab Med 2005;43(11):

20 Ret He control de la terapia Niño de 7 años anemia microcítica hipocroma severa Evolución días tras r-huepo + IV Fe

21 Sysmex XE 5000 Sysmex XN RBC extended Parameters %Hypo He %Hyper He Fracción de Eritrocitos Contenido de Hb< 17 fl Contenido de Hb> 49 fl

22 Sysmex XE 5000 % Hypo-He Diagnosis of Iron Deficiency in Patients Undergoing Hemodialysis M Buttarello et al. Am J Clin Pathol 2010;133:

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24 Anemia microcítica: Diagnóstico diferencial WHO reporta que la anemia afecta a 2,000 millones de personas, 50 % debida a déficit de Hierro. El déficit de Hierro es una de las causas más importantes de morbi-mortalidad en todo el mundo, con alta prevalencia en el Tercer Mundo, donde representa gasto sustancial para los Sistemas de Salud :problemas en el embarazo, poco rendimiento escolar, baja productividad. En caso de Talasemia la anemia microcítica es el resultado de la reducida síntesis de Hb, por defecto genético de los genes de globina. Síndrome talasémicos están entre los defectos genéticos más frecuentes, 1.7 % de la población mundial son portadores de alguna de estas mutaciones. Talasemia es prevalente en el Mediterráneo, Oriente medio, India, Sudeste asiático.

26 Used with permission from Lichtman's Atlas of Hematology,

27 diagnóstico diferencial de anemia microcítica: Mie Map d OnofrioG, ZiniG., RicercaBM, Mancini S, Mango G. Automated measurement of red blood cell microcytosisand hypochromiain iron deficiency and beta-thalassemiatrait. Arch Pathol Lab Med. 1992; 116: Sano Micro < 5 % Hypo< 5 % β talasemia Micro 50.3 % Hypo1.8 % M / H ratio = 28 Déficit de Fe Micro 26.3 % Hypo15.5 % M / H ratio = 1.7

28 A la caza del rasgo (talasémico) escondido. Gibbs G., Am J Clin Pathol 2009; 132:

29 simple inspection.

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31 En el análisis de reticulocitos, el proceso de elución hemoglobínica ( ghosting ) permite detectar los reticulofilamentos y otras inclusiones. Cuando hay una Hb anómala que el sistema no logra sacar del hematíe, se cuantifican esos eritrocitos

32 Anemia Hemolítica/Esferocitosis La anemia hemolítica es un conjunto de trastornos que se caracteriza por un número insuficiente de glóbulos rojos en la sangre, debido a su DESTRUCCION PREMATURA. Se clasifican por el lugar en el que se produce la hemólisis (intra o extravascular), por su duración (aguda o crónica) o por el mecanismo que la provoca: Extracorpusculares La anemia hemolítica inmunitaria ocurre cuando se forman anticuerpos contra los glóbulos rojos del propio cuerpo y los destruyen Autoanticuerpos, aloanticuerpos Causas Ciertas sustancias químicas, drogas y toxinas Infecciones Transfusión sanguínea de un donante no compatible Materno / RN Corpusculares Déficits enzimáticos Hemoglobinopatías Alteraciones genéticas de la membrana Esferocitosis hereditaria Es un trastorno de la membrana de los eritrocitos, que lleva a que dichos glóbulos rojos tengan forma de esfera Está causada por una variedad de mutaciones en los genes que transcriben la espectrina, anquirina y otras proteínas de membrana (banda 3, proteína 4,2). Estas proteínas son necesarias para mantener la forma normal del hematíe,queesladeundiscobicóncavo Estos defectos de membrana disminuye en el glóbulo rojo su elasticidad y deformabilidad, lo que conduce a su destrucción prematura

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35 Screening and confirmation of hereditary spherocytosis in children using a CELL-DYN Sapphire haematology analyser International Journal of Laboratory Hematology 17 APR 2014 DOI: /ijlh Multidimensional optical scatter of sphered erythrocytes can identify and enumerate hyperchromic erythrocytes, which might be used for hereditary spherocytosis(hs) screening. The flow cytometric eosin-5 -maleimide test (EMA) is highly sensitive and specific for HS as a confirmatory method. The aims of this study were to assess the utility of hyperchromic erythrocytes in HS screening and to evaluate the EMA test performed on CELL-DYN Sapphire analyser compared with the reference method.

36 Mullier et al. Additional erythrocyte and reticulocyte parameters helpful for diagnosis of hereditary spherocytosis: Results of a multicenter study. Ann Hematol 2012: 91(2):203-13

37 Resumiendo.. Hemograma avanzado Mejora la calidad del información Refleja la fisiopatología de la enfermedad Informa sobre la calidad de la eritropoyesis Eficiencia Operativa Rápida y automatizada Mejora el proceso del Laboratorio Justificación financiera Mejor información al Clínico del status férrico / mismo coste Armonizar métodos Intervalos de referencia Evaluar utilidad clínica Consenso valores diagnósticos Fiabilidad de los resultados Ayuda al clínico Diagnóstico diferencial Estado real del paciente Selección de pacientes que se benefician de la terapia