ANALISIS COMPARATIVO ENTRE DOS PROTOCOLOS DE RESINCRONIZACION DE CELOS A TIEMPO FIJO EN VAQUILLONAS HEREFORD

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1 UNIVERSIDAD NACIONAL DE CÓRDOBA FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS ESCUELA PARA GRADUADOS INSTITUTO DE REPRODUCCIÓN BOVINA CÓRDOBA (IRAC) ANALISIS COMPARATIVO ENTRE DOS PROTOCOLOS DE RESINCRONIZACION DE CELOS A TIEMPO FIJO EN VAQUILLONAS HEREFORD Oscar A. Christiani Para optar al Grado Académico de Especialista en Reproducción Bovina Córdoba Año 2016

2 RESUMEN En este trabajo se comparó la eficacia de dos protocolos de resincronización de celos a tiempo fijo posterior a una inseminación a tiempo fijo (IATF). Se utilizaron 490 vaquillonas Hereford de 18 meses de edad, que fueron divididas al azar en dos grupos. El día 23 posterior a la IATF (Día 0), las vaquillonas del Grupo 1 (EB 23; n=223) recibieron 1 mg de Benzoato de Estradiol (EB, Von Frankeen, Argentina) junto con la aplicación de un dispositivo con 0,6 g de progesterona (Von Franken, Argentina.). Las vaquillonas del Grupo 2 (GnRH 23; n=245) recibieron el día 23; 0,0105 mg de acetato de buserelina (GnRH, Biogénesis, Argentina), junto con la aplicación de un dispositivo intravaginal con 0,6 g de progesterona. Los dispositivos fueron retirados el Día 30 en ambos grupos, en donde además, se realizó el diagnóstico de preñez. Las vacas que resultaron vacías recibieron la administración de 1 mg de Cipionato de Estradiol (Von Franken, Argentina) y 150 ug de D (+) clorprostenol (Dextrogenol, Von Franken, Argentina). Todas las vaquillonas fueron re-inseminadas a tiempo fijo a las 52 hs de retirado el dispositivo. Durante el transcurso de estos tratamientos las vaquillonas estuvieron comiendo siempre en un mismo lote a base de Grama rhodes. Mediante la aplicación de este programa se obtuvo una preñez final del 76,8% en el rodeo por el método de IA, con una preñez del 55 % en la 1 IA y 21,8 en la 2 IA en un plazo de 32 días desde la primer IA hasta la Re - IATF. Logrando de este modo más preñeces de toros con alta calidad genética, produciendo una mejora en el rodeo, mayor cantidad de terneros de cabeza de parición y mayor cantidad de Kg de carne por hectárea. En conclusión, ambos tratamientos son efectivos a la hora de la resincronización en vaquillonas Hereford de 18 meses de edad, con porcentajes bajos de reabsorción y buena tasa de preñez al final de la misma. Palabras claves: Resincronización, Benzoato de Estradiol, Progesterona, Acetato de buserelina, cipionato de estradiol, clorprostenol.

3 INTRODUCCIÓN Modelos de Resincronización a tiempo fijo en vaquillonas Hereford La necesidad de inseminar el mayor número de animales en un período relativamente corto de tiempo implica la utilización de protocolos que permitan sincronizar el retorno al estro de los vientres que resultan vacios de la inseminación artificial a tiempo fijo (IATF). En los últimos años se ha avanzado en el desarrollo de nuevos tratamientos para la resincronización a tiempo fijo (Re-IATF). Estos estudios fueron inicialmente evaluados por investigadores de la Universidad de la Plata, quienes desarrollaron un protocolo al que llamaron Resynch, este consiste en la aplicación de GnRH el día 18 después de la IATF, luego el Día 25 se realiza el diagnóstico de gestación y a los vientres vacios se les inyecta 150 ug de D (+) clorprostenol. El Día 27 los animales reciben una dosis de GnRH y son Re inseminados en el Día 28. En un trabajo realizado por Chesta et al., (2007), compararon la tasa de preñez utilizando EB o GnRH, para la inducción de la ovulación en el tratamiento de resincronizacion para una segunda IATF en vacas de carne. Los resultados demostraron que tanto el EB como la GnRH pueden utilizarse con éxito para inducir la ovulación en vacas re-sincronizadas. Mientras que en un estudio realizado por Cutaia et al., (2002,2006) en vaquillonas de 15 meses de edad, se les aplicó 0,5 mg BE entre los días 13 y 21, los resultados muestran que se aumenta el número de vaquillonas que retornan al celo pero a expensas de una reducción en el porcentaje de preñez luego de la primo IA, debido a que en esos días el Benzoato de Estradiol (BE) genera Luteólisis y por ende produce muerte embrionaria en vaquillonas. Baruselli, et al.,( 2012) demostraron que con la utilización de 1 mg de Benzoato de estradiol en los días 23 y 30 después de la IA en vaquillonas Bos Indicus, obtenían buenos resultados de Preñez.

4 Varios de estos protocolos de resincronización con EB (Madero, et al., 2007) y GnRH son realizados en vacas y vaquillonas de carne en los días 12, 13 o 14 post IA (Vargas, et al, 2005). Pocos trabajos comparan los protocolos con la aplicación de dispositivos y BE o GnRH, en los días 21,22 o 23 post IA. Por tal motivo se realizó este trabajo para ver cómo actúa el Benzoato de Estradiol frente a la GnRH, en los días 23 post IA, comparando la tasa de Preñez y la de reabsorción embrionaria. OBJETIVO GENERAL Determinar cuál de los dos protocolos es más eficiente, en cuanto a Tasa de Preñez y Tasa de Reabsorción embrionaria en una resincronización a tiempo fijo en vaquillonas Hereford de 18 meses de edad. OBJETIVOS ESPECIFICOS 1.- Comparar la tasa de preñez en los dos protocolos de resincronización de celos a tiempo fijo. 2.- Comparar el porcentaje de pérdidas embrionarias de la primo IATF. MATERIALES Y MÉTODOS ANIMALES Y LUGAR DE TRABAJO Este estudio se realizó en un campo al Noroeste de la provincia de Buenos Aires, una ciudad llamada Cañada Seca, en el distrito de General Villegas. El lugar de trabajo es muy confortable con buenas instalaciones. Este ensayo se llevó a cabo en el Establecimiento Caldenes SA, localizado en Cañada Seca, partido de General Villegas, al Noroeste de la Provincia de Buenos Aires. Se utilizaron 490 vaquillonas Hereford de 18 meses de edad con una condición corporal de 3-3,5 (escala 1 al 5).Estas mismas se encontraban alimentándose a campo natural hasta la IATF y luego fueron hasta fin de servicio a una Grama rhodes.

5 Las vaquillonas recibieron un control ginecológico pre servicio para descartar las no aptas (sin desarrollo, malformaciones, freemartinismo, etc.).las vaquillonas que resultaron aptas, se clasificaron en cíclicas con tono uterino, cuerpo lúteo (CL) o folículo mayor a 10 mm por el método de palpación.del total de las vaquillonas (n= 490), 2 fueron rechazadas por infértil y 20 vaquillas no entraron a la sincronización. Todas las vaquillonas recibieron el Día 0 un dispositivo intravaginal impregnado con progesterona( Dispocel Monouso 0,6 mg P4, Von Frankeen, Argentina) y se les administró 2mg de Benzoato de Estradiol (BE, Von Franken, Argentina), el Día 7 se retiraron los dispositivos (0 % de pérdidas de dispositivos) y se les administró150ug de D (+) clorprostenol (Dextrogenol,Von Franken, Argentina) junto con 1mg de CEP (Isnaldo L. et al,2007) y fueron inseminadas a las 52 hs de retirado los dispositivos,con semen congelado/descongelado de un mismo toro de la raza Hereford, tanto en la IATF como en la RE-IATF y fueron inseminadas por dos técnicos. El Día 23 post inseminación las vaquillas fueron divididas aleatoriamente en dos grupos. Las vaquillonas del Grupo 1 (BE 23), recibieron 1 mg de Benzoato de Estradiol (BE, Von Frankeen), por la vía intramuscular (im) en la zona glútea, también recibieron junto con la aplicación de un dispositivo intravaginal de progesterona (Dispocel monouso 0,6 mg P4, Von Frankeen, Argentina). Mientras que las vaquillonas del Grupo 2 (GnRH 23), recibieron el día 23 post inseminación, mg de acetato de buserelina (Gonaxal, Biogénesis Bagó, Argentina), junto con la aplicación de un dispositivo intravaginal de progesterona (Dispocel monouso 0,6 mg P4, Von Frankeen, Argentina). El Día 30 post inseminación, se retiraron los dispositivos en ambos grupos y se realizó el diagnostico de gestación de la primera IATF, la misma se llevó a cabo por el métodode ultrasonografia (Chison, 600, modo B, transductor lineal, 5 MHz). Todas las preñadas en la 1 IATF, fueron confirmadas nuevamente a los 62 días cuando se determina la Preñez de la RE-IATF con 30 días de gestación. Las vacas que resultaron vacías recibieron la administración de 1 mg de CEP (Cipionato de Estradiol, Von Franken, Argentina) y 150 ug de D (+) clorprostenol (Dextrogenol, Von Franken, Argentina). La re-inseminación a tiempo fijo (Re-IATF) se realizó a las 52 Hs de retirado el dispositivo.

6 Figura 1: Protocolo se resincronizacion con Benzoato de Estradiol grupo BE 23. Va al pie de la figura. Figura 2: Protocolo de resincronizacion con GnRH grupo GnRH 23. Idm anterior. ANÁLISIS DE DATOS Los datos se analizaron estadísticamente mediante los programas Statview (Abacus Concepts, 1996) e InfoStat (InfoStat, 2011). Para el análisis de las variables tasa de preñez, tasa de muerte embrionaria, inseminadores, estructuctura ovárica al momento del inicio de los tratamientos se utilizó el procedimiento de modelos lineales generalizados y mixtos (MLGM) para familia de datos binarios. Para determinar diferencia estadística se utilizó un alfa de 0,05. RESULTADOS En la Tabla 1 se muestran los resultados de la tasa de preñez de la resincronización de celos a tiempo fijo según los grupos de tratamiento. La tasa de preñez general fue del 49,5% (104/212). A pesar de que las vaquillonas del Grupo GnRH-23 tuvieron un mayor porcentaje de preñez que las vaquillonas del Grupo BE-23 (51% vs 48% respectivamente) no se encontraron diferencias significativas (P>0,05).

7 Tabla 1. Resultados de la 2 IATF (Re IATF). GRUPO N PREÑEZ 2 IA EB % (47/99) GnRH %(57/113) Otra variable analizada es el porcentaje de reabsorción de la IATF, comparando los dos grupos de resincronización de celos, en donde no se encontraron diferencias significativas (P>0,05). El lote de vaquillonas del Grupo EB-23 tuvieron un 9% de reabsorción (11/124) mientras que las vaquillonas del Grupo GnRH-23 tuvieron un 7% de reabsorción (9/113; Tabla 2) Tabla 2. Resultados de la reabsorción embrionaria a la 1 IATF GRUPO N PREÑEZ 1 IA REAB 1 IA EB % (124/223) 9% (11/124) GnRH % (132/245) 7% (9/132) La Tasa de preñez en la 1 IATF, fue del 54,7 % (256/468).El grupo BE-23 la tasa de preñez fue del 56% (124/223), mientras que el grupo GnRH-23 la tasa de preñez fue de 54% (132/245; Tabla3). No se encontraron diferencias significativas entre los dos grupos (P>0,05). Tabla 3. Resultados de la 1 IATF GRUPO N PREÑEZ 1 IA EB % (124/223) GnRH % (132/245) Por otro lado, la tasa de preñez final sobre las468 vaquillonas Hereford de 18 meses de edad fue de 76,8 %, 360 quedaron preñadas, 256 (55%) de la IATF y 104 (21,8%) de la Re-IATF.

8 La tasa de preñez final de las vaquillonas del Grupo EB-23 fue de 76,6% (171/223) mientras que las vaquillonas del Grupo GnRH-23 la tasa de preñez final fue del 77,1% (189/245; Tabla 4). No hubo diferencia significativas entre los grupos (P>0,05). Tabla4. Resultado Global de las dos IATF GRUPO N PREÑEZ 1 IA N PREÑEZ 2 IA EB % (124/223) 99 48% (47/99) GnRH % (132/245) %(57/113) TOTAL PREÑEZ 76,6% (171/223) 77,1% (189/245) Los análisis estadísticos demuestran que no hubo diferencia significativa (P>0,05). DISCUSIÓN Este trabajo fue diseñado para comparar dos protocolos de resincronización en el Día 23 post inseminación en vaquillonas Hereford de 18 meses de edad, ver su eficacia y el porcentaje de reabsorción que producen frente a la primer IATF. Ambos protocolos resultaron ser efectivos frente a la resincronización de las vaquillonas, logrando buenos resultados de preñez y un porcentaje de reabsorción aceptable. Cutaia et al., (2001; 2005) evaluó la sincronización de los retornos al celo en vaquillas que previamente recibieron una IATF. Trece días después de la IATF las vaquillas fueron divididas en dos grupos, un control y el otro grupo fue resincronizado con un DIV-B mas 1 mg de EB, el día 20 se retiro el dispositivo, al día siguiente se dio EB y se realizo la detección de celo e IA. Observo un mayor número de animales que retornaron al celo en el grupo resincronización que en el grupo control. No encontraron diferencias significativas en el porcentaje de preñez final, pero el porcentaje de preñez a primo inseminación fue menor en el grupo resincronización. Aumentó el número de vaquillas que retornan al celo pero a expensas de una disminución en el porcentaje de preñez luego de la primo inseminación, probablemente debido al efecto luteolítico del EB en esta categoría de animales. El autor no recomienda el uso de EB para la resincronización de vaquillas, ya

9 que consideran que la aceptable tasa de resincronización que se obtiene con la sola reutilización del dispositivo no justifica correr el riesgo de inducir luteólisis al agregar una inyección de 1 mg EB en el día 13 pos- inseminación en esta categoría de animales. Otro trabajo con detección de celo fue desarrollado por Callejas et al. (2005) y evaluó el efecto de la aplicación de EB en la resincronización de los retornos, sobre el porcentaje de preñez a la IATF y general -IATF + retorno-. Trabajo con vacas Angus secas, que fueron IATF. Luego de la misma asigno los animales a tres grupos de trabajo: probando EB el día 22, segundo grupo día 30 y el tercer grupo fue control, en los tres grupos se realizo detección de celo e IA. Concluyo que el uso del EB en los días 22 y 30 en los tratamientos de resincronización de los retornos, no se afecto el porcentaje de preñez a la IATF y no genera perdida embrionaria. Al igual que el presente estudio en vaquillonas Hereford tampoco produjo pérdidas embrionarias tanto con EB como con GnRH. Balla et al., (2005) con el objetivo de evaluar el impacto de una dosis menor de EB en los programas de resincronización de celos en vaquillas, realizaron un experimento con vaquillas Brangus y Braford trece días más tarde de la IATF recibieron un CIDR-B, fueron divididas al azar un grupo recibió 0.5 mg de EB mientras que el segundo grupo no recibió nada. Concluyeron que la utilización de 0,5 mg EB -en vaquillas- en el momento de la reinserción del CIDR, no afecta la presentación de los celos ni las tasas de concepción de las inseminaciones a tiempo fijo. La utilización de 1mg EB en vaquillonas Hereford en el Día 23 tampoco afectó la tasa de concepción. Debido a que los primeros protocolos que se desarrollaron para la resincronización de celos eran con detección de celos, operativamente es dificultoso, ya que en aquellos casos en donde la cantidad de animales a inseminar eran numerosos se complicaban los trabajos de detección de celos repercutiendo en el porcentaje de preñez. Además, otro inconveniente que se generó con este tipo de protocolos es que al utilizar 1 mg de EB junto con la aplicación de un dispositivo intravaginal usado entre los días 13 a 16 generaba una gran cantidad de pérdidas embrionarias.(bó, et al, 2007) A partir de estos problemas, diferentes autores estudiaron variantes para poder eliminar la detección de celos en las re inseminaciones y sin afectar las preñeces de la primo IATF (Anderson, et al, 2010)

10 En el caso de Domínguez et al., (2001) evaluaron un protocolo de IATF utilizando implantes de Norgestomet seguido de un protocolo Resynch, en vacas con cría. Obtuvieron buenos porcentajes de preñez tanto IATF como en la resincronizacion obteniendo una muy buena tasa de preñez final. La utilización de GnRH en la resincronización de vaquillonas Hereford no afectó la tasa de preñez a la IATF, ni en la resincronización obteniendo buenos resultados finales. Carballo, et al., (2007) realizo un trabajo de resincronizacion en vaquillonas Braford y Brangus comparando diferentes dosis de progesterona. La resincronizacion la realizo el día 16 post IA, el día 21 retiro dispositivos y se aplico GnRH, y obtuvieron buenos resultados de preñez. Cutaia et al., (2007), diseño un protocolo de resincronización que compara la tasa de preñez utilizando EB o GnRH para la inducción de la ovulación en el tratamiento de resincronización para una 2º IATF en vacas secas. En el Día 16 se reinsertaron los dispositivos a todas las vacas. El Día 21 se les aplicó GnRH y se retiraron los dispositivos a los 7 días las vacías fueron divididas para recibir EB o GnRH e IA. Los resultados de preñez final con EB fue de 76,5 % mientras con GnRH fue de 78,3% esto demuestra que tanto el EB como la GnRH pueden utilizarse con éxito para inducir la ovulación en vacas resincronizadas. En el trabajo de resincronizacion de vaquillonas con la utilización de EB y GnRH, en el Día 23 se obtuvieron similares resultados de preñez final, llegando a la misma conclusión que dicho autor. Por otro lado Baruselli et al (2012), realizaron un trabajo en resincronizacion en ganado Bos Indicus, en el día 22 después de la primer IATF y en el día 30 después de la primer IATF. Estos dos trabajos de resincronizacion son a tiempo Fijo con el objetivo de disminuir el fallo de la detección de celo.

11 Figura 3: Protocolos de Resincronizacion en los días 22 y 30 después de la primer IATF Este tipo de manejo elimina la necesidad de observación de celo después de la IATF y reduce el número de toros necesarios para el repaso y aumento la cantidad de terneros nacidos por IA. También compararon tres diferentes manejos: 1) servicio con monta natural (MN), 2) IATF con MN, y 3) IATF más resincronizacion. Se observó que la tasa de preñez a los 42 días fue mayor en aquellos animales que recibieron IATF mas repaso con monta natural y IATF mas Resincronización que aquellos animales que solo recibieron monta natural (MN).Sin embargo no hubo diferencia entre las tres en la tasa de preñez final. En conclusión a pesar de la misma tasa de preñez final la utilización de IATF y de RE-IATF anticipa el intervalo parto-concepción, mejorando la tasa de preñez dentro de los primeros 45 días. Otro autor Bartolome et al (2009), realizo un trabajo de resincronizacion en ganado lechero, en los días 23 post IA. Comparo dos grupos uno con GnRH el dia 23 y el otro con ECP el día 23. Observo que no hubo diferencia en las tasas de preñez en los días 30,55 y 90 de realizada la IA. Mientras que las perdidas embrionarias sometidas a estos dos tratamientos no fueron diferentes (P>0,15). Lo mismo se observo en el trabajo de resincronizacion en vaquillonas Hereford. Varios trabajos de resincronizacion de diferentes investigadores fueron realizados antes del día 23 post inseminación, la discusión del trabajo es la resincronizacion al día 23, para demostrar que en esos días del ciclo, tanto la GnRH como el Benzoato de Estradiol no realizan luteólisis y generan buena tasa de Preñez.

12 CONCLUSIONES Frente a estos resultados se llegó a la conclusión de que la utilización tanto de EB o GnRH 23 días después de la IATF junto con la inserción de un dispositivo intravaginal para la resincronización de celos para Re-IATF es posible, ya que se obtienen buenos resultados de preñez sin generar reabsorción embrionaria, por este motivo cualquiera de los dos protocolos pueden usarse en vaquillonas Hereford de 18 meses de edad. BIBLIOGRAFÍA Anderson L., Análisis comparativo de resultados obtenidos en programas de inseminación artificial a tiempo fijo y resincronizacion de celos en rodeos de carne. Balla, E., Maraña Peña, D., Peres, L. C., Pincinato, D., Tribulo R., Bó, G. A.; Efecto de la dosis de Benzoato de Esradiol en el momento de la reinserción del CIDR-B en un programa de resincronizacion de celo en vaquillonas. VI Simposio Internacional de Reproducción Animal, Córdoba, Argentina; 388. Balla, E., Maraña Peña, D., Peres, L. C., Pincinato, D., Borges, L. F., Bó, G. A.; Efecto del tratamiento con dispositivos intravaginales TRIU-B por 8, 9 y 10 días en programas de IATF en vaquillonas cruza cebú. VI Simposio Internacional de Reproducción Animal, Córdoba, Argentina; 389. Bó G., Cutaia L., Moreno D., Tríbulo H., Sincronización de celos e inseminación artificial. En: Bases fisiológicas y manejo de la resincronización en programas de IATF. Instituto de Reproducción Animal Córdoba, Córdoba, Argentina, Bartolome JA, Silvestre F., Kamimura, Arteche A.C.M, Melendez P., Kelbert D., Michale J., Thatcher W.W Synchronization and resyncronization of inseminations in lactating dairy cows III. Administration of GnRH 23 days post AI and ultrasonography for nonpregnancy diagnosis on day 30. Baruselli, P. S., Marques, M. O., Carvalho, N. A. T., Madureira, E. H., Campos Filho, E. P Efeito de diferentes protocolos de inseminação artificial em tempo fixo na estação de monta de vacas de corte lactantes. IV Simposio Internacional de Reproducción Animal, Córdoba, Argentina; 236.

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