LIGMIENTO Y RECOMBINCIÓN El principio de Mendel según el cual los genes que controlan diferentes caracteres son heredados de forma independiente uno de otro es cierto sólo cuando los genes existen en cromosomas diferentes. El genetista estadounidense Thomas Hunt Morgan y sus colaboradores demostraron en una serie amplia de experimentos con moscas de la fruta (que se reproducen con gran velocidad), que los genes se disponen de forma lineal en los cromosomas y que cuando éstos se encuentran en el mismo cromosoma, se heredan como una unidad aislada mientras que el cromosoma permanezca intacto. los genes heredados de esta manera se dice que están ligados. Sin embargo, Morgan y su grupo observaron también que este ligamiento rara vez es completo. Las combinaciones de los alelos de cada progenitor pueden reorganizarse. Durante la meiosis, una pareja de cromosomas homólogos puede intercambiar material durante lo que se denomina recombinación o entrecruzamiento. El entrecruzamiento se produce generalmente al azar a lo largo de los cromosomas, de modo que la frecuencia de recombinación entre dos genes depende de la distancia que los separe en el cromosoma. En consecuencia los científicos pueden trazar o dibujar mediante experimentos de reproducción apropiados, las posiciones relativas de los genes a lo largo del cromosoma o mapa génico. Basándose en la teoría cromosómica de la herencia enunciada por Sutton y cuyos aspectos escenciales son: SUMRIO Temas Página 1. Ligamiento 42 2. Detección 46 del Ligamiento 3. Frecuencias 51 de Recombinación Problemas Resueltos 54 Los genes están ubicados en los cromosomas La ordenación de los mismos es lineal l fenómeno genético de la recombinación le corresponde un fenómeno citológico de intercambio de segmentos cromosómicos, Morgan propuso que Existen parejas génicas situadas sobre el mismo par de cromosomas homólogos, llamando a este fenómeno ligamiento. 41
1 Ligamiento y Recombinación Cuando dos o más genes están localizados en el mismo cromosoma se dice que están ligados, y pueden estarlo en autosomas o cromosomas sexuales. Los genes que se encuentran en distintos cromosomas se distribuyen en las gametas independientemente uno del otro. Sin embargo, los genes que se encuentran en el mismo cromosoma tienden a permanecer juntos; es decir, a no sufrir separaciones ni combinaciones al azar durante la formación de las gametas. Genes ligados l analizar los resultados de una cruza de prueba a individuos dihíbridos se observarán resultados diferentes, dependiendo de la ubicación de los genes, es decir: en el mismo o en distintos cromosomas. ) Los genes que se encuentran en distintos cromosomas se distribuyen independientemente, por lo tanto del apareamiento abb x aabb se obtendrá una proporción esperada en la cruza de prueba de 1:1:1:1. genes con distribución independiente Ejemplo 8: consideremos dos pares de genes (, a) y (B, b) ubicados en distintos cromosomas: Progenitores abb x aabb Gametos ¼ B ¼ b ¼ ab ¼ ab 100% b ¼ abb: ¼ aabb: ¼ aabb F 1 ¼ abb: B 1) Los genes ligados no se distribuyen independientemente sino que tienden a permanecer juntos y en la misma combinación encontrada en los progenitores. Ejemplo 9: consideremos dos pares de genes (, a) y (B, b) ubicados en el mismo cromosoma: aabb sólo produce tipo gametas de tipo: ab. abb produce 4 tipos de gametas con igual igual frecuencia. completamente ligados o ligamiento completo Progenitores B/ab x ab/ab Gametos ½ B ½ ab 100% ab ½ B/ab : ½ ab/ab F 1 ab/ab sólo produce un tipo de gametas: ab. B/ab produce 2 tipos de gametas con igual frecuencia: B y ab. 42
Los productos de la meiosis ( gametos B y ab) presentan los genes ligados o unidos de la misma forma que se encuentran en el progenitor sometido a prueba. Son el resultado de no haber sufrido entrecruzamiento y se denominan gametos tipo progenitor o parental. B 2) Los genes ligados no siempre permanecen juntos, debido a que las cromátides no hermanas de cromosomas homólogos pueden intercambiar entre ellos segmentos de longitud variable durante la profase meiótica produciendo gametos de tipo recombinantes por virtud del entrecruzamiento. Cabe aclarar que en las meiosis que ocurre entrecruzamiento y recombinación además de los gametos de tipo progenitor se obtienen los gametos tipo recombinantes que constituyen nuevas combinaciones de los genes ligados en los progenitores. genes parcialmente ligados o ligamiento incompleto y recombinación Durante la meiosis cada cromosoma se duplica formando dos cromátides hermanas idénticas, el par de cromosomas homólogos se aparea (sinapsis) y se produce el entrecruzamiento entre cromátides no hermanas. Este último proceso requiere del rompimiento y la reunión de sólo dos de las cuatro bandas en cualquier punto del cromosoma. (Ver figura a continuación) Meiosis y Recombinación Entrecruzamiento Fin de Fin de la Meiosis I la Meiosis II B gameta tipo progenitor B B B b b gameta tipo recombinante b a a B b b a B a B gameta tipo recombinante ab a b a b gameta tipo progenitor ab 43
Los productos de la meiosis (gametos B y ab), presentan los genes ligados de la misma forma que se encuentran en los progenitores, resultan de las cromátides que no sufrieron entrecruzamiento y se denominan gametos tipo progenitor o parental. Los otros dos productos meiótico (gametos b y ab), resultantes del entrecruzamiento, constituyen nuevas combinaciones de los genes ligados originalmente en los progenitores y se denominan gametos tipo recombinantes. En los dihíbridos o dobles heterocigotas, para dos loci ligados, puede ocurrir que los dos alelos dominantes o tipo común estén en un cromosoma y los dos recesivos o mutantes en el otro. En este caso se dice que las relaciónes de enlace es de acoplamiento o cis. Cuando el alelo dominante de un locus y el recesivo del otro ocupan el mismo cromosoma la relación es de repulsión o trans. Los gametos recombinantes y progenitores serán diferentes en cada caso. B/ab fase de acoplamiento b/ab fase de repulsión Productos de la recombinación: genes ligados en fase de acoplamiento Resúmen B ) coplamiento a b Progenitor B/ab B b a B a b gameta gameta tipo gametas de tipo tipo progenitor recombinante progenitor genes ligados en fase de repulsión Gametos: T.P. B ab B)Repulsión T.R. ab b b Progenitor b/ab b B a b a B gameta gameta tipo gametas de tipo tipo progenitor recombinante progenitor B Gametos: T.P. T.R. b ab B ab 44
La recombinación, definida en relación a la meiosis, es el proceso que genera un producto haploide cuyo genotipo difiere de los dos genotipos progenitores (haploides) que formaron la célula (2n) que inició la meiosis. El producto así generado se denomina recombinante. Hay dos tipos de recombinación, las que producen recombinantes por método absolutamente diferentes: a) intercromosómica b) intracromosómica a) Recombinación intercromosómica. Es la que se produce mediante la distribución independiente de Mendel. Las dos clases recombinantes o nuevos fenotipos constituyen el 50% de los descendientes, 25% de cada tipo. Si encontramos esta frecuencia podemos inferir que las parejas génicas segregan independientemente. b) Recombinación intracromosómica. Se produce por entrecruzamiento. Esto ocurre entre cualquiera de dos cromátides no hermanas. Esto no sucede en todas las meiosis, pero cuando lo hace, la mitad de esos productos son recombinantes y la otra mitad serán gametos tipo progenitor. Las meiosis sin entrecruzamiento entre dos loci producirán sólo genotipos parentales para esas parejas génicas. La recombinación intracromosómica se pone de manifiesto en la aparición de una frecuencia de recombinación menor al 50%. El ligamiento físico entre las combinaciones génicas parentales impide la libre distribución de los genes (distribución independiente), la que genera una frecuencia de recombinación del 50%. Dada una descendencia, cómo podemos descifrar qué tipo de recombinación ha ocurrido? La respuesta está en L FRECUENCI DE RECOMBINNTES. 45
2 Detección del Ligamiento Para detectar la diferencia entre la transmisión independiente y el ligamiento de los genes el método más sencillo consiste en comparar el número de individuos de las clases fenotípicas observadas con los esperados según la transmisión independiente y probar la desviación de esos dos valores mediante una prueba de chi-cuadrado. Por ejemplo: un apareamiento entre un heterocigoto abb y un homocigoto doble recesivo aabb daría lugar a cuatro clases de descendientes: abb, abb, aabb y aabb. Si los dos pares de genes (,a) y (B,b) se distribuyeran independientemente, las cuatro clases se presentarían en la misma proporción de ¼ y con una prueba de X 2 se detectarían las desviaciones de dichas proporciones. Χ 2 Sin embargo, el ligamiento entre los genes no es la única causa que pueda afectar las frecuencias de determinadas clases. Las diferencias de viabilidad gamética o cigótica pueden alterar las proporciones de los pares de genes individuales de modo que, el cruzamiento a x aa puede no producir la proporción esperada: ½ a : ½ aa. Para distinguir estos efectos con X 2 se debe probar que los genes individualmente segregan en forma mendeliana, como cabría esperar. Para eso deben calcularse tres valores de chi-cuadrado cuando consideramos dos genes ligados: uno para comprobar la segregación conjunta (distribución independiente), y dos test para comprobar la segregación de cada uno de los pares de genes individualmente. Ejemplo10: Considere un apareamiento entre BB x aabb, a la F 1 abb se le hace cruza de prueba. Supongamos que las cuatro clases fenotípicas se presentan con los siguientes valores: abb abb aabb aabb Total Observados 140 38 32 150 360 Para comprobar si corresponde a un caso de ligamiento o a una distribución independiente de dos genes, realizamos un X 2 conjunto: H t: Hubo distribución independiente, por lo tanto, de la cruza de prueba a un dihíbrido se espera ¼ de cada clase fenotípica. 46
abb abb aabb aabb Total Obs. 140 38 32 150 360 Esp. 90 90 90 90 360 (O-E) 2 /E (50) 2 /90 (-52) 2 /90 (-58) 2 /90 (60) 2 /90 X 2 cal.= 135,19 l comparar el valor de X 2 cuadrado calculado con el valor de tabla (para tres grados de libertad y un nivel de significación del 5%) observamos que las desviaciones son altamente significativas. Cuál es la causa responsable de esta discrepancia?... Se calcula X 2 para el locus (,a), y se observan los siguientes resultados: H t: Hubo segregación normal, por lo tanto de la cruza de prueba a un heterocigota se espera ½ de cada clase fenotípica. a aa Total Obs. 140+38 = 178 32 +150=182 360 Esp. 180 180 360 (O-E) 2 /E (178-180) 2 /180 (182-180) 2 /180 X 2 cal.= 0.044 Y para el locus (B,b) H t: Hubo segregación normal, por lo tanto de la cruza de prueba a un heterocigota se espera ½ de cada clase fenotípica. a aa Total Obs. 140+32 = 172 38 +150=188 360 Esp. 180 180 360 (O-E) 2 /E (172-180) 2 /180 (188-180) 2 /180 X 2 cal.= 0.70 En el primer test realizado para comprobar la segregación conjunta se observa que las discrepancias entre lo observado y lo esperado son altamente significativas, entonces debe rechazarse la hipótesis de trabajo; es decir, los genes no se encontraban en distintos cromosomas y por lo tanto los genes no se distribuyeron independientemente. l realizar los otros dos test para comprobar la segregación de cada loci en forma independiente, los resultados indican concordancia entre lo esperado y lo observado, es decir, se hallan dentro de los límites de una desviación normalmente esperada. 1) Chi-cuadrado conjunto Grados de libertad (gl): Clases -1 4-1=3 X 2 t (3, 0.05)= 7,81 2) Chi-cuadrado para comprobar anormalidades en la segregación en ambos locus Locus Grados de libertad (gl): Clases -1 (gl)= 2-1 =1 X 2 t (1, 0.05)= 3,94 Locus B Grados de libertad (gl): Clases -1 (gl)= 2-1 =1 X 2 t (1, 0.05)= 3,94 l rechazar la hipótesis de la existencia de distribución independiente y poder asegurar que no hubo distorción en la segregación de los alelos de los dos loci podemos atribuir los resultados observados al ligamiento. Por ende, el locus y el locus B se encuentran en el mismo cromosoma. Conclusión 47
Si los locus y B se encuentran en el mismo cromosoma: Cuál es la relación de enlace en el dihíbrido? Para contestar esta pregunta se debe considerar lo siguiente: 1) al ser una cruza de prueba, el individuo ab/ab (el probador) sólo producirá gametas ab, por lo tanto las variaciones de la descencia son debidas al las diferencias en las gametas del dihibrido. 2) qué descendencia se encuentra en mayor proporción. En nuestro ejemplo los descendientes de tipo B/ab (140) y ab/ab (150). Esto indica que las gametas b y ab, que fueron aportadas por el progenitor probado, se encuentran en mayor proporción, por lo tanto son de tipo progenitor y presentan la combinación original del progenitor heterocigota ya que provienen de las cromátides que no sufrieron recombinación. Utilizando la notación para ligamiento: Progenitores: B/ab x ab/ab Gametas: B y ab b y ab ab T.P. T.R. Descendencia: B/ab Tipo Progenitor b/ab Tipo Recombinante B/ab Tipo Recombinante b/ab Tipo Progenitor 48
3 Frecuencia de Recombinación la proporción en que se forman las nuevas combinaciones de dos pares de genes, en comparación a la suma de todas las combinaciones, se la conoce como frecuencia de entrecruzamiento o de recombinación. frecuencia de recombinación Volviendo a los datos del ejemplo 10: B/ab b/ab ab/ab ab/ab Total Observados 140 38 32 150 360 Del total, 70 (38+32) son combinaciones nuevas, lo que representa una frecuencia de recombinación de 0,19 o 19%. La frecuencia de recombinación se define como: Frecuencia de recombinación = y se expresa como: Total de recombinantes Total de descendientes % de recombinacion = ( frecuencia de recombinacion) 100 La frecuencia de recombinación entre los genes aumenta o disminuye a medida que aumenta o disminuye la distancia de los genes y puede ser utilizado para construir mapas génicos. Es decir, existe una relación entre la frecuencia de recombinación entre los genes ligados y la distancia entre los mismos en el cromosoma. De acuerdo con lo anterior, por definición, un uno por ciento de recombinación es igual a una unidad de mapa (u.m.), también denominada centimorgan (cm). unidades de mapa o centimorgan B 19 cm Los valores de recombinación pueden variar desde 0 a 50 por ciento con distintos conjuntos de pares de genes. El límite inferior representa la ausencia de recombinación entre dos pares de genes, mientras que el límite superior representa un grado de recombinación igual a la transmisión independiente. 0% < frecuencia de recombinación > 50% 49
Si entre dos genes existe más del 50% de recombinación, es necesario utilizar otro método para calcular las distancias y el orden de los genes. Este método se denomina cruza de tres puntos y consiste en adicionar un tercer gen obteniendo diferentes productos meióticos o gametas. La figura siguiente muestra los distintos tipos de gametas posibles a partir de un trihíbrido en fase de acoplamiento: por qué el porcentaje de recombinación nunca es del 100%? Zona I Zona II B C B C B C B C B C a b c a b c a b c a b c Sin Recombinación Con Recombinación Gametas Tipo Progenitor BC abc Gametas Recombinantes en: Zona I Zona II Zona I y II bc bc bc abc abc abc Resumiendo: partir de un individuo trihíbrido con genes ligados se obtienen los siguientes tipos de gametas: 1) 2 Gametas tipo progenitor: con la combinación original de los genes del progenitor. Zona I y Zona II surgen de trazar una línea imaginaria a partir del marcador o gen central. si: la izquierda : Zona I, a la derecha Zona II. 2) 2 Gametas tipo recombinantes en Zona I: son las resultantes de un entrecruzamiento a la izquierda del marcador o gen central. 3) 2 Gametas tipo recombinantes en Zona II: como producto de un entrecruzamiento a la derecha del marcador o gen central. 4) 2 Gametas tipo doble recombinantes: son las que resultan del entrecuzamiento simultáneo en Zona I y Zona II. 50
Ejemplo 11: Utilizando los datos siguientes calcule: nálisis de un ligamiento de tres puntos Genotipos Observados BC/abc 390 abc/abc 374 bc/abc 27 abc/abc 30 Bc/abc 81 abc/abc 85 bc/abc 5 abc/abc 8 Total 1000 a) la frecuencia de recombinación de los genes. b) el orden en el mapa entre los tres genes. c) Cuáles son las distintas clases de las descendencia? Primero se debe determinar cuál es el genotipo de los progenitores. Para esto se tiene como dato que es una cruza de prueba, por lo tanto el genotipo de el progenitor probador es abc/abc. Para determinar el genotipo del otro progenitor debemos considerar las clases más numerosas de la descendencia llamadas de tipo progenitor y que se corresponden con las gametas de tipo progenitor que siempre se encuentran en mayor proporción. Gametas del dihíbrido Observados Descendencia de las que provienen BC/abc 390 BC abc/abc T.P. 374 abc T.P. En consecuencia las gametas BC y abc son copia de los cromosomas del dihíbrido cuyo genotipo sería: BC/abc. Una vez determinado el genotipo de los progenitores, es necesario saber el orden real de los genes en el cromosoma, o sea, cuál es el gen central. Para ello se debe recurrir a las clases doble recombinantes que provienen de las gametas que son producto de una doble recombinación (tanto en zona I como en zona II). Estas gametas pueden identificarse pues son las que aparecen en menor proporción en el conjunto de gametas. Descendencia Observados Gametas del dihíbrido de las que provienen bc/abc T.R 5 bc T.R abc/abc 8 abc Paso 1 Determinar el genotipo de los padres Paso 2 Determinar el oden de los genes Si se considera que al realizarse un doble entrecruzamiento, se intercambian el alelo central las cromátides no hermanas, al reconstruirlo debemos obtener la combinación original, lo que confirma el alelo central y por lo tanto el orden real de los alelos en el cromosoma. 51
b C B C a B c a b c Una vez determinado el orden se puede calcular la frecuencia de recombinación entre los tres alelos, o sea, la proporción de los recombinantes observados para cada par de genes respecto al número total de individuos de la descendencia: Genotipos Observados recombinantes bc/abc R. Zona I 27 (27+30)/1000= abc/abc 30 5,7% Bc/abc R. Zona II 81 (81+85)/1000= abc/abc 85 16,7% bc/abc D.R. 5 (5+8)/1000= abc/abc 8 1,3% Total 1000 Cálculo de la frecuencia de recombinación entre a y b. Este valor se obtiene de considerar el porcentaje de recombinantes en zona I más los dobles recombinantes, ya que estos incluyen entrecruzamientos en esta zona. % recombinación entre a y b= % de recombinación en zona I + % D.R. % recombinación entre a y b= 5,7 + 1,3 % recombinación entre a y b= 7% Cálculo de la frecuencia de recombinación entre b y c. Este valor se obtiene de considerar el porcentaje de recombinantes en zona II más los dobles recombinantes, ya que estos incluyen entrecruzamientos en esta zona. % recombinación entre b y c= % de recombinación en zona II + % D.R. % recombinación entre b y c= 16,7 + 1,3 % recombinación entre b y c= 18% Cálculo de la frecuencia de recombinación entre a y c. 5,7 + 16,7 + 2(1,3)= 25% % recombinación entre a y c= 25 % Nótese que para calcular la recombinación entre los genes extremos a la suma de los porcentajes de recombinación en zona I y en zona II se agrega el doble de la frecuencia de los doble recombinantes (2,6%). l añadirlo al 22,4 por ciento resulta un total de 25% para a-c, que es la suma exacta de las distancias a-b (7) y b-c (18). Paso3 Cálculo de la frecuencia de recombinación 52
Las distancias génicas se obtienen a partir del porcentaje de recombinación, siendo un uno por ciento de recombinación igual a un centimorgan (cm) o una unidad de mapa (u.m.) Cálculo de la distancia entre a y b= % de recombinación entre a y b= 7% 7 u.m. Paso 4 Determinar las distancia génicas Cálculo de la distancia entre b y c= % de recombinación entre b y c = 18% 18 u.m. Cálculo de la distancia entre a y c= % de recombinación entre a y c= 25% 25 u.m. a b c Paso 5 Dibujar el mapa 7 u.m. 18 u.m. COINCIDENCI E INTERFERENCI La baja frecuencia de los dobles entrecruzamientos indica la dificultad que se presenta para separar en un entrecruzamiento el gen central de los genes que se hallan a ambos lados del mismo. Esta dificultad aumenta ya que los dobles entrecruzamientos se producen por lo general con una frecuencia incluso menor a la esperada. coincidencia interferencia Si el entrecruzamiento de una pareja de loci no afectase al entrecruzamiento de una pareja vecina, se espera que los dobles entrecruzamientos se presenten con una frecuencia igual al producto de ambas frecuencias (probabilidad combinada de dos sucesos independientes). Sin embargo la frecuencia observada siempre es menor que la esperada. parentemente el entrecruzamiento en una región interfiere con el entrecruzamiento en una región vecina. Este fenómeno se designa como interferencia (I). La medida de la interferencia se calcula a partir del coeficiente de coincidencia (c.c.) que es la relación entre los dobles entrecruzamientos observados y los dobles entrecruzamientos esperados. I = 1 c.c. = 1 Dobles recombinantes observados Dobles recombinantes esperados 53
PROBLEMS RESUELTOS: No hay problemas resueltos, hay problemas más o menos resueltos 1) En la meiosis femenina de Drosophila melanogaster la fracción de recombinación entre los loci ligados y B es 0,4. Se cruza un heterocigoto b/ab con un homocigoto recesivo ab/ab. Indique la descendencia posible de este apareamiento. Solución: El problema indica la existencia de ligamiento entre los dos loci. demás, al indicar que la recombinación es de 0,4 también nos dice un porcentaje de recombinación del 40 % y, por lo tanto, antre y B hay 40 u.m. l realizar el apareamiento: P) b/ab x ab/ab b a b a B a b El progenitor dihíbrido se encuentra en fase de repulsión En que proporción se encuentran las gametas del progenitor dihíbido? G) Tipo Progenitor Todas 30% b ab 30% ab Tipo recombinantes 20% B 20% ab El porcentaje de recombinación es la relación que hay entre los recombinantes y el total de la descendencia. l tener ese dato se sabe que el 40% de las gametas producidas son de tipo recombinantes, 20% de cada tipo. Las gametas de tipo progenitor, por lo tanto, constituyen el 60%, 30% de cada una. Por qué mitad de cada tipo? Porque la separación de los homólogos en la meiosis se realiza y por lo tanto las cromátides migran con su carga génica ecuacionalmente; más cuando consideramos genes ligados la frecuencia dependerá de la distancia de los mismos. De la unión de las gametas de ambos progenitores obtenemos la descendencia: Respuesta: descendencia de tipo progenitor: 30% b/ab y 30% ab/ab y descendencia de tipo recombinante: 20% B/ab y 20% ab/ab. Los términos tipo progenitor y tipo recombinante se utilizan en fase haploide (gametas) y en fases diploides (genotipo y fenotipos). 2) En una especie animal hay tres caracteres recesivos respecto al normal: albino (a), sin cola (s) y enano (e). Los tres loci que los determinan están situados en el mismo cromosoma. Se realizaron cruces de prueba a individuos heterocigotos para estos tres genes y la progenie (1000 individuos) fue clasificada como : 5 enanos; 6 albinos, sin cola; 69 normales; 67 albinos, enanos,sin cola; 382 enanos, sin cola; 379 albinos; 48 sin cola; y 44 albinos enanos. Explique estos resultados. Solución: Para explicar los resultados se debe, al saber que están ligados; determinar la frecuencia de recombinación de los genes, el orden que presentan los genes en el cromosoma y cuáles son 54
las distintas clases de las descendencia. Para ello se siguen los pasos indicados en la parte teórica basados en la descendencia. Paso 1: Determinar los genotipos de los progenitores Los fenotipos más abundantes corresponden a los tipo progenitor: los 382 enanos, sin cola y los 379 albinos. l saber que es una cruza de prueba (el progenitor probador, triple recesivo, sólo aportará gametas de tipo ase ) y teniendo en cuenta los símbolos indicados se puede escribir los genotipos de estos individuos: Fenotipos Observados Genotipos 382 enanos, sin cola se/ase 379 albinos ase/ase De esto se desprende que las gametas, aportadas por el progenitor trihíbrido, de tipo progenitor fueron se y ase. El genotipo del progenitor, por lo tanto, es se/ase, ya que esas gametas están indicando qué alelos se encuentran en cada uno de los homólogos del progenitor sometido a la cruza de prueba. Recordar que este paso no nos indica cuál es el locus central. Para ello debemos pasar al segundo paso. Paso 2: Determinar el orden de los genes Para determinar el orden de los genes es necesario conocer los genotipos de los progenitores y los genotipos de los doble recombinantes, que como ya fue mencionado son los que se encuentran en menor proporción en el conjunto de la descendencia. Fenotipos Observados Genotipos 5 enanos Se/ase 6 albinos sin cola ase/ase En el doble entrecruzamiento se intercambia el alelo central entre las cromátides no hermanas, al reconstruirlo se debe obtener la combinación original, lo que confirma el alelo central y por lo tanto el orden real de los cromosomas. S e s e a s E a S E Si hubiese considerado como central al locus e, por ejemplo, la situación hubiera sido: e S E S a E s a e s Observamos que al intentar reconstruir el genotipo del progenitor, se obtiene otro que no se corresponde con el que considerablemente debía ser, de acuerdo a la descendencia que está en mayor proporción. Por lo tanto el orden correcto es el que establece al locus s como central. 55
Paso 3: Determinar las frecuencias génicas: Fenotipos Genotipos recombinantes Observados Normal SE/ase 69 (69+67)/1000= R. Zona I lbino, ase/ase 67 13,6% enano,sin cola Sin cola se/ase R. Zona II 48 (48+44)/1000= lbino, enano ase/ase 44 9,2% Enano se/ase D.R. 5 (5+6)/1000= lbino, sin cola ase/ase 6 1,1% % de recombinación entre a y s: 13,6 + 1,1= 14,7% % de recombinación entre s y e: 9,2 + 1,1 = 10,3% % de recombinación entre a y : 13,6 + 9,2 + 2(1,1)= 25% Paso 4: Determinar las distancias génicas Cálculo de la distancia entre a y s= % de recombinación entre a y s=14,7% 14,7 u.m. Cálculo de la distancia entre s y e= % de recombinación entre s y e = 10,3% 10,3 u.m. Cálculo de la distancia entre a y e= % de recombinación entre a y e= 25% 25 u.m. Paso 5: Dibujar el mapa a s e 7 u.m. 18 u.m. 56
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