PRACTICAS ADECUADAS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA CAPITULO 1117, 1051 (USP 40) Farmacopea Nacional de los Estados Unidos Mexicanos (FEUM)
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1 PRACTICAS ADECUADAS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA CAPITULO 1117, 1051 (USP 40) Farmacopea Nacional de los Estados Unidos Mexicanos (FEUM) Norma Oficial Mexicana NOM-059-SSA1-2015
2 INSTALACIONES
3 Áreas INSTALACIONES El laboratorio de microbiología debe contar con áreas separadas: Ø Área separada para poder realizar Limpia pruebas de esterilidad Cuenta con diferenciales de presión que ayuden al control de la contaminación a través de barreras de entrada de aire (presión positiva). Área para análisis generales (microcuenta, valoración, efectividad antimicrobiana, etc.) Cepario Ø Área separada para poder realizar el manejo de los microorganismos (presión negativa). Autoclaves, Lavado de material Incubación
4 PREPARACION Y ALMACENAMIENTO DE MEDIOS DE CULTIVO
5 PREPARACION Y ALMACENAMIENTO DE MEDIOS DE CULTIVO. - Medios de cultivo: son la base de la mayoría de las pruebas microbiológicas. - Elegir los medios o los componentes adecuados, según la bibliografía o la metodología indicada. - Seguir al pie de la letra la preparación de los medios de cultivo para tener medios de calidad. - Utilizar utensilios y espátulas limpias para evitar que sustancias extrañas, alteren la composición de los medios.
6 PREPARACION Y ALMACENAMIENTO DE MEDIOS DE CULTIVO. c) Fotografías de los modelos validados donde se indiquen la posición y cantidad de contenedores dentro de la cámara del modelo validado.
7 PREPARACION Y ALMACENAMIENTO DE MEDIOS DE CULTIVO. - No almacenar un agar a temperaturas iguales o por debajo de 0 C, ya que se daña la estructura del gel - Proteger a los medios de la exposición de la luz (si aplica) y de las temperaturas excesivas - Si se van a almacenar el agar por un tiempo prolongado, se deben colocar en un envase hermético que evite la pérdida de humedad.
8 PREPARACION Y ALMACENAMIENTO DE MEDIOS DE CULTIVO. - Realizar un estudio de caducidad de medios de cultivo preparados en el laboratorio, para poder sustentar su viabilidad a su fecha de expiración
9 PREPARACION Y ALMACENAMIENTO DE MEDIOS DE CULTIVO. - Prueba de esterilidad a los medios de cultivo: Todos los medios de cultivo (preparados en el laboratorio o comprados con un proveedor) deben cumplir con la prueba de esterilidad, para lo cual se deben colocar en la incubadora un porcentaje del lote (4% de acuerdo a la FEUM), en las mismas condiciones de incubación que las usadas en los análisis de rutina.
10 MEDIOS DE CULTIVO- PROMOCIÓN DE CRECIMIENTO. - Promoción de crecimiento de medios de cultivo: Procedimiento donde se describa como mínimo la siguiente información: a) Lista de microorganismos a utilizar para realizar la promoción a cada medio de cultivo b) Cantidad de microorganismo a inocular (ml) c)tiempo y temperatura de incubación, interpretación de los resultados obtenidos
11 PREGUNTA Cuando debe realizarse la prueba de promoción de crecimiento de los medios de cultivo? a) Antes de utilizarlos en cualquier prueba en el laboratorio b) Se realiza cuando se tenga tiempo c) No es necesario realizar esta prueba d) Se puede realizar al mismo tiempo que se incuba la prueba microbiológica donde se utilizaron, sin embargo si los resultados de la promoción no cumplen con los límites, la prueba de laboratorio se invalida. e) Las opciones a y d son correctas
12 MANEJO DEL CEPARIO
13 MANEJO DEL CEPARIO Los microorganismos a utilizar serán los autorizados en la FEUM/USP o cualquier otro compendio autorizado, tomar en cuenta el ATCC (American type culture collection) indicado. Una vez abiertos y antes de utilizarlos los microorganismos deben ser identificados hasta genero y especie para asegurar que la cepa esta pura y no esta contaminada
14 INTRODUCCIÓN El agua es la sustancia más utilizada en la industria farmacéutica, ya sea como: - Disolvente o ingrediente de preparados farmacéuticos - En el lavado de envases - En las operaciones de limpieza de áreas y equipos
15 MUESTREO Y ANÁLISIS DE AGUA DE PLANTA ESPECIFICACIONES DE LOS TIPOS DE AGUA MÁS UTILIZADOS PRUEBA AGUA PURIFICADA AGUA PARA INYECTABLES ph Conductividad 2.1 µs / cm µs / cm 2 TOC 0.5 ppm (mg / L) 0.5 ppm (mg / L) Endotoxina NA < 0.25 UE / ml Fuente de información: FEUM
16 1. Pruebas de Esterilidad.
17 PRUEBA DE ESTERILIDAD PARA QUÉ ESTA PRUEBA? DEMOSTRAR LA ESTERILIDAD EN SUSTANCIAS, PREPARACIONES FARMACÉUTICAS O DISPOSITIVOS MÉDICOS
18 PRUEBA DE ESTERILIDAD INTRODUCCIÓN. La prueba tiene como finalidad investigar la presencia de Microorganismos viables en sustancias, preparaciones o dispositivos médicos que requieren ser estériles, usando los medios de cultivo adecuados.
19 PRUEBA DE ESTERILIDAD Se debe de llevar a cabo en condiciones asépticas, usando campanas o módulos de flujo laminar localizados en cuartos limpios, o bien un aislador. Se deben tener las precauciones necesarias para evitar contaminar la muestra y para no afectar a los microorganismos que pudieran estar presentes
20 AISLADOR CAMPANA DE FLUJO LAMINAR
21 PRUEBA DE ESTERILIDAD Existen dos métodos para efectuar la prueba de esterilidad: - Método de filtración por membrana - Método Directo
22 PRUEBA DE ESTERILIDAD Identificación Prueba Incubación Revisión Resultado Lote Fecha Analista Método de filtración Método directo Medio Líquido de Tioglicolato Soya Tripricaseína 14 días MT 30 a 35 C MST 20 a 25 C Crecimiento = Turbidez No crecimiento = Estéril
23 CUANDO INVALIDAR LA PRUEBA DE ESTERILIDAD Causas Ø Datos del control microbiológico del área de prueba presentan desviaciones. Ø La revisión del procedimiento de pruebas demuestra fallas. Ø Los controles negativos presentan crecimiento microbiano. Ø La identificación de los microorganismos aislados revela errores relacionados con personal, material y/o la técnica. Prueba inválida Ø Repetir prueba con el mismo número de muestras.
24 CUANDO INVALIDAR LA PRUEBA DE ESTERILIDAD Resultados de la segunda prueba Ø Si en la nueva prueba NO se observa crecimiento microbiano el producto cumple con la prueba de esterilidad. Ø Si en la nueva prueba se observa crecimiento microbiano, el producto no cumple con la prueba de esterilidad.
25 Prueba de Límites microbianos
26 PRUEBA DE LIMITES MICROBIANOS INTRODUCCIÓN Se le denomina así al conjunto de pruebas cuyo objetivo es evaluar la calidad sanitaria de productos farmacéuticos (materias primas, productos intermedios y terminados), mediante el recuento de microorganismos mesófilos aeróbios, hongos filamentosos y levaduras; así como la investigación de microorganismos objetables en dichos productos.
27 PRUEBA DE ENDOTOXINA
28 INTRODUCCIÓN Las endotoxinas bacterianas Gram negativas, son la causa más común de reacciones tóxicas asociadas a la contaminación de productos farmacéuticos y artículos médicos estériles. Las endotoxinas son lipopolisacáridos de paredes bacterianas gram negativas cuya actividad para generar una respuesta negativa en el ser humano (temperatura) es mayor que la de otras sustancias pirogénicas de estructura diferente.
29 La prueba para determinar o cuantificar endotoxinas utiliza el lisado de amebocitos de Limulus polyphemus o Tachypleus tridentatus ya que este lisado es la sustancia más sensible cuando reacciona con endotoxinas bacterianas presentando gelificación Existen dos métodos para esta determinación: Método A: Formación de un gel (Gel-Clot)
30 Cromogénico (cinético y de punto final), basado en el desarrollo de color después de la ruptura del complejo sintético péptido-cromógeno. Método B: Fotométrico, que dependiéndo de la forma de cuantificación puede ser: Turbidimétrico ( cinético y de punto final), basado en el desarrollo de turbiedad después de la ruptura de un sustrato endógeno.
31 - La temperatura de incubación se debe mantener estable 37 C +/- 1 C, durante los 60 minutos +/- 2 minutos que dura la prueba. - Las muestras positivas deben presentar una gelificación integra al ser invertido el tubo. - Equipos con calibración, mantenimiento y limpieza de los equipos utilizados para incubar las muestras (baño seco)
32
ENSAYO DE ENDOTOXINAS BACTERIANAS
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