EVALUACIÓN DE CUATRO ADSORBENTES Y/O INACTIVADORES DE MICOTOXINAS EN DIETAS DE POLLOS DE ENGORDA CONTAMINADAS CON OCRATOXINAS

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1 Fuente: Memorias del XXXII Convención Nacional de la Asociación Nacional de Especialistas en Ciencias Avícolas, 25 al 28 de abril de 2007, Acapulco Guerrero. EVALUACIÓN DE CUATRO ADSORBENTES Y/O INACTIVADORES DE MICOTOXINAS EN DIETAS DE POLLOS DE ENGORDA CONTAMINADAS CON OCRATOXINAS *Cevallos Gordon Ana Luisa 1, Ávila González Ernesto 1, Rosiles Martínez René 2, Flores César 3. 1 CEIEPA-UNAM, 2 Dep. Toxicología- UNAM, 3 UBIPRO-UNAM. RESUMEN El presente trabajo, tuvo por objetivo evaluar la capacidad de adsorción y/o inactivación de ocratoxinas de cuatro productos comercializados en México para la avicultura. Se utilizaron 240 pollitos de un día de edad; repartidos en 6 tratamientos, con 4 réplicas de 10 aves cada uno. El 1 tratamiento fue el testigo negativo (sin ocratoxinas), el 2 fue el testigo positivo (con 500µg kg -1 de ocratoxinas), el 3,4, 5 y 6 fueron iguales al 2 pero adicionados cada uno de los productos a evaluar, de acuerdo a las dosis recomendadas por los fabricantes. Las aves fueron alimentadas por 28 días, y se evaluaron semanalmente los parámetros productivos (peso corporal, consumo de alimento y conversión alimenticia) sin encontrar diferencia estadística en ningún tratamiento. Diariamente se midió el consumo de agua, resultando estadísticamente iguales. Al final de la 3 y 4 semana se evaluó la coloración amarilla de la piel sin encontrar diferencia estadística. A final de la 4 semana se hicieron necropsias y no se observaron cambios macroscópicos. Se concluye que tanto la dosis de ocratoxinas (500µg kg -1 ), así como los productos comerciales en estudio no afectan los parámetros productivos, el consumo de agua, ni la coloración amarilla de la piel de las aves. Es importante indicar que Ocratoxina A es la más tóxica de las 7 ocratoxinas conocidas, por lo cual se recomienda analizar ésta, ya que concentraciones de ocratoxinas totales no necesariamente producen problemas o pérdidas económicas a la industria. Palabras clave: Ocratoxinas Adsorbentes Pollo de engorda 1

2 ANTECEDENTES Desde el punto de vista económico la alimentación en las aves representa entre el 60 y el 70% de los costos de producción. De acuerdo con la Organización para la Alimentación y la Agricultura de las Naciones Unidas (FAO), un 25% de las cosechas a nivel mundial están contaminadas con algún tipo de Micotoxinas (Toxinas producidas por hongos) conocidas, mientras que un mayor porcentaje podría estar contaminado por toxinas que todavía no han sido plenamente identificadas; resultando pérdidas incalculables para la producción animal, ya sea por desecho de las mismas o porque reducen el valor nutritivo de las raciones. Las Micotoxinas más importantes desde el punto de vista agroalimentario son las Aflatoxinas, Ocratoxinas, Fumonisinas, Patoina, Zearalenona, Citrinina, Fumonisinas, Tricoticenos, Toxina T 2, Vomitoxina, entre otras. Ninguna región del mundo escapa a la presencia de estos enemigos silenciosos en los alimentos. Las micotoxinas pueden provocar efectos agudos o crónicos en diversas especies. La presencia de éstas en el alimento causa enfermedades en los animales que los consumen, producen severos trastornos en la producción, incrementan el período de crianza, disminuyen la ganancia de peso, reducen la producción de carne y huevos, predispone a la presentación de otras enfermedades (coccidiosis, marek, gumboro, etc.) ya que afecta el sistema inmunológico, hasta ocasionar la muerte. Además tienen importancia en salud pública ya que los residuos de micotoxinas en los productos de origen animal causan severos daños en el hombre al consumirlos. Las Ocratoxinas fueron descubiertas en Sudáfrica por Van der Merwe en 1965, desde ahí se ha encontrado en diversos cereales, cerveza, vino, café, cacao, especias, y otros productos. Son toxinas producidas por hongos de la sección circomfanti (hongos filamentosos superiores), del género Aspergillus, siendo la especie más importante A. ochraceus. Otras especies de importancia son A. sulfureus, A. melleus. Además las ocratoxinas son 2

3 producidas por especies del género Penicillium como P.viridicatum, P. commune, entre otras especies. Hay 7 tipos de ocratoxinas, siendo la Ocratoxina A (OA) la más importante por ser la más comúnmente encontrada; pero sobre todo, por ser la más tóxica para las aves, principalmente para los pollitos en crecimiento. El órgano diana para la OA, es el riñón, pero también es hepatotóxico, inmunotóxico y teratogénico. Los principales mecanismos de toxicidad de la OA son: Inhibición de la síntesis de proteína. Inhibición de la respiración mitocondrial. Peroxidación lipídica. Secuestro del Ca intracelular. Cambios en la función y en el fenotipo de las células, sin destrucción ni daño celular. Los pollitos con ocratoxicosis presentan depresión, emaciación, deshidratación y diarrea. El crecimiento se ve reducido, aumenta la conversión alimenticia, se presenta una mala pigmentación y la mortalidad aumenta por falla renal. Los pollitos sobrevivientes se quedan enanos, con emplume pobre, presentan anemia y los tiempos de coagulación se ven aumentados. La OA tiene un efecto inmunosupresor; produce atrofia de los órganos linfoides (timo, bolsa de Fabricio). Causa depleción celular y regresión de linfocitos en los órganos linfoides afectando significativamente la inmunidad celular. Produce además disminución de la inmunidad humoral, con reducción en la circulación de inmunoglobulinas. Una variedad de métodos físicos, químicos y biológicos se han usado para la descontaminación de micotoxinas de las cosechas agrícolas, pero han tenido un éxito limitado. Una de las prácticas más apropiadas, es el uso de adsorbentes no nutritivos, como 3

4 los secuestrantes de micotoxinas, y éstos inhiben la absorción en el tracto gastrointestinal, minimizando de esta manera los efectos tóxicos. Los adsorbentes no son fuente de nutrientes, así como tampoco dejan residuos porque no se absorben. Por tal motivo, se deben buscar productos de alta eficiencia con bajos niveles de inclusión para optimizar el resultado y evitar el efecto de dilución del valor nutricional de las materias primas contaminadas. No existe un nivel de micotoxina que se considere seguro, ya que el riesgo depende no solamente de los niveles de una micotoxina, sino de la presencia de otras. En la actualidad las ocratoxinas continúan siendo una amenaza importante para la producción de aves y para producción animal en general. OBJETIVOS - Evaluar el comportamiento productivo de pollitos alimentados con cuatro dietas contaminadas con 500ppb ocratoxinas (500µg kg -1 ) por 28 días utilizando cuatro diferentes adsorbentes de micotoxinas. - Valorar la intensidad de la pigmentación de la piel de las aves en los diferentes tratamientos. - Determinar el consumo de agua, durante el tiempo de exposición a las dietas contaminadas. MATERIALES Y MÉTODOS PRODUCCIÓN DE OCRATOXINA En el laboratorio de Micología de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la UNAM, se procedió a cultivar en Agar Dextrosa Sabouraud una cepa de Aspergillus ochraceus (productora de ocratoxina), por 10 días a 30º C. Posteriormente se inoculó 4 x 10 3 esporas de Aspergillus ochraceus a botellas de vidrio que contenían 200g de trigo previamente esterilizado (121º, 15Lb de presión, por 20min) y con 25% de humedad. 4

5 Se cultivó por 25 días a temperatura ambiente en un lugar oscuro. Los tres primeros días se dejó en reposo, y a partir del cuarto se agitó diariamente, para evitar apelmazamiento y conseguir un crecimiento uniforme. Se procedió a la inactivación del hongo mediante esterilización en autoclave, y posteriormente a la determinación y cuantificación de ocratoxinas en dicho inóculo, mediante ELISA. EVALUACIÓN IN VIVO La prueba in vivo se desarrolló en el Centro de Enseñanza, Investigación y Extensión en Producción Avícola CEIEPA, de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Nacional Autónoma de México UNAM. Ubicado en Santiago Zapotitlán, Delegación Tláhuac, México D.F; México. Se utilizó 240 pollitos de engorde de 1 día de edad, los mismos que fueron asignados en 6 tratamientos (cuadro 1), con cuatro repeticiones de 10 aves cada uno. Cuadro 1. Diseño de los tratamientos Tratamientos Ocratoxina A Producto (µg kg -1 ) Comercial Identificación 1 0 Ninguno Testigo Negativo Ninguno Testigo Positivo Klin sil Producto A Toxisorb Producto B Micofyx Plus Producto C Mycosorb Producto D Cada tratamiento con sus respectivas réplicas fueron alimentados por 28 días con un alimento balanceado experimental, sorgo pasta de soya. Para su formulación se utilizó el paquete computacional Nutrion. A las dietas se les añadió el trigo contaminado hasta llegar a 500µg kg -1 de ocratoxinas, excepto al control negativo. 5

6 PARÁMETROS PRODUCTIVOS Al final de cada semana, se evaluó el peso corporal, consumo de alimento y conversión alimenticia en todos los tratamientos. Además, diariamente se midió el consumo de agua. PIGMENTACIÓN EN PIEL La evaluación de la pigmentación amarilla se realizó al concluir el experimento, utilizando el Colorímetro de Reflectancia Minolta. La medición se realizó en la zona conocida como vena de la grasa. ANÁLISIS ESTADÍSTICO Al final del experimento se realizó un análisis de varianza para verificar los efectos de los tratamientos, así como una comparación de medias empleando la prueba LSMeans. Se utilizó el paquete estadístico SAS. RESULTADOS Los resultados obtenidos de los parámetros en estudio, se pueden observar en los cuadros 2, 3, 4, 5 y 6. Cuadro 2. Peso semanal de pollos de engorda alimentados con 500 µg kg -1 de ocratoxinas. Tratamiento 1 Semana 2 Semana 3 Semana 4 Semana Control (-) 155ª 369ª 724ª 1214ª Control (+) 153ª 367ª 718ª 1226ª Klin Sil 155ª 373ª 739ª 1298ª Mycofix Plus 147ª 364ª 651ª 1113ª Mycoad 150ª 367ª 710ª 1174ª Toxisorb 151ª 365ª 697ª 1296ª P= P= P= P=

7 Cuadro 3. Consumo Semanal de Alimento de pollos de engorda alimentados con 500 µg kg -1 de ocratoxinas. Tratamiento 1 Semana 2 Semana 3 Semana 4 Semana Control (-) 126ª 316ª 567ª 805ª Control (+) 128ª 312ª 574ª 819ª Klin Sil 128ª 318ª 574ª 826ª Mycofix Plus 119ª 316ª 511ª 728ª Mycosorb 121ª 316ª 546ª 798ª Toxisorb 124ª 317ª 567ª 784ª P= P= P= P= Cuadro 4. Conversión Alimenticia de pollos de engorda alimentados con 500 µg kg -1 de ocratoxinas. Tratamiento 1 Semana 2 Semana 3 Semana 4 Semana Control (-) 1,14ª 1,35ª 1,48ª 1,54ª Control (+) 1,17ª 1,36ª 1,50ª 1,55ª Klin Sil 1,15ª 1,36ª 1,47ª 1,47ª Mycofix Plus 1,17ª 1,37ª 1,57ª 1,66ª Mycosorb 1,14ª 1,35ª 1,52ª 1,65ª Toxisorb 1,15ª 1,35ª 1,53ª 1,43ª P= P= P= P=

8 Cuadro 5. Consumo Semanal de Agua de pollos de engorda alimentados con 500 µg kg -1 de ocratoxinas. Tratamiento 1 Semana 2 Semana 3 Semana 4 Semana Testigo (-) 64ª 116ª 193ª 212ª Testigo (+) 67ª 120ª 197ª 226ª Klin Sil 67ª 126ª 201ª 226ª Mycofix Plus 67ª 117ª 174ª 201ª Mycosorb 66ª 117ª 188ª 207ª Toxisorb 64ª 117ª 201ª 221ª P= P= P= P= Cuadro 6. Pigmentación Amarilla de la Piel de pollos de engorda alimentados con 500 µg kg -1 de ocratoxinas. Tratamiento 3 Semana 4 Semana Testigo (-) 6.98ª 13.27ª Testigo (+) 6.85ª 14.66ª Klin Sil 6.66ª 13.86ª Mycofix Plus 6.36ª 13.42ª Mycosorb 6.53ª 13.89ª Toxisorb 6.79ª 14.12ª P= P= CONCLUSIONES Los tratamientos no presentan estadísticamente diferencias en cuanto a su peso corporal, consumo de alimento, conversión alimenticia, consumo de agua, así como la pigmentación amarrilla de la piel; por lo que se concluye que con 500 µg kg -1 de ocratoxinas en el alimento no fue suficiente para producir un cuadro de ocratoxicosis. 8

9 Los productos comerciales no afectaron los parámetros productivos, el consumo de agua, ni la pigmentación amarilla de la piel. Se recomienda analizar la concentración de Ocratoxina A (OA) en los alimentos, más no la cantidad total de Ocratoxinas, ya que OA es la más tóxica, y cantidades altas de ocratoxinas en los alimentos, no necesariamente producen daño y/o pérdidas económicas a la industria. REFERENCIAS 1. Doyle, M. P., R. S Applebaum, R. E. Brackett, and E.H. Marth Physical, chemical and biological degradation of mycotoxins in foods and agricultural commodities. J. Food Prot. 45: FAO, Manual sobre la aplicación de análisis de peligros y de puntos críticos de control (APPCC) en la prevención y control de los micotóxicos. Estudio FAO Alimentación y Nutrición Nº 73. Pág García Ricardo. Evaluación de secuestrantes de micotoxinas para reducir la toxicidad en dietas para pollo de engorda contaminadas con cultivos de Aspergillus ochraceus y Fusarium tricinctum productores de ocratoxina y toxina T-2. Tesis de Grado Maestría. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootencia. UNAM. México DF Leeson S et al. Poultry Disorders and Micotoxins. University Books. Canadá Ramos, A.J., J. Fink-Gremmels, and E. Hernández Prevention of toxic effects of mycotoxins by means of nonnutritive adsorbent compounds. J. Food Prot. 59: Stoycho et al. Studies on some feed additives living partial protection against ocratoxin A toxicity in chicks. Toxicology Letters 135 (2002)