PA-254039.07-1- INSTRUCCIONES DE USO MEDIOS EN PLACA LISTOS PARA USAR PA-254039.07 Rev.: April 2013 Glucose Agar Gentamicin and Penicillin and Streptomycin USO PREVISTO Glucose Agar se utiliza para el aislamiento y el cultivo de hongos (levaduras, mohos y dermatofitos) a partir de muestras clínicas., Gentamicin and y BD Sabouraud Penicillin and Streptomycin son medios selectivos para el aislamiento de hongos a partir de muestras clínicas. PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO Método microbiológico. Sabouraud Glucose Agar es un medio de uso general para el cultivo de dermatofitos 1,2. Hoy en día se utiliza para el aislamiento y cultivo de todos los hongos 3-5. Las peptonas en Sabouraud Glucose Agar son fuentes de factores de crecimiento nitrogenoso. La glucosa aporta una fuente de energía para el crecimiento de microorganismos. La alta concentración de glucosa presenta una ventaja para el crecimiento de hongos (estables osmóticamente), mientras que la mayoría de las bacterias no tolera la alta concentración de azúcar. Además, el bajo ph es óptimo para los hongos pero no para muchas bacterias 3. Sabouraud Glucose Agar es sólo levemente selectivo frente a las bacterias. Gentamicin and y Penicillin and Streptomycin son medios selectivos para el aislamiento de hongos a partir de muestras clínicas y no clínicas. Se han añadido agentes selectivos para inhibir las bacterias. El cloranfenicol es un antibiótico de amplio espectro que inhibe una amplia variedad de bacterias gram negativas y gram positivas, pero puede tener un efecto inhibidor en numerosos hongos patógenos 4. Se ha demostrado que los antimicrobianos como la penicilina, la gentamicina y la estreptomicina, o una combinación de las mismas, son eficaces en la inhibición de bacterias sin afectar el crecimiento fúngico 2-5. Estos medios se utilizan para el aislamiento de hongos a partir de muestras clínicas o materiales en los que se sospeche la presencia de contaminantes bacterianos. Sabouraud Glucose Agar es uno de los medios utilizados en las pruebas de límites microbianos en USP y EP. 6,12 REACTIVOS Fórmulas: consultar la Tabla 1 PRECAUCIONES. Solamente para uso profesional. No utilizar las placas si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración, deshidratación, agrietamientos o cualquier otro signo de deterioro. Consultar los procedimientos de manipulación aséptica, riesgos biólogicos y desecho del producto usado en el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO. ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura entre 2 y 8 C, envueltas en su envase original, hasta justo antes de usarlas. Evitar la congelación y el calentamiento excesivo. Las placas pueden inocularse hasta su fecha de caducidad (ver la etiqueta en el paquete) e incubarse durante los períodos de incubación recomendados.
Las placas de grupos de 10 placas ya abiertos pueden usarse durante una semana siempre que se almacenen en un lugar limpio a una temperatura entre 2 y 8 C. Tabla 1: REACTIVOS Fórmulas* por litro de agua purificada Nombre del producto Glucose Agar Penicillin and Streptomycin Gentamicin and Glucose Ingredientes Digerido 5,0 g 5,0 g 5,0 g 5,0 g pancreático de caseína Digerido péptico de 5,0 g 5,0 g 5,0 g 5,0 g tejido animal Glucosa 40,0 40,0 40,0 40,0 Agar 15,0 15,0 15,0 15,0 Penicilina G 60000 UI Estreptomicina 0,06 g Gentamicina 0,04 Cloranfenicol 0,4 0,4 ph ph 5,6 ± 0,2 5,6 ± 0,2 5,6 ± 0,2 5,6 ± 0,2 * Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento. CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO Inocular muestras representativas con las siguientes cepas (para más detalles, consultar el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO). Véase la información de incubación en la nota al pie. Nombre del producto Glucose Agar Penicillin and Gentamicin and Streptomycin Cepas de prueba **Candida albicans ATCC 10231 **Saccharomyces cerevisiae DSM 1333 ** Aspergillus brasiliensis ATCC16404 ** Penicillium roquefortii ATCC 9295 ***Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 *Staphylococcus Sin inhibición aureus ATCC 25923 Inhibición completa. *Escherichia coli Sin inhibición ATCC 25922 Inhibición completa. Sin inocular Ámbar claro Incubación: *48 h 35-37 C / **</= 5 days, 20-25 C, atmósfera aerobia PA-254039.07-2-
PROCEDIMIENTO Materiales suministrados: Glucose Agar,, Gentamicin and, o Penicillin and Streptomycin, todos suministrados en placas Stacker de 90 mm. Controladas microbiológicamente. Materiales no suministrados Medios de cultivo auxiliar, reactivos y el equipo de laboratorio que se requiera. Tipos de muestras Los productos descritos en este documento son medios de aislamiento para hongos y pueden utilizarse (alternativamente o en combinación de dos de dichos medios) para todas las muestras clínicas (véase también CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO). Los medios también se pueden utilizar en muchas áreas de microbiología industrial y en el control de la higiene. Procedimiento de análisis Extender las muestras tan pronto como sea posible después de recibirlas en el laboratorio. La placa de extensión se utiliza principalmente para aislar cultivos puros de las muestras que contienen flora mixta. Si, por el contrario, el material se cultiva directamente empleando una torunda, hacerla girar en una sección pequeña cercana al borde, extendiendo luego a partir de esta área inoculada. Si las muestras están formadas por raspados de piel, cabello o uñas, colocar el material en el centro de la superficie del medio. Si es posible, las partículas más grandes deben presionarse levemente sobre la superficie mediante pinzas estériles para proporcionar contacto con el medio. Para la detección de dermatofitos, también se incluye BD Dermatophyte Agar o BD Mycosel Agar. Si se utiliza, Gentamicin and o Penicillin and Streptomycin, utilizar además una placa de Glucose Agar. También debe inocularse un medio no selectivo tal como BD Columbia 5% Sheep Blood para proporcionar una indicación de los patógenos bacterianos presentes en la muestra. Si se utiliza para la detección de levaduras (por ejemplo, la especie Candida) en las muestras clínicas, incubar durante 48 horas a 30 35 C. Si se sospechan hongos filamentosos, incluidos los dermatofitos, incubar hasta un máximo de una semana a 25 30 C. Los dermatofitos a veces necesitan tres semanas o más para producir crecimiento. Si se utiliza para control de la higiene, incubar durante un máximo de 7 días a 20 25 C. Si la incubación es más prolongada que 3 días, proporcionar la humedad adecuada. Las placas pueden sellarse con cinta de plástico adhesiva para evitar la deshidratación. Para obtener detalles acerca de la temperatura de incubación para crecimiento, consultar las referencias 5,7-10. Resultados Después de una incubación suficiente, las placas pueden mostrar colonias aisladas en las áreas extendidas y crecimiento confluente en áreas de inoculación densa. Examinar la posible presencia de colonias fúngicas con color y morfología habituales en las placas. Realizar pruebas bioquímicas y procedimientos microscópicos y serológicos para confirmar los resultados 6-9. Dado el gran número de hongos patógenos existentes, no se dan detalles acerca de su apariencia en este documento. Consultar las referencias 2,3, 5-9. PA-254039.07-3-
CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Los medios presentados en este documento son medios estándar para el aislamiento y cultivo de hongos para todo tipo de muestras clínicas y no clínicas 4-11. Debido al amplio intervalo de temperaturas de crecimiento de los hongos, puede ser necesario inocular varias placas con el mismo medio e incubarlas a diferentes temperaturas. Consultar la sección Procedimiento de análisis y las referencias correspondientes 5, 7-10. Dado que Glucose Agares presenta selectividad débil, crecerán bacterias en el medio, en especial después de un periodo de incubación prolongado. Si se sospecha contaminación bacteriana de las muestras, materiales o áreas objeto de investigación, deben utilizarse medios con una selectividad mayor, por ejemplo, Gentamicin and o BD Sabouraud Penicillin and Streptomycin para el cultivo de la muestra. Nocardia y Actinomyces son bacterias filamentosas ( no son hongos!) y, por lo tanto, no crecen en todos los medios Sabouraud con inhibidores bacterianos. REFERENCIAS 1. Sabouraud, R. 1892. Contribution a l'etude de la trichophytie humaine. Etude clinique, microscopique et bacterioloqique sur la pluralité des trichophytons de l'homme. Ann. Dermatol. Syphil. 3: 1061-1087. 2. Haley, L.D., J. Trandel, and M.B. Coyle. 1980. Cumitech 11, Practical methods for culture and identification of fungi in the clinical microbiology laboratory. Coordinating ed., J.C. Sherris. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 3. Ajello, L., L.K. Georg, W. Kaplan, and L. Kaufman. 1963. CDC laboratory manual for medical mycology. PHS Publication No. 994, U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 4. MacFaddin, J.F. 1985. Media for isolation-cultivation- identification-maintenance of medical bacteria. vol. I. Williams & Wilkins, Baltimore. 5. Sutton, D.A. 2003. Specimen Collection, transport, and processing: mycology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 6. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc. 2009. The U.S. Pharmacopeia 32/The national formulary 27--2009. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, Md. USA 7. Larone, D.H. 2002. Medically important fungi: a guide to identification. 4 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 8. Summerbell, R.C. 2003. Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton, and agents of superficial mycoses. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 9. Kwon-Chung, K.J., and J.E. Bennett. 1992. Medical mycology. Lea & Febiger, Philadelphia. 10. Pfaller, M.A., and R.A. Fromtling (section ed.). 2003. Mycology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 11. Brun, S., et al. 2001. Evaluation of five commercial Sabouraud gentamicin-chloramphenicol agar media. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 20: 718-723. 12. Council of Europe, 2008. European Pharmacopoeia, 6.1. European Pharmacopoeia Secretariat. Strasbourg/France. ENVASE/DISPONIBILIDAD Glucose Agar Nº de cat. 254039 Medios en placa listos para usar, 20 placas Nº de cat. 254083 Medios en placa listos para usar, 120 placas Nº de cat. 254091 Medios en placa listos para usar, 20 placas PA-254039.07-4-
Gentamicin and Nº de cat. 254041 Medios en placa listos para usar, 20 placas Nº de cat. 254096 Medios en placa listos para usar, 120 placas Penicillin and Streptomycin Nº de cat. 254451 Medios en placa listos para usar, 20 placas INFORMACIÓN ADICIONAL Para obtener más información, diríjase a su representante local de BD. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D-69126 Heidelberg/Germany Phone: +49-62 21-30 50 Fax: +49-62 21-30 52 16 Reception_Germany@europe.bd.com http://www.bd.com http://www.bd.com/europe/regulatory/ ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company. 2013 BD PA-254039.07-5-