PRÁCTICA No 3 MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR SEDIMENTACION DE RITCHIE

Transcripción

1 PRÁCTICA No 3 MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR SEDIMENTACION DE RITCHIE INTRODUCCION: En 1917, Charles y Barthelemy describieron el primer método de concentración por sedimentación utilizando solución salina, éter y formaldehído, años mas tarde en 1948, Richie describió un método semejante, el cual hasta la fecha se sigue utilizando. En evaluaciones comparativas con este método, se ha demostrado su utilidad para el diagnostico de parasitosis intestinales, leves o moderadas. FUNDAMENTO: El empleo del éter y formaldehído, permite con el primero liberar las formas parasitarias de las grasas, por disolución de las mismas, y con el formol se fijan y conservan. La concentración se hace por centrifugaciones sucesivas. REACTIVOS: Cloruro de sodio Q.P. (0.85 g. de NaCl en agua destilada hasta completar un volumen de 100 ml. con la solución Formaldehido en solución Q.P 37.55% (al 10%, colocar en una probeta 10 ml. de formaldehido y completar el volumen a 100 ml. con agua destilada) Éter etílico comercial, Lugol parasicológico MATERIAL Y EQUIPO: 2 Tubos cónicos con tapón 2 Pipeta Pasteur de vidrio larga con bombilla Gasa cortada en cuadros Vaso de precipitados de 50 ml. Porta y cubreobjetos Gradilla, embudo, centrifuga Microscopio compuesto 2 Aplic. de madera MATERIAL BIOLOGICO: Heces en un frasco bien cerrado TECNICA: a) Se hace una suspensión homogénea, agregando agua destilada al frasco contenedor de la muestra. b) Se filtra la solución a través de la gasa colocada en el embudo, recogiendo el filtrado en el tubo cónico. c) Se centrifuga la solución durante un minuto d) Se decanta el sobrenadante y se suspende el sedimento con solución salina, centrifugando, decantando, resuspendiendo las veces necesarias hasta que el sobrenadante quede claro. e) Al último sedimento se le agregan 10 ml. de solución de formaldehído al 10%, se mezcla y se deja reposar durante 10 minutos f) Se añaden después 5 ml. de éter, se tapan los tubos con tapones de caucho y se agitan enérgicamente durante 30 segundos 1

2 g) Se centrifugan durante 2 minutos h) Después de centrifugar se observan 4 capas 1. Éter en la superficie 2. Un tapón de restos fecales 3. Formaldehido 4. Sedimento en el fondo del tubo, conteniendo las formas parasitas a) Se introduce la pipeta Pasteur hasta llegar a la última capa (4), se extrae con cuidado una gota de sedimento, y se coloca sobre un portaobjetos. b) Se añade una gota de lugol y con uno de los ángulos del cubreobjetos, cubriéndolo con el mismo. c) Se observa la preparación en el microscopio con objetivos 10X y 40X d) Informe de Resultados MEDIDAS DE SEGURIDAD: Al mezclar y agitar la suspensión de materia fecal con el éter, el tubo debe destaparse lentamente para evitar que el contenido se proyecte bruscamente hacia el exterior. El área de trabajo deberá estar libre de mecheros encendidos, pues el éter es inflamable. INDICACIONES Y LIMITACIONES: Es un método que tiene la ventaja de concentrar y de no deformar los quistes, huevos y larvas. Concentra adecuadamente los huevos infértiles de áscaris lumbricoides y de trematodos. La principal ventaja de este método es su sensibilidad para detectar infecciones leves. Se usa particularmente cuando se necesita una técnica para evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia. El uso de formaldehido como fijador, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesad, antes de ser examinada. Al efectuarse la concentración por sedimento, las preparaciones resultan más sucias que las obtenidas por flotación. La técnica requiere el uso de más reactivos químicos, por lo que es más costosa su realización. NOTA: SE DEBERA LIMPIAR CON CLORO LAS MESAS AL TERMINAR PRACTICA. LA REPORTE: NOMBRE DEL PACIENTE: RESULTADOS: NOMBRE DEL QUIMICO RESPONSABLE (ESTUDIANTE): REVISADO: EDAD: FECHA: 2

3 PRÁCTICA No 4 MÉTODO COPROPARASITOSCOPICO DE CONCENTRACIÓN POR FLOTACION DE WILLIS INTRODUCCION: No obstante que varios métodos de flotación simple habían sido descritas, como el de Fullerborn y el de Dobell y O Connor fue en 1921, cuando Willis, basado en los anteriores, describió el método que lleva su nombre el cual, dada su sencillez se puede utilizar en trabajos de campo, ya que para realizarlo únicamente se requiere microscopio y laminillas. FUNDAMENTO: Este método se basa en un principio de flotación simple utilizando una solución de cloruro de sodio de una densidad entre 1,200 y 1,250 en el cual, los quistes, huevos y larvas flotan perfectamente. REACTIVOS: Preparación de solución saturada de cloruro de sodio: En un recipiente se vierte agua hasta la mitad y se agrega la sal, disolviéndola hasta que quede sedimento. A continuación se decanta la solución, lo cual corresponde a una solución saturada de cloruro de sodio o también llamada salmuera. MATERIAL Y EQUIPO: Tubos de ensaye Lugol, agua Aplicador de madera Porta y cubreobjetos Microscopio compuesto Gradilla MATERIAL BIOLOGICO: Heces en un frasco bien cerrado TECNICA: a) Se coloca en el recipiente de 2 a 3 gramos de materia fecal, se añade una pequeña cantidad de solución saturada de cloruro de sodio, se homogeniza y se agrega solución hasta el borde del recipiente b) Se coloca un cubreobjetos sobre la boca del recipiente de tal manera que quede en contacto con la suspensión y se deja reposar durante 15 minutos. c) Transcurridos los 15 minutos, se toma el cubreobjetos y se coloca sobre el portaobjetos, el cual se le ha puesto previamente una gota de lugol parasicológico y posteriormente se observa al microscopio con objetivos de 10x y 40x d) Es importante saber que debido a la concentración de la solución, la lectura de las preparaciones se debe de hacer de inmediato para evitar la deformación de las estructuras parasitarias. REPORTE: NOMBRE DEL PACIENTE: RESULTADOS: NOMBRE DEL QUIMICO RESPONSABLE (ESTUDIANTE): REVISADO: EDAD: FECHA: 3

4 PRÁCTICA No 5 MÉTODO DE SEDIMENTACION SIMPLE EN COPAS INTRODUCCION: El procedimiento de decantación en copas es una técnica farmacéutica conocida desde hace muchos años. El objeto de utilizar copas cónicas para el procedimiento es para hacer la separación rápidamente sin deterioro del sedimento. Esta técnica básicamente farmacéutica se ha adaptado para lograr un método de examen coproparasitoscópico de sedimentación eficaz para huevecillos con un peso considerable y que no se obtienen en los CPS de concentración por flotación. FUNDAMENTO: Este método tiene una base física exclusivamente, en la que interviene la fuerza gravitacional en forma natural sobre un homogenado de la materia fecal con agua de la llave, un colorante y un detergente. El verde malaquita sirve para teñir y el detergente sirve para lavar las formas parasitarias REACTIVOS: Solución de detergente al 5% (se pesan 5 gramos de detergente de cualquier marca y se disuelven en 100 mililitros de agua de la llave. El detergente que no se alcance a disolver se deja sedimentar y se decanta el sobrenadante o se deja en el frasco donde se guarda la solución, después del proceso. Solución verde de malaquita al 1% (Se pesa un gramo y se disuelve en 100 ml de agua de la llave. MATERIAL: Aplicadores de madera Copas cónicas de Pipetas Pasteur, con bulbo Embudo, Gasa Porta y cubreobjetos Microscopio MATERIAL BIOLOGICO: Heces en un frasco bien cerrado TECNICA: a) Se homogeniza la materia fecal con agua de la llave y se hace pasar a través de la gasa colocada en el embudo, recibiéndose en la copa cónica. b) Enseguida se colocan 5 ml. de colorante, agitándose con el aplicador. Posteriormente se agregan 5 ml. del detergente en solución y se agita nuevamente. c) Finalmente se completa con agua el volumen de la copa, se deja reposar 15 minutos d) Se decanta el sobrenadante, y se agrega más agua mezclando perfectamente, se deja reposar otros 15 minutos y se decanta nuevamente el sobrenadante. 4

5 e) Con la pipeta Pasteur con el bulbo, se toma del sedimento, se coloca en el portaobjetos y posteriormente se coloca el cubre para observarse en 10X y 40X INDICACIONES Y LIMITACIONES: Este método es ideal para detectar huevecillos de helmintos que generalmente no flotan con las técnicas usuales que utilizan soluciones más densas para tal objeto por ejemplo: huevecillos de trematodos como los de Fasciola Hepática, de cestodos como Taenia sp, de nematodos como los no fecundados de Áscaris Lumbricoides. NOTA: SE DEBERA LIMPIAR CON CLORO LAS MESAS AL TERMINAR PRACTICA. LA ESCRIBE LAS OBSERVACIONES Y DIBUJOS REPORTE: NOMBRE DEL PACIENTE: RESULTADOS: NOMBRE DEL QUIMICO RESPONSABLE (ESTUDIANTE): REVISADO: EDAD: FECHA: 5

6 CÁPSULA DE BEAL PRÁCTICA No 6 INTRODUCCIÓN: Beal y colaboradores publicaron en 1970, una técnica para observación de muestras de contenido duodenal, mediante el uso de una cápsula de gelatina conteniendo un hilo absorbente. Es útil para demostrar la presencia de parásitos que se alojan en el duodeno, siendo menos agresivo que en sondeo duodenal. FUNDAMENTO: La propiedad absorbente del hilo utilizado permite la impregnación del mismo con contenido duodenal, incluyendo los parásitos ubicados en esa zona. MATERIAL Y EQUIPO: Capsula de gelatina tipo farmacéutico vacía Un metro de hilo trenzado de algodón y nylon fijado en un extremo de la capsula. tela adhesiva o cinta scarch, guante de hule Porta y cubreobjetos Pipeta Pasteur con bulbo Microscopio compuesto TÉCNICA: a) El paciente deberá presentarse en ayunas, se le administra la cápsula para su ingestión reteniendo el extremo libre del hilo, el cual se fija a la mejilla con tela adhesiva. a) Transcurridos 60 min. como mínimo, se extrae el hilo mediante tensión suave y sostenida, si llego al duodeno deberá presentar una coloración verde amarillenta. b) Exprimir con los dedos índice y pulgar la porción del hilo impregnada y recibir el producto en el vidrio de reloj. c) Obtener una muestra con pipeta Pasteur y colocarla sobre un portaobjetos, cubrir con una laminilla y observar al microscopio. INDICACIONES Y LIMITACIONES: Útil para el diagnóstico de giardiasis, strongiloides, faciolosis etc. puede causar náusea y vómito y no es recomendable a niños pequeños. REPORTE: NOMBRE DEL PACIENTE: RESULTADOS: NOMBRE DEL QUIMICO RESPONSABLE (ESTUDIANTE): REVISADO: EDAD: FECHA: 6

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11 CONCLUSIONES Este manual de prácticas es muy eficaz para que el estudiante de bachiller con carrera técnica de laboratorista clínico alcance los conocimientos, habilidades y destrezas necesarias para el diagnóstico y procesamiento de materia fecal, mismas que le serán útiles si el egresado se dedica a trabajar en los diferentes laboratorios de análisis clínicos ya sean públicos y privados. Además les será útil si desea continuar sus estudios con la carrera afín con los análisis clínicos, facilitándole el proceso de aprendizaje debido a que son las mismas técnicas que se utilizan en la universidad y laboratorios para la detección de parásitos en las muestras fecales o distintos fluidos. El presente manual tiene las técnicas necesarias para la detección de parásitos de una manera clara y precisa para que el estudiante pueda desempeñar la práctica fácilmente y con poco margen de error además entendible, porque dado la edad de los bachilleres se les dificulta algunas veces la interpretación de algunos textos. Espero que este manual sea útil a la dirección general de educación tecnológica industrial y que se pueda utilizar cuando sea necesario. 11

12 GLOSARIO Material Biológico.- Material extraído de un ser vivo, pueden ser fluidos corporales Materia Fecal o Heces.- Excremento o material coprológico Huevos de helmintos.- Huevecillos de gusanos Helminto.- Gusano Nematelmintos.- Gusanos cilíndricos Platelmintos.- gusanos planos Coproparasitoscópico.- Examen de materia fecal Parasito.- Organismo que vive a expensas de otro sin ofrecer nada a cambio Protozoarios.- Seres de una sola célula que solo se puede observar a través del microscopio Metazoarios.- Organismos que se pueden observar a simple vista Trofozoitos.- Morfología de algunos protozoarios parásitos Quiste.- Forma esférico que adoptan algunos trofozoitos para protegerse del medio ambiente Patología.- Daño, enfermedad Duodeno.- Primer tercio del intestino delgado, yeyuno el segundo e íleon el tercero Giardiasis.- Parasitosis intestinal Decantación.- Verter un líquido a otro recipiente REFERENCIA CONSULTADA: SILVIA ROSA CARRIZOZA: Manual teórico práctico Universidad Autónoma de Sinaloa 12