Reutilización de aguas residuales urbanas depuradas



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ELISA DIRECT COMPETITIVE COLOUR WELL ANTIGEN-ENZYME CONJUGATE ANTIGENS SUBSTRATE S S S SECOND ANTIBODIES ANTIBODIES 1. Antigen (caffeine or cotinine) and antigen-conjugate compete for the binding sites of Anti-(caffeine or cotinine) antibodies in solution. 2. Caffeine or cotinine antibodies are bound by second antibody immobilized in the plate. 3. With the addition of the substrate solution a color signal is generate. 4. The color reaction is stopped and the color is evaluated using an ELISA reader.

3er Seminario Científico Tratamiento y Reutilización de Aguas Residuales Para una Gestión Sostenible Procedimiento Experimental 1.-50µl de muestra, soluciones estandar, etc 2.-50µl de encima conjugada 3.-50 µl de solución de anticuerpos 4.-lavar con buffer solution Esperar 60min 5.-100 µl de la solución de color. 30min

3er Seminario Científico Tratamiento y Reutilización de Aguas Residuales Para una Gestión Sostenible Procedimiento Experimental 6.-100 µl de la solución stop 7.-leer la absorbancia a 450 mn (Labsystems Elisa Reader)

Correlación entre ELISA y LC-MS/MS Cafeína en Ríos Rio ELISA (ppt) CV% ELISA (n=4) LC-MS/MS Cafeina (ppt) LC-MS/MS Paraxanthine (ppt) A33 240 14 275 44 A50 200 1 93 0 A54 170 22 56 0 A55 170 20 147 7 B2 280 4 137 0 B6 270 18 63 5 B14 <LOQ 11 0 B21 4280 11 2835 349 B49 2490 16 1313 293 B57 2220 3 654 98 C23 1340 23 1382 24 C25 1160 16 680 83 C27 190 1 28 3 C32 430 4 466 25 C44 790 20 382 8 Rango de cuantificación (cafeína): 0.175 5.0 ppb Límite de detección: 0.150 ppb

Correlación entre ELISA y LC-MS/MS Cotinina en Ríos RIOS ELISA (ppt) CV % ELISA (n=4) LC/MS/MS (ppt) A.54 < LOQ 12 B.21 170 1,54 157 C.23 < LOQ 16 C.25 < LOQ 46 A.55 < LOQ 4 B.6 < LOQ 19 A.33 < LOQ 22 B.57 150 12,85 153 B.14 < LOQ 2 C.44 < LOQ 5 C.27 < LOQ 7 C.32 < LOQ 25 A.50 < LOQ 7 B.49 440 16,89 303 C.58 < LOQ 10 B.2 < LOQ 18 Rango de cuantificación (cotinina):0.05-5.0ppb Límite de detección 0.045ppb

Correlación entre ELISA y LC-MS/MS Cafeina y Cotinina en Agua Residual Cotinina LC-MS/MS