BIOSEGURIDAD Y CONCEPTOS DE ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCION

GUIA DE MICROBIOLOGIA GENERAL BIOTECNOLOGIA BIOSEGURIDAD Y CONCEPTOS DE ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCION La bioseguridad en el laboratorio se refiere al conjunto de medidas preventivas destinadas a proteger la salud de las personas que allí trabajan. El propósito básico es obtener un ambiente de trabajo seguro y ordenado. En el año 1987 el Centro para el Control de enfermedades Infecciosas (CDC) en Estados Unidos publicó las Recomendaciones para la prevención de la transmisión del VIH en el personal de la salud, Posteriormente, en 1996 el mismo CDC publicó las Precauciones Estándar que enfatizan que la sangre, todos los fluidos corporales, secreciones, excreciones, piel no intacta y membranas de todos los pacientes deben ser consideradas potencialmente infecciosas, independientemente del contenido visible de sangre. ELEMENTO DE CONTENCIÓN EQUIPOS DE SEGURIDAD DISEÑO DEL LABORATORIO PRACTICAS DE TRABAJO EQUIPOS DE SEGURIDAD (Contención primaria). Los elementos de contención primaria deben permitir al operador la preparación y transferencia del material potencialmente infeccioso sin romper la barrera. Estos, incluyen elementos simples como guantes, delantal, mascarilla, tubos de centrífuga con tapón, 1

homogenizadores de tejido con sistemas cerrados, propipetas, etc, y otros elementos de mayor tecnología y de mayor importancia como las cámaras de bioseguridad. DISEÑO DEL LABORATORIO (contención secundaria). El diseño debe estar pensado para proteger al personal de laboratorio, como también a las personas que trabajan en otras áreas de la institución y a la comunidad. Debe estar localizado fuera del área de atención de los pacientes, visitas, y con acceso limitado. El diseño y los materiales de laboratorio deben permitir una fácil limpieza. Cada sección requiere además un lavamanos. Según el nivel de bioseguridad que el laboratorio requiera deben cumplirse otras especificaciones resumidas en la Tabla 1 1. PRACTICAS DE TRABAJO. Corresponde a la utilización estricta de los procedimientos y técnicas especialmente diseñadas para disminuir el riesgo. Para ello el personal debe estar consciente de los riesgos de la manipulación de agentes infecciosos. Su importancia relativa es mayor al 95% en cuanto a la prevención de infección en el laboratorio. Es importante la aceptación y compromiso de cada uno de los miembros del laboratorio acerca de las medidas de seguridad que sean implementadas. LABORATORIO DE BIOTECNOLOGIA PRACTICO N 1 MATERIAL DE USO HABITUAL EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA Y CONCEPTOS DE ESTERILIZACIÓN, DESINFECCION Y ANTISEPSIA Material de vidrio Material Tubos de ensayo Tubos de hemólisis Placas de Petri Pipetas graduadas Pipetas Pasteur Asa de Drigalsky Matraces Erlenmeyer Matraces Monod Matraces Kitasato Probetas Portaobjetos Cubreobjetos Portaobjeto excavado Campana Durham Vasos de precipitado Utilización Contener medios de cultivo Contener medios de cultivo Siembra en medio sólido en superficie Traspaso de líquidos en volúmenes exactos Traspaso de líquidos en volúmenes pequeños Extensión de siembra en placa Contener medios de cultivo Determina turbidimétricamente del crecimiento bacteriano Filtración al vacío de medios de cultivo y otros líquidos Medición de volúmenes exactos Observaciones microscópicas Observaciones microscópicas Observaciones microscópicas Detección de gases Contener y preparar soluciones Material diverso Asa en loop Siembra de microorganismos en superficie 2

Asa recta Filtros millipore Discos de antibióticos Mechero Bunsen Porta pipetas Papel ph Cestillo metálico Siembra de microorganismos en picadura Esterilización de medios líquidos termolábiles por filtración Valoración de antibióticos Esterilización al rojo y flameado Contener pipetas estériles Determinación del ph de medios de cultivo y soluciones Contener material a esterilizar en autoclave Aparatos Microscopio óptico Autoclave Horno Pasteur Refrigerador Incubadora o Estufa Cámara de siembra Cámara de anaerobiosis Cuenta colonias Ph metro Destilador Shaker Freeser Observación de preparaciones Esterilización por calor húmedo Esterilización por calor seco Mantención de cultivos Crecimiento de cultivos en condiciones controladas de temperatura Siembra en condiciones asépticas Contener cultivos anaerobios Recuento de colonias de microorganismos Ajustar el ph de medios de cultivo o soluciones Obtención de agua destilada para preparación de medios de cultivo Cultivo aireado de microorganismos Almacenamiento prolongado de medios de cultivo En los prácticos de microbiología es necesario tener todo el material a usar libres de microorganismos viables y limpio. De esta manera se impide el crecimiento de múltiples contaminantes que pueden interferir con un microorganismo inoculado asépticamente que constituye el objeto de estudio. ESTERILIZACION, DESINFECCION Y ANTISEPSIA El control de la transmisión de las enfermedades infecciosas es una medida esencial para evitar el desarrollo de epidemias. Para el control de la transmisión se utilizan técnicas de esterilización, desinfección, antisepsia, o simplemente de higiene (higienización), dependiendo del riesgo de contagio y de sí deben aplicarse a materiales sensibles o resistentes, o al cuerpo humano. El laboratorio de microbiología, como lugar en el que se cultivan y manipulan microorganismos patógenos, requiere medidas especiales de seguridad y control, para proteger del contagio al personal que trabaja en él y evitar el paso de microorganismos al medio externo. ESTERILIZACION. La esterilización es la completa eliminación de microorganismos y sus formas de resistencia (esporas).en el laboratorio de microbiología se esteriliza todo el material y los medios empleados para el cultivo de microorganismos. Asimismo deben esterilizarse los desechos, procedentes del laboratorio o de los pacientes, que puedan contener microorganismos patógenos, antes de ser vertidos de pasar al servicio de recogida de 3

basuras. La esterilización puede realizarse mediante agentes físicos (calor, filtración o radiaciones) o químicos. CUADRO 1 ESTERILIZACION CON CALOR Y AGENTES QUÍMICOS Agente Esterilizante Temperatura Tiempo Aplicaciones Calor húmedo (vapor de agua a sobrepresión) Calor seco (horno pasteur) Oxido de etileno Esterilización por calor 121 C 132 C 160 C 170 C 180 C 27 37 C 55 60 C 15 a 30 minutos 10 15 minutos 120 minutos 60 minutos 30 minutos 5 5 ½ horas 2 3 horas Líquidos, tejidos, vidrio, goma, acero inoxidable Vidrio, metal Sustancias oleaginosas Plástico, goma, instrumental médico El calor húmedo (vapor de agua sobrecalentado) producido en autoclave es el agente esterilizante más utilizado. Posee una buena capacidad de penetración, provocando la coagulación de las proteínas y consiguiéndose una esterilización rápida. Para medios de cultivo se emplea el vapor a 121 C (1 atmósfera sobrepresión) durante 15 30 minutos. El tiempo depende del volumen de medio a esterilizar, ya que el calor debe alcanzar toda la masa uniformemente. Al disponer los recipientes debe evitarse que puedan quedar bolsas de aire que no sean desplazadas por el vapor, ya que no se alcanzaría la temperatura correcta. El calor seco se emplea para estandarizar materiales en los que el vapor no puede penetrar (sustancias oleosas, como la vaselina), o en los que no conviene que se deposite humedad (instrumental metálico o material de vidrio). Actúa fundamentalmente por oxidación, y es menos eficaz que el calor húmedo, por lo que deben emplearse temperaturas o tiempos de esterilización mayores. Se utilizan hornos de aire caliente (horno Pasteur). Esterilización por filtración. Los filtros de alta eficiencia (filtros HEPA), capaces de retener todo tipo de partículas en suspensión, se emplean para esterilizar el aire de las campanas de flujo laminar y de algunas habitaciones. En el laboratorio se emplean membranas de filtros para esterilizar soluciones sensibles al calor. Pueden emplearse tamaños de poro de 0.45 micras, que retienen la mayor parte de las bacterias y hongos, o de 0.22 micras que eliminan hasta las bacterias mas pequeñas, pero no los virus (lo que no tiene importancia para el cultivo de bacterias). DESINFECCIÓN Y ANTISEPSIA La desinfección es la destrucción de microorganismos patógenos presentes en la superficie de objetos, utilizando sustancias químicas (desinfectantes). No implica esterilización; es decir, no siempre se eliminan 4

todos los microorganismos. Puede distinguirse de desinfección de alto nivel, que supone la destrucción de todas las formas vegetativas (pero no necesariamente las esporas) y la de nivel medio, que alcanza a Mycobacterium tuberculosis, pero no a algunos virus y hongos, ni tampoco a las esporas. Por debajo de este criterio se habla de desinfección de bajo nivel. La antisepsia es la desinfección aplicada a las superficies del cuerpo humano. Las sustancias empleadas (antisépticos) deben ser bien toleradas por los tejidos, por lo que son menos enérgicas que los desinfectantes y, en consecuencia, menos eficaces. A veces se usan soluciones más diluidas de los mismos desinfectantes. Las principales aplicaciones de los antisépticos son el lavado quirúrgico de manos, la desinfección de la piel del paciente antes de una intervención quirúrgica y la desinfección de heridas. La actividad de los desinfectantes y antisépticos se reduce por la suciedad (especialmente si contiene materia orgánica) por la presencia de un gran número de microorganismos y por interferencias con algunas otras sustancias y por un ph inadecuado. CARACTERÍSTICAS Y APLICACIONES DE LOS PRINCIPALES DESINFECTANTES Y ANTISÉPTICOS. La acción antimicrobiana de muchos agentes desinfectantes es poco específica, actuando sobre distintos componentes o funciones del microorganismo, a menudo en función de la concentración empleada, y en otros casos se ignoran los detalles. TABLA 1. Terminología relacionada con el control del crecimiento microbiano Termino Definición Comentarios Términos referidos a la destrucción de los microorganismos Esterilización Desinfección Antisepsia Germicida (cida, que mata) El proceso de destrucción de todas las formas de vida en un objeto o material, incluidas las endosporas, las formas más resistentes de vida microbiana. La esterilización es absoluta; no hay grados de esterilidad. El proceso de destrucción de las formas vegetativas de los patógenos, pero no necesariamente endosporas o virus. Normalmente un desinfectante es un compuesto químico que se aplica sobre un objeto o material. Los desinfectantes tienden a reducir o inhibir el crecimiento; no suelen esterilizar. Desinfección química de la piel, mucosas u otros tejidos, en vivo. Un agente químico que mata rápidamente a los microbios, pero no necesariamente a sus esporas. Las temperaturas requeridas normalmente son: calor húmedo, 121 C durante 15 minutos; calor seco, 170 C durante dos horas. Otros métodos son radiaciones ionizantes y gases, como el óxido de etileno. Este término se suele aplicar al uso de soluciones químicas sobre superficies o a la eliminación de patógenos del agua, como en la cloración de aguas. Término aplicado específicamente al tratamiento de heridas. Antisepsia es un tipo concreto de desinfección. Un bactericida mata bacterias, un esporicida destruye esporas, un fungicida hongos, un viricida virus 5

Términos referidos a la supresión de los microorganismos. Bacteriostasis (estasis, detención) Asepsia (asepsia, sin infección) Desgerminación Higienización Situación que inhibe el crecimiento y multiplicación bacterianos pero sin matar a las bacterias. Si se elimina el agente bacteriostático puede reanudarse el crecimiento. La fungistasia se refiere a la inhibición del crecimiento fúngico. La ausencia de patógenos en un objeto o zona. Las técnicas de asepsia están diseñadas para prevenir la entrada de patógenos en el organismo. La asepsia quirúrgica pretende evitar todos los microorganismos, mientras que la asepsia médica sólo los responsables de enfermedades transmisibles. Eliminación pasajera de microbios de la piel mediante limpieza mecánica o el empleo de un antiséptico. La reducción del número de patógenos que hay en un objeto hasta niveles aceptables para la salud pública mediante lavado mecánico o con agentes químicos. y un amebicida matan amebas. La refrigeración es bacteriostática; muchos compuestos químicos, como los colorantes, son bacteriostáticos más que bactericidas. La filtración del aire, la luz ultravioleta, las mascarillas, guantes y batas y la esterilización de instrumentos son medidas para conseguir la asepsia. En el caso de las inyecciones se utiliza con frecuencia un algodón empapado en alcohol; antes de la cirugía con frecuencia se utilizan productos que contienen fósforo. Cualquier compuesto empleado debe ser compatible con la seguridad y con los caracteres organolépticos de los alimentos. Temperatura. Todo mundo está familiarizado con el uso del hielo o de la refrigeración mecánica para controlar el crecimiento microbiano. Como todas las reacciones químicas las reacciones bioquímicas necesarias para el crecimiento disminuyen considerablemente a bajas temperaturas. Frecuentemente los desinfectantes químicos son también inhibidos por las bajas temperaturas. Ya que su actividad está en función de reacciones químicas dependientes de la temperatura, los desinfectantes trabajan mejor en soluciones templadas. Es normal que las instrucciones de los envases desinfectantes especifiquen que se utilice a una temperatura media. Clase de microorganismos. Muchos desinfectantes y antisépticos tienden a tener mayor efecto sobre las bacterias gram positivas como grupo que sobre las gram negativas, aunque esta diferencia no es tan significativa como ocurre con la actividad antibiótica. Por ejemplo, un cierto grupo de bacterias gram negativa, pertenecientes al género Pseudomonas, presentan una resistencia poco común a los agentes químicos e incluso crecen activamente en algunos desinfectantes y antisépticos. Estas bacterias son capaces de mantenerse en substratos en inverosímiles como una solución salina simple y son también resistentes a muchos antibióticos. Esta resistencia a agentes antimicrobianos está relacionada probablemente con el tamaño de las porinas (estructuras en forma de poro que hay en la membrana externa LPS) de Pseudomonas. 6

MECANISMOS DE ACCION DE LOS AGENTES ANTIMICROBIANOS. Alteración de la permeabilidad de membrana. La membrana citoplasmática, localizada bajo la pared celular, es el objetivo de muchos agentes antimicrobianos. Esta membrana controla activamente el paso de los nutrientes a la célula y la eliminación de los deshechos. La alteración de los lípidos o proteínas de la membrana citoplasmática por agentes antimicrobianos, como los compuestos de amonio cuaternario, provoca la salida del contenido celular al medio circundante e interfiere en el crecimiento de la célula. Varias clases de agentes químicos, así como de antibióticos, actúan de forma más o menos similar. Métodos físicos para el control microbiano. Calor. Probablemente es método más comúnmente empleado para destruir los microorganismos es el calor. Los medios de cultivo, material de vidrio e instrumentos médicos son esterilizados normalmente por calor. El calor no sólo es el agente de esterilización más ampliamente utilizado y el más eficaz sino también el más económico y el más fácil de controlar. Aparentemente el calor mata a los microorganismos al desnaturalizar sus enzimas. En la esterilización por calor cabe tenerse en cuenta el grado de resistencia de las bacterias a la temperatura. La resistencia al calor varía entre los diferentes microorganismos; estas diferencias pueden expresarse a través del concepto de punto térmico de muerte. El punto térmico de muerte (PTM) es la temperatura más baja requerida para matar a todos los microorganismos de una suspensión líquida en 10 minutos. Otro factor a considerar en la esterilización es el tiempo requerido para que el material quede estéril. Este se expresa como tiempo de muerte térmica (TMT), el menor tiempo necesario para que todas las bacterias de un cultivo líquido mueran a una temperatura determinada. Tanto el PMT como el TMT son guías útiles que indican la severidad del tratamiento requerido para matar a una población dad de bacterias. El tiempo de reducción decimal (TRD o valor D) es un tercer concepto relacionado con el grado de resistencia al calor de las bacterias. Es el tiempo, en minutos, en que se destruye el 90% de la población de bacterias a una temperatura determinada. El valor D es especialmente útil en la industria de conservas enlatadas. El calor utilizado en esterilización se puede aplicar en forma de calor húmedo o seco. El calor seco mata por efectos de oxidación. Una analogía sencilla es la lenta carbonización del papel en un horno cuando la temperatura está por debajo del punto de ignición del papel. El calor húmedo mata a los microorganismos más rápidamente porque el agua acelera la rotura de los puentes de hidrógeno que mantienen la estructura tridimensional de las proteínas. CALOR HÚMEDO Un tipo de esterilización por calor húmedo es la ebullición (100ºC al nivel del mar), que mata a las formas vegetativas de las bacterias patógenas, muchos virus y hongos y sus esporas en unos 10 minutos. El vapor fluente (sin presión) es el equivalente en temperatura al agua hirviendo. Las endosporas y algunos virus, sin embargo, no se destruyen tan fácilmente. El virus de la hepatitis, por ejemplo, puede sobrevivir alrededor de 30 minutos de ebullición y algunas endosporas bacterianas han resistido a las temperaturas de ebullición durante más de 20 horas. Por tanto la ebullición no es siempre un método de esterilización eficaz. Sin embargo, unos pocos minutos de ebullición matan a la mayoría de los patógenos y suelen dejar los alimentos y el agua en condiciones de seguridad para el consumo. 7

Para esterilizar en forma eficaz mediante calor húmedo se necesitan temperaturas superiores a la ebullición del agua. Estas altas temperaturas se consiguen normalmente mediante vapor a presión en un autoclave. Este es el método preferido de esterilización y se utiliza a menos que el material a esterilizar pueda resultar dañado por el calor o la humedad. En un autoclave el vapor a una atmósfera de sobre presión (121ºC) matará a todos los microorganismos y a sus endosporas en unos 15 minutos o un poco más, dependiendo del tipo y volumen del material que está siendo esterilizado. El autoclave se utiliza para esterilizar medios de cultivo, instrumentos, ropas, instrumental de uso endovenoso y externo, soluciones, jeringas, equipos de transfusión y muchos otros artículos que pueden soportar alta temperatura y presión. Los autoclaves industriales pueden ser de gran tamaño, pero se utiliza el mismo principio para la olla a presión para la olla a presión en la elaboración de conservas caseras. PASTEURIZACION En los primeros tiempos de la microbiología, se encontró un método práctico de prevenir el deterioro de la cerveza y del vino. Pasteur utilizó un calentamiento moderado que resultaba suficiente para matar los organismos que causaban el deterioro sin alterar notoriamente el sabor del producto. Más tarde se aplicó el mismo principio a la leche para producir lo que llamamos leche pasteurizada. La leche se pasteurizaba en un principio para eliminar el bacilo de la tuberculosis. Muchos microorganismos relativamente resistentes al calor (termodúricos) sobreviven a la pasteurización, pero no son origen probable de enfermedades ni del deterioro de la leche refrigerada en un tiempo razonable. La mayoría de los procesos de pasteurización utilizados hoy en día emplean temperaturas mayores, al menos de 72ºC, pero sólo durante unos 15 segundos. Este tratamiento, es conocido como pasteurización rápida a alta temperatura. ESTERILIZACION POR CALOR SECO Uno de los métodos más sencillos de la esterilización con calor seco es el flameado. Este método se utiliza muchas veces en el laboratorio de microbiología para esterilizar asas de siembra; todo lo que hay que hacer es calentar el alambre al rojo y la eficacia es de 100%. Un principio similar se utiliza en la incineración, una forma eficaz de esterilizar y eliminar recipientes de cartón, bolsas y ropa. Otra forma de esterilización con calor seco es la esterilización por aire caliente. Los objetos a esterilizar por este método se colocan en un horno, donde una temperatura, generalmente de unos 170ºC, mantenida durante cerca de dos horas asegura la esterilización. Se requiere un período de tiempo mayor y una temperatura más alta en comparación con el calor húmedo, ya que el calor del agua se transfiere más rápidamente a un cuerpo frío que el calor del aire. Imagine, por ejemplo, los efectos de meter brevemente la mano en un baño de agua hirviendo y de mantenerla en un horno a la misma temperatura (100ºC) y durante el mismo tiempo. FILTRACION La filtración es el paso de un líquido o gas a través de un material filtrante con poros lo suficientemente pequeños para retener microorganismos (se usa a menudo el mismo aparato que para contar microorganismos). Se crea un vacío en el frasco receptor que ayuda a la gravedad aspirando el líquido a través del filtro. La filtración se utiliza para esterilizar materiales sensibles al calor, como algunos medios de cultivo, enzimas, vacunas y soluciones de antibióticos. En los comienzos de la Microbiología se utilizaban filtros cilíndricos en forma de vela, de porcelana no vitrificada. Los largos e indirectos caminos a través de las paredes del filtro absorbían las bacterias. Los patógenos desconocidos que pasaban a través de tales filtros (y que causaban enfermedades como la rabia) se 8

denominaron virus filtrables. En los últimos años los filtros de membrana, compuestos por sustancias como ésteres de celulosa o polímeros plásticos, se han hecho de uso frecuente en la industria y en el laboratorio. Estos filtros tienen tan sólo 0,1 mm de espesor y sus poros están muy igualados en tamaño. Algunos fabricantes irradian una película de plástico de modo que se graban orificios muy uniformes, por donde han pasado las partículas de la radiación. Los poros de los filtros de membrana incluyen tamaños de 0,22 y 0,45 um, diseñados para retener bacterias y llegan hasta tan sólo 0,01 um, tamaño que retiene virus, e incluso a algunas moléculas grandes de proteínas. RADIACIONES Dependiendo de su longitud de onda, intensidad y duración, las radiaciones tienen distintos efectos sobre las células. Hay dos tipos de radiaciones esterilizantes: las ionizantes y las no ionizantes. Las radiaciones ionizantes, como los rayos gamma o los haces de electrones de alta energía, tienen una longitud de onda más corta que las de las radiaciones no ionizantes, menor de 1nm y transportan por ello mucha más energía. Los rayos gamma son emitidos por cobalto radiactivo y los haces de electrones acelerados hasta altas energías en máquinas especiales. Los rayos gamma penetran profundamente pero pueden ser necesarias horas para esterilizar masas grandes; los electrones de alta energía tienen un poder de penetración mucho menor pero bastan unos segundos de exposición. El principal efecto de la radiación ionizante es la ionización del agua, que forma radicales hidrolizo altamente reactivos. Las radiaciones no ionizantes tienen la longitud de onda mayor que las ionizantes, normalmente superior a 1 nm. Un buen ejemplo de radiación no ionizante es la luz ultravioleta (UV). La luz UV lesiona el DNA de las células, formando enlaces entre timidinas adyacentes en las cadenas de DNA. Estos dímeros de timidina inhiben la replicación correcta del DNA durante la reproducción celular. La longitud de onda UV más eficaz para matar a los microorganismos está alrededor de 260 nm; estas longitudes de onda son absorbidas de forma específica por el DNA de la célula. La radiación UV se utiliza para controlar los microorganismos del aire. En las habitaciones de hospitales, guarderías, quirófanos y cafeterías se encuentran normalmente lámparas UV o germicidas. La luz UV se utiliza también para esterilizar vacunas, sueros y toxinas y ocasionalmente para las aguas residuales y de bebida. TECNICAS DE DESCONTAMINACIÓN QUÍMICA Hay que distinguir entre los métodos químicos de desinfección y los métodos químicos de esterilización. METODOS QUIMICOS DE DESINFECCION Van a producir la destrucción de todos los microorganismos patógenos. Son los desinfectantes y los antisépticos. Los desinfectantes son sustancias químicas aplicadas sobre objetos y superficies. Los antisépticos son sustancias químicas aplicadas sobre la piel y mucosas. Todo buen método de desinfección deberá cumplir las siguientes condiciones: Matar el mayor número de gérmenes o, al menos, todos los patógenos Ser económico. No ser corrosivo, tóxico ni irritante para los tejidos. Se deberá diluir al menos en agua 9

Tener un olor agradable. Los desinfectantes mas utilizados son: Detergentes catiónicos: Se pueden utilizar diluidos al 1% para la desinfección de manos. Su uso más corriente es para la limpieza y desinfección de paredes, suelos, ropa y objetos en general. Clorofenoles: Son muy eficaces y se suelen asociar con los detergentes catiónicos para mejorar el grado de desinfección. Compuestos clorados: Son utilizados para desinfección de superficies, ropas, urinarios, etc. Se suelen usar diluidos en agua y un ejemplo típico lo constituyen las lejías (hipocloritos). Acido fénico: Se utiliza diluido al 5% para la limpieza de objetos y superficies. Los antisépticos más utilizados son los siguientes: Alcoholes: Se utilizan para limpiar y desinfectar la piel, las manos, el filo del instrumental y algunas superficies pequeñas. Se utiliza el etanol para tejidos y el metanol para superficies que no vayan a estar en contacto con la piel. Mercuriocromo: En su composición aparece el mercurio, que tiene un efecto desinfectante muy bueno. Es especialmente utilizado en heridas superficiales debido a que las desinfecta y las mantiene secas y protegidas. Derivados yodados: Son utilizados para preparar la piel antes de una intervención quirúrgica, en la punción lumbar, antes de punción para hemocultivo, etc. Son extraordinariamente efectivos y ejercen su acción por oxidación. METODOS QUIMICOS DE ESTERILIZACION Los más empleados son: 14 Oxido de etileno: Se emplea en forma de gas, mezclado con dióxido de carbono, ya que el óxido de etileno puro es muy oxidante y al mezclarse con el óxido del aire podría explotar. Presenta un gran poder de penetración y como método de esterilización es muy efectivo y duradero. La esterilización se va a producir a temperaturas bajas (de menos de 40 grados) con una humedad relativa alta (40 60%) durante un tiempo de 3 a 8 horas (media de 5). Para que todo esto suceda se requiere de cámaras o instalaciones especificas para ello, que son muy caras. El óxido de etileno se puede aplicar a cualquier material sensible al calor y que no pueda esterilizarse por otros métodos, por ejemplo instrumentos de endoscopia, plásticos termolábiles, cauchos, material eléctrico. Glutaraldehído activado: Es un producto líquido que se utiliza diluido y a ph alcalino. En esta solución se introduce el material limpio y se deja actuar unas 3 horas. No es un método muy usado. Vapores de formol: Es utilizado en aparatos de anestesia, respiradores, incubadoras, etc., a temperaturas de esterilización que oscilan entre 17 C (durante 48 horas) y 50 C (en torno a las dos horas). Antes de su utilización es necesario eliminar el olor residual de formol. 10