ÍNDICE. Patrones Nucleares Membranosos...7. Patrones Nucleoplásmicos...7. Patrones Nucleolares...9. Patrones del Aparato del Huso Mitótico...

ÍNDICE INTRODUCCIÓN...2 CARACTERÍSTICAS GENERALES...3 FUNCIONAMIENTO GENERAL DEL PROGRAMA...4 INTRODUCCIÓN DE RESULTADOS...5 CLASIFICACIÓN PATRONES programa ana...7 Patrones Nucleares Membranosos...7 Patrones Nucleoplásmicos...7 Patrones Nucleolares...9 Patrones del Aparato del Huso Mitótico... 10 Patrones Citoplasmáticos... 11 Negativos...12 Indeterminados...13 Addendum...13 Notas...13 clasificación patrones programa anca... 14 INFORMES PERIÓDICOS... 15 Informes Mensuales...15 Informes Trimestrales...17 INFORMES FINALES...22 INSTRUCCIONES PARA CUMPLIMENTAR LOS FORMULARIOS... 27 MATERIAL DE APOYO...28 FICHA DE INSCRIPCIÓN... 29 Identificación del laboratorio... 29 Codificaciones...31 1

INTRODUCCIÓN Los anticuerpos se miden mediante su interacción específica con un antígeno basada en su capacidad de reconocimiento mutuo. La propia naturaleza de esta unión hace que los resultados obtenidos sean método-dependientes, lo que supone un obstáculo a la hora de interpretar los informes de laboratorio. Desde un punto de vista metrológico, la existencia de métodos y materiales de referencia es extremadamente importante para superar ese obstáculo. Sin embargo, no se han definido todavía métodos de referencia para la medida de anticuerpos autoinmunes lo que limita la tarea de organizaciones dedicadas a la estandarización a acciones como la asignación de unidades arbitrarias a los mismos. La estandarización de la detección por inmunofluorescencia de autoanticuerpos se basa en la identificación del patrón de marcaje del material de referencia y, en su caso, en su titulación usando el mismo método y las mismas condiciones de trabajo de rutina. El título puede expresarse como potencial (diluciones dobles a partir de la dilución inicial) y proporciona un factor de conversión de los resultados obtenidos. Por otro lado, las determinaciones de autoanticuerpos mediante la técnica de ELISA pueden proporcionar, según el fabricante, resultados cualitativos o resultados cuantitativos expresados en unidades arbitrarias que en muy escaso número son trazables a un material de referencia internacional. Por ello, tanto en el caso de la inmunofluorescencia indirecta como en el de los ELISA, la participación en programas externos de la calidad se convierte en la principal herramienta en el camino hacia la estandarización de la medida de autoanticuerpos. Los objetivos de los programas de control de calidad en general son proporcionar a los participantes una valoración objetiva de las características de su procedimiento de medida dentro de sus laboratorios y en relación a otros laboratorios, proporcionar información sobre el nivel de prestaciones de los kits y métodos existentes, e identificar factores asociados con una buena y mala realización de la medida. El Control Externo debe complementar pero no sustituir al Control Interno de la calidad. Este último facilita, mediante el uso de un control positivo en cada serie, la detección de cambios debidos a factores como el sustrato antigénico, el conjugado o el sistema de revelado. El programa internacional de evaluación externa de la calidad organizado por Biosystems S.A ( PREVECAL ) pretende contribuir a la formación del especialista en la interpretación de los resultados, puesto que se trata de una valoración subjetiva que requiere un aprendizaje y experiencia adecuada, y al mismo tiempo ofrecer a los laboratorios la posibilidad de completar su programa de Control Interno con una estimación objetiva de la calidad de sus procedimientos de medida. El programa es consecuencia de la política de Biosystems S.A de colaborar de forma activa con sus clientes para conseguir resultados del más alto nivel. 2

CARACTERÍSTICAS GENERALES Duración de los programas: 1 año (Enero a Diciembre) Identificación del laboratorio: mediante código (anónimo) Introducción de resultados: on-line Envío de informes periódicos y final a la dirección electrónica de cada participante Programas: Anticuerpos Antinucleares (ANA): Determinación por Inmunofluorescencia - presentación: 12 x 0,3 ml - código: 18046 Anticuerpos Anti-nDNA (ndna): Determinación por Inmunofluorescencia - presentación: 12 x 0,3 ml - código: 18047 Número de observaciones de control que se realizan: 12 Periodicidad: mensual Informes: periódico cada mes (12 informes) y final al terminar el programa (1 informe). Celíaco: - presentación: 4 x 0,3 ml - código: 18051 Determinación por Inmunofluorescencia - Anticuerpos Anti-Endomisio IgA (AEA) Determinación por ELISA - Anticuerpos Anti-tTG IgA - Anticuerpos Anti-tTG IgG - Anticuerpos Anti-Gliadina IgA - Anticuerpos Anti-Gliadina IgG - Anticuerpos Anti-Gliadina Deaminada IgA - Anticuerpos Anti-Gliadina Deaminada IgG - Anticuerpos Anti-Gliadina Deaminada Polivalente Número de observaciones de control que se realizan: 4 Peridiocidad: trimestral Informes: periódico cada trimestre (4 informes) y final al terminar el programa (1 informe). Anticuerpos Anti-Citoplasma de Neutrófilos (ANCA): Determinación por Inmunofluorescencia - presentación: 4 x 0,3 ml - código: 18056 Número de observaciones de control que se realizan: 4 Peridiocidad: trimestral Informes: periódico cada trimestre (4 informes) y final al terminar el programa (1 informe). 3

FUNCIONAMIENTO GENERAL DEL PROGRAMA Los laboratorios interesados en participar en los programas (ANA, ndna, Celíaco y ANCA) deben solicitarlo a su distribuidor local de BioSystems S.A. o mediante la cumplimentación del formulario Inscripción de la página web de PREVECAL (www.prevecal.net). Para hacer efectivo el registro en el programa, el laboratorio también podrá cumplimentar los formularios que se encuentran al final de este libro y entregarlos al distribuidor local: 1. Identificación del laboratorio 2. Codificaciones del método de trabajo Una vez inscrito, el laboratorio recibirá los kits de los programas en los que vaya a participar, que consta del correspondiente material: - Sueros control etiquetados con el mes en que deben analizarse - Hojas de instrucciones sobre la preparación, estabilidad, almacenamiento, etc. - Las correspondientes fichas periódicas para anotar el resultado - 2 fichas para avisar a la organización de PREVECAL sobre eventuales modificaciones realizadas por el laboratorio en el transcurso del ciclo Mediante el código del laboratorio y una contraseña que la organización les manda para asegurar la protección y confidencialidad de sus resultados, se accede a la página de resultados, donde el laboratorio introduce sus resultados y quedan registrados en la base de datos del programa. Al finalizar el mes, se generan los informes y éstos son enviados a la dirección de correo electrónica de cada laboratorio. 4

INTRODUCCIÓN DE RESULTADOS Los pasos a seguir para la introducción de resultados son los siguientes: 1. Dirigirse a www.prevecal.net 2. En el menú de Introducción de Resultados introducir el código del laboratorio (login) y pulsando el tabulador se introduce la contraseña 3. Se elige el programa ( ANA, DNA, Celíaco y ANCA) 4. Introducción de resultados : 1. Para las determinaciones de Inmunofluorescencia ANA y ANCA: Seleccionar el patrón observado en la determinación DNA y Anti-Endomisio: Seleccionar el rango del título obtenido en caso de resultado positivo. 2. Para las determinaciones ELISA Introducir la concentración obtenida en U/ml y seleccionar el rango correspondiente a la concentración reportada. La muestra puede clasificarse según la tabla siguiente: Negativo Equívoco Positivo bajo, corresponde al rango de concentraciones que se encuentran por encima del valor de la concentración a partir de la cual una muestra se considera positiva hasta la mitad del rango de concentraciones positivas. Positivo elevado, corresponde al rango de concentraciones que se encuentran por encima de la mitad del rango de positivos hasta el último estándar positivo. 5

Ejemplo: Anticuerpos Anti-tTG IgA Biosystems. Rangos Biosystems: <8 U/ml Negativo 8-12 U/ml Equívoco >12-100 U/ml Positivo El resultado obtenido es: 25 U/ml El resultado reportado es: Positivo bajo Abs N Eqv Positivo bajo Positivo elevado U/mL 0 8 12 44 100 5. Finalmente se pulsa Cerrar y los resultados quedan registrados En el caso de que se haya cometido algún error se pueden cambiar los resultados hasta la fecha del cierre. El último día para introducir los resultados: - Programas ANA y DNA: El día 20 de cada mes. - Programa Celíaco y ANCA: El día 20 de los correspondientes meses: Marzo, Junio, Septiembre y Diciembre Únicamente se podrán introducir los resultados del mes en curso. Al terminar el ciclo del programa, la organización de PREVECAL enviará el informe final a cada laboratorio en el plazo máximo de 1 mes, juntamente con el Diploma de Participación. 6

CLASIFICACIÓN PATRONES PROGRAMA ANA* 1. Patrones Nucleares Membranosos 1.1 Patrón nuclear membranoso liso Fluorescencia homogénea lisa en forma de anillo de la membrana nuclear en células en interfase. Algunas muestras con anticuerpos potentes pueden dar la impresión de marcaje nuclear completo. Un patrón similar se observa en células en telofase. En células en metafase la fluorescencia se localiza de manera difusa en el citoplasma y el material cromosómico no está marcado. 1.2 Patrón nuclear membranoso punteado Fluorescencia punteada discontinua a lo largo de la membrana nuclear. Enfocando a través del núcleo, el marcaje punteado puede verse en la superficie de todo el núcleo. Un patrón similar se observa en telofase. En metafase, la fluorescencia se localiza de manera difusa por todo el citoplasma. Algunas muestras con anticuerpos potentes pueden dar la impresión de marcaje nuclear completo 2. Patrones Nucleoplásmicos 2.1 Patrón nuclear homogéneo Fluorescencia difusa uniforme cubriendo la totalidad del nucleoplasma, a veces acentuadamente en la periferia nuclear. Se asocia con distintos anticuerpos, principalmente dirigidos contra componentes cromosómicos (DNA, histonas, ). En algunos casos, puede observarse un marcaje más intenso en el borde interno del núcleo (borde nuclear). El marcaje nucleolar es variable. En metafase y telofase, puede observarse marcaje homogéneo o periférico de la cromatina. *Clasificación basada segun EULAR (European League against Rheumatism) (Nov 06) 7

2.2 Patrones nucleares moteados 2.2.1 Patrón nuclear moteado-matriz nuclear Motas grandes variables en todo el nucleoplasma, antiguamente llamado marcaje de matriz nuclear. Los nucleolos son negativos. El citoplasma en metafase y en telofase muestra motas difusas y en las placas metafásica y telofásica la cromatina es negativa. 2.2.2 Patrón nuclear moteado grueso Motas de tamaño variable generalmente grandes densamente distribuidas en todo el nucleoplasma de las células en interfase. Nucleolos negativos. El citoplasma de las células en metafase y telofase muestra motas con condensación alrededor de la placa de cromatina, que se presenta negativa. El patrón es el más comúnmente asociado con la tinción de spliceosomes. 2.2.3 Patrón nuclear moteado fino Marcaje moteado fino de distribución uniforme, a veces muy denso con apariencia casi de patrón homogéneo. Los nucleolos pueden ser positivos (especialmente con los anticuerpos anti-ssb/la) o negativos. El citoplasma de células en metafase muestra motas finas con condensación alrededor de la placa de cromatina, que se presenta negativa. El núcleo de las células en telofase puede ser positivo, a veces incluso más intenso que las células en interfase. 2.2.4 Patrón granulado tipo Scl70 Marcaje granulado fino uniforme del nucleoplasma y de las áreas cromosómicas de las células en metafase y telofase, a menudo con nucleolos positivos. El marcaje puede parecer homogéneo a pocos aumentos. El marcaje no es exclusivo de anticuerpos anti-scl70. 2.2.5 Patrón nuclear moteado pleomórfico (Anti-PCNA) Los núcleos de las células en proliferación (fase S) muestran variedad de motas, desde finas a muy gruesas e irregulares en el nucleoplasma (10-50% de las células dependiendo de la preparación celular). En algunas células los nucleolos también muestran marcaje. Las células en reposo (fase G) y en metafase son negativas. El patrón también es conocido como patrón anti-pcna (antiproliferating cell nuclear antigen), comúnmente observado en asociación con otros patrones. 8

2.2.6 Patrón centromérico Puntos discretos bastante uniformes localizados en todo el núcleo (de 40 a 60 puntos por núcleo). Las células en telofase y metafase siempre muestran estos puntos en el cinetocoro de los cromosomas, y pueden reconocer varias proteínas centroméricas (CENP-A, B, C, D, E). 2.2.7 Puntos nucleares múltiples De 5 a 10 puntos por núcleo que marcan estructuras nucleares a menudo denominadas cuerpos PML (ProMyelocytic Leukemia). Los cromosomas en células en telofase y metafase son negativos. 2.2.8 Patrón cuerpo enrollado De 2 a 6 puntos por núcleo localizados en el nucleoplasma, a menudo muy próximos a los nucleolos. Las placas metafásica y telofásica son negativas. 3. Patrones Nucleolares 3.1 Patrón nucleolar homogéneo Fluorescencia de todo el nucleolo entero sin marcaje de cromosomas ni de las regiones organizadoras nucleolares en las células en división. 3.2 Patrón nucleolar grumoso Gránulos grandes agrupados y brillantes que corresponden a los centros fibrilares de los nucleolos y a los cuerpos espirales. En las células mitóticas, las placas metafásica y la telofásica muestran borde fluorescente irregular en forma de abanico. 3.3 Patrón nucleolar punteado Granos discretos y pequeños principalmente localizados en el centro de los nucleolos. En células en metafase, pueden observarse de 2 a 5 motas discretas en el cuerpo cromatínico, correspondientes a las regiones organizadoras de los nucleolos. 9

4. Patrones del Aparato del Huso Mitótico 4.1 Patrón del centriolo (centrosoma) El uso en células en metafase muestra punto fluorescente discreto en cada polo del huso, dispuestos en perpendicular el uno del otro. En el citoplasma de células en interfase pueden observarse uno o dos puntos brillantes adyacentes al núcleo. 4.2 Patrón del polo del huso (NuMA, nuclear mitotic apparatus) Marcaje del área del polo del huso sólo en células en metafase (triangular o en forma de plátano). Las fibras del huso son negativas con un patrón más lineal en células en telofase. En células en reposo y en células en telofase, mayoritariamente puede observarse un patrón nuclear moteado fino, aunque pueden también ser negativas. 4.3 Patrón de las fibras del huso Marcaje de la totalidad del aparato de las fibras del huso, desde el polo a la placa cromatínica en células en metafase. No hay marcaje en células en reposo o en división. 4.4 Patrón cuerpo medio (MSA) En células en profase y metafase la fluorescencia se localiza en la región cromosómica como finos reflejos perpendiculares al borde de la placa metafásica. En células en telofase el marcaje se restringe al surco de separación y al estrecho cuerpo medio que conecta las células al acabar la citocinesis. Células en fase S y en fase G2 muestran un marcaje con motas nucleares discretas o desiguales. El patrón se debe a los anticuerpos contra el antígeno MSA-2 (mitotic spindle antigen 2). 4.5 Patrón cenp-f (MSA-3) El rasgo más característico se observa en células en metafase, dónde el patrón lo constituyen dos juegos de gránulos grandes densos dispuestos alrededor de la placa metafásica como una cremallera. Estos gránulos son parte de los centrómeros. El citoplasma circundante muestra un marcaje difuso. En células en profase, se observa un punteado denso de los cromosomas. En algunas 10

células en interfase puede observarse un patrón nuclear moteado denso muy fino. El patrón se debe a los anticuerpos contra el antígeno MSA-3 (mitotic spindle antigen 3) que puede ser idéntico a la proteína centromérica CENP-F. 5. Patrones Citoplasmáticos 5.1 Patrón citoplasmático moteado fino Gránulos finos dispersos por todo el citoplasma, siendo más evidentes hacia la periferia de la célula, adoptando a veces una apariencia de polvo de estrellas. El núcleo y los nucleolos son negativos. Este patrón es característico de anticuerpos contra las trna sintetasas. El material cromosómico en células en metafase es negativo. 5.2 Patrón citoplasmático difuso Un marcaje de granular denso muy fino a homogéneo, o patrón turbio, cubriendo parte o la totalidad del citoplasma. No hay marcaje del núcleo, pero los nucleolos estar homogéneamente marcados cuando los anticuerpos van dirigidos a ribonucleoproteínas ribosomales, precursoras de lo que se encuentra en los nucleolos. El material cromosómico en células en metafase es negativo. 5.3 Patrón tipo mitocondrial Gránulos grandes e irregulares que se extienden desde el núcleo por todo el citoplasma en forma reticular. La mayor agrupación antigénica reconocida se denomina M2, y lo constituyen cuatro grandes proteínas de la membrana interna mitocondrial. El núcleo y los nucleolos son negativos, aunque sueros muy potentes pueden dar una impresión de patrón nuclear moteado. 5.4 Patrón tipo lisosomal Gránulos irregulares de intermedios a grandes distribuidos por todo el citoplasma, debidos a anticuerpos dirigidos contra orgánulos como lisosomas o peroxisomas. El núcleo y los nucleolos son negativos, y marcaje difuso del citoplasma de células en división. 11

5.5 Patrón tipo golgi Marcaje de un orgánulo polar adyacente al núcleo y compuesto de gránulos grandes e irregulares. El núcleo y los nucleolos son negativos. Marcaje difuso del citoplasma de células en división, más intenso alrededor del material cromosómico. 5.6 Patrón tipo actina Marcaje de fibras de stress dispuestas en un sólo plano focal justa bajo la membrana plasmática. El núcleo, los nucleolos y los cromosomas en metafase son negativos. Fibras de actina abarcando toda la longitud celular hasta cerca de la membrana plasmática. También pueden observarse extensiones de la membrana celular en forma de dendrita. 5.7 Patrón tipo vimentina Fibras abundantes extendiéndose a través de todo el citoplasma marcando una red de fibras radiales así como haces agregados alrededor del núcleo en forma enrollada. El núcleo y los nucleolos son negativos. 6.1 Negativo (ejemplo 1) 6. Negativos No se observa fluorescencia verde ni en núcleo ni en citoplasma. Algunos puntos aislados y a menudo irregulares corresponden a agregados del conjugado. Las estructuras celulares aparecen de color marronoso (por ejemplo, los nucleolos), especialmente en preparaciones viejas o conservadas con agentes antiatenuación. Los restos celulares pueden dar lugar a artefactos en forma de puntos fluorescentes verdosos. 6.2 Negativo (ejemplo 2) Fluorescencia muy tenue del núcleo, citoplasma o ambos, alcanzando una intensidad menor a la de una muestra positiva débil. Esto puede juzgarse mejor si se incluye un suero ANA débilmente positivo como control de sensibilidad en cada serie diaria junto con un control negativo ANA justo por debajo del valor discriminante y un control positivo ANA justo por encima del valor discriminante. 12

7. Indeterminado Cualquier otro patrón de marcaje relacionado con orgánulos o estructuras subcelulares, y que no ha sido incluido en esta clasificación taxonómica. Addendum Es necesario recordar que algunos laboratorios y kits utilizan conjugados FITC dirigidos contra todas las subclases de inmunoglobulinas. Este glosario está basado en observaciones realizadas con un conjugado específico de IgG. Los laboratorios que usan secciones de tejido animal como riñón o hígado de rata como sustrato para los ANA, normalmente pierden patrones de fluorescencia como el patrón nuclear moteado pleomórfico, el patrón centromérico, los puntos nucleares múltiples, el patrón cuerpo enrollado, algunos patrones nucleolares y la mayoría de patrones citoplasmáticos. Los patrones relacionados con el aparato del huso mitótico también suelen perderse en secciones de tejido. El patrón tipo mitocondrial puede observarse en muchos tejidos como un patrón nuclear moteado grueso, antiguamente detectado en secciones de riñón de animal. El patrón nuclear membranoso fino a menudo puede observarse claramente en hígado de rata. El valor discriminante para un resultado ANA positivo en células HEp2 es normalmente por encima de una dilución 1:80, mientras que en secciones de tejidos suele ser a diluciones más bajas. Ciertos patrones de marcaje suelen presentarse juntos en un mismo suero, como por ejemplo, puntos nucleares múltiples con patrón tipo mitocondrial (ambos característicos de cirrosis biliar primaria) y patrón nuclear moteado pleomórfico junto con patrón nuclear homogéneo, nuclear moteado fino o nuclear moteado grueso (característicos de lupus eritematoso sistémico). También, el patrón centromérico es comunmente observado junto con el patrón tipo mitocondrial. NOTAS A causa de la escasa relevancia diagnóstica en la diferenciación de los siguientes grupos de patrones, se considerarán correctas, en el reporte final, todas las respuestas incluidas en el mismo grupo: - Patrones moteados: 2.2.1. Patrón nuclear moteado matriz nuclear, 2.2.2. Patrón nuclear moteado grueso y 2.2.3. Patrón nuclear moteado fino - Patrones nucleolares: 3.1. Patrón nucleolar homogéneo, 3.2. Patrón nucleolar grumoso y 3.3. Patrón nucleolar punteado - Negativos: 6.1. Negativo (ejemplo 1), 6.2. Negativo (ejemplo 2) 13

CLASIFICACIÓN PATRONES PROGRAMA ANCA Patrón C-ANCA Marcaje granular difuso del citoplasma del neutrófilo con mayor intensidad interlobular. El núcleo y los nucleolos son negativos. El patrón de marcaje es principalmente, el resultado de la unión del anticuerpo con el antígeno proteinasa 3 (PR-3). PR-3 es una serín proteasa con un peso molecular de 39 kd que se encuentra en los gránulos azurófilos de los neutrófilos humanos y los monocitos. Patrón P-ANCA Marcaje compactado de la zona perinuclear del citoplasma del neutrófilo, a menudo con extensión nuclear. Este patrón de marcaje es principalmente, el resultado de la unión del anticuerpo con el antígeno mieloperoxidasa (MPO). MPO es un heterodímero con un peso molecular de aproximadamente 140 kd presente en los gránulos azurófilos de los neutrófilos. Negativo No se observa fluorescencia verde ni en el núcleo ni el citoplasma, aunque a veces el citoplasma o el núcleo y el citoplasma pueden presentar una fluorescencia muy tenue que no corresponde a ningún marcaje específico. 15

Servicio global de calidad INFORMES MENSUALES ANTICUERPOS ANTINUCLEARES (ANA) Determinación por Inmunofluorescencia Centro: CLINICAL DIAGNOSTIC LABORATORY OF CITY HOSPITAL Código: XXXXXX Sustrato: Hep-2( Biosystems) Muestra: Julio-12 Isotipo: IgG (BioSystems) Dilución inicial: 1/80 Su resultado: 2.1 Nuclear Homogéneo Nº Respuestas recibidas: 55 Resultado real: 2.1 Nuclear Homogéneo Respuestas correctas: 70% DESCRIPCIÓN DEL PATRÓN: 2.1 Patrón nuclear homogéneo Fluorescencia difusa uniforme cubriendo la totalidad del nucleoplasma. El marcaje nucleolar se presenta negativo. En la célula mitótica se observa marcaje intenso de la cromatina. Se asocia con distintos anticuerpos, principalmente dirigidos contra componentes cromosómicos (DNA, histonas...). SIGNIFICADO CLÍNICO: La detección de anticuerpos anti-nucleosoma y anti-dsdna es una ayuda en el diagnóstico de lupus sistémico eritematoso (LSE). Los anticuerpos anti-histona están involucrados en LSE idiopático y LSE inducido por drogas. 15

Servicio global de calidad INFORMES MENSUALES ANTICUERPOS ANTI ndna (DNA) Determinación por Inmunofluorescencia Centro: CLINICAL DIAGNOSTIC LABORATORY OF CITY HOSPITAL Código: XXXXXX Sustrato: CL (BioSystems) Muestra: Julio-12 Isotipo: IgG (BioSystems) Su resultado: Positivo Nº Respuestas recibidas: 55 Título: 1/20 Título esperado: 1/20 HISTOGRAMA SEGÚN TÍTULOS: * valoración*: TOLERABLEe rformance on final reports *Tolerable: cuando su título se encuentra entre menos y más un título esperado. *No tolerable: cuando su título se encuentra por encima o por debajo de más de un título esperado. 16

Servicio global de calidad INFORMES TRIMESTRALES ANTICUERPOS ANTI-ENDOMISIO (AEA) Determinación por Inmunofluorescencia Centro: CLINICAL DIAGNOSTIC LABORATORY OF CITY HOSPITAL Código: XXXXX Muestra: Junio-12 Fabricante Sustrato: Biosystems Isotipo: IgA (BioSystems) Su resultado: Positivo % Respuestas recibidas: 95 % Título: 1/20 Título esperado: 1/20 HISTOGRAMA SEGÚN TÍTULOS FOTO MUESTRA * Anticuerpos Anti-endomisio Positivo(AEA) VALORACIÓN*: TOLERABLE *Tolerable: cuando su título se encuentra entre menos y más un título esperado. *No tolerable: cuando su título se encuentra por encima o por debajo de más de un título esperado. 17

Servicio global de calidad INFORMES MENSUALES ANTICUERPOS ANTI-tTRANSGLUTAMINASA IgA Determinación por ELISA Centro: CLINICAL DIAGNOSTIC LABORATORY OF CITY HOSPITAL Código: XXXXXX Fabricante Sustrato: BioSystems Muestra: Junio-12 Isotipo: IgA (BioSystems) Su resultado: 35 U/ml Resultado esperado: Positivo bajo Positivo bajo * Negativo Equivoco Positivo bajo Positivo elevado valoración*: TOLERABLEe rformance on final reports *Tolerable: cuando su título se encuentra entre menos y más un título esperado. *No tolerable: cuando su título se encuentra por encima o por debajo de más de un título esperado. 18

Servicio global de calidad INFORMES TRIMESTRALES ANTICUERPOS ANTI-GLIADINA IgA Determinación por ELISA Centro: CLINICAL DIAGNOSTIC LABORATORY OF CITY HOSPITAL Código: XXXXXX Fabricante Sustrato: BioSystems Muestra: Junio-12 Isotipo: IgA (BioSystems) Su resultado: 10 U/ml Resultado esperado: Equívoco Equívoco * Negativo Equivoco Positivo bajo Positivo elevado valoración*: TOLERABLEe rformance on final reports *Tolerable: cuando su título se encuentra entre menos y más un título esperado. *No tolerable: cuando su título se encuentra por encima o por debajo de más de un título esperado. 19

Servicio global de calidad INFORMES TRIMESTRALES ANTICUERPOS ANTI-GLIADINA DEAMINADA IgA Determinación por ELISA Centro: CLINICAL DIAGNOSTIC LABORATORY OF CITY HOSPITAL Código: XXXXXX Fabricante Sustrato: BioSystems Muestra: Junio-12 Isotipo: IgA (BioSystems) Su resultado: 6 U/ml Resultado esperado: Negativo Negativo * Negativo Equivoco Positivo bajo Positivo elevado valoración*: TOLERABLEe rformance on final reports *Tolerable: cuando su resultado se encuentra en el rango esperado. *No tolerable: cuando su resultado no se encuentra en el rango esperado 20

Servicio global de calidad INFORMES TRIMESTRALES ANCA Determinación Inmunofluorescencia Código: XXXXXX Fabricante Sustrato: BioSystems Muestra: Junio -13 Isotipo: IgG (BioSystems) Dilución inicial: menor de 1/20 Su resultado: c-anca Resultado real: c-anca Correct results: 70% DESCRIPCIÓN DEL PATRÓN: Marcaje granular difuso del citoplasma del neutrófilo con mayor intensidad interlobular. El núcleo y los nucleolos son negativos. El patrón de marcaje es principalmente, el resultado de la unión del anticuerpo con el antígeno proteinasa 3 (PR-3). PR-3 es una serín proteasa con un peso molecular de 39 kd que se encuentra en los gránulos azurófilos de los neutrófilos humanos y los monocitos. INFORMACIÓN DE LA MUESTRA Este patrón esta fuertemente asociado, aunque no es un criterio de diagnóstico, a la granulomatosis de Weneger (con una especificidad diagnóstica superior al 90%), la poliangeítis microscópica (y las diferentes vasculitis limitadas a riñón) y el síndrome de Churg-Strauss. Los resultados del ELISA muestran PR-3 positivo y MPO negativo. El diagnóstico debería ser confirmado mediante biopsia histológica, siempre que sea posible. 21

Servicio global de calidad INFORMES FINALES ANTICUERPOS ANTINUCLEARES (ANA) Centro: CLINICAL DIAGNOSTIC LABORATORY OF CITY HOSPITAL Código: XXXXXX Sustrato: Hep-2 (BioSystems) Isotipo: IgG (BioSystems) Dilución inicial: 1/80 RESUMEN DE RESULTADOS: Mes Su Resultado Resultado Real Concordancia Enero Nuclear punteado (3.3) Nuclear punteado (3.3) ü Febrero Tipo mitocondrial (5.3) Citoplasmático difuso (5.2) X Marzo Tipo actina (5.6) Tipo actina (5.6) ü Abril Nuclear homogéneo (2.1) Nuclear homogéneo (2.1) ü Mayo Nuclear moteado fino (2.2.3) Nuclear moteado fino (2.2.3) ü Junio Negativo (6.2) Negativo (6.2) ü Julio Nuclear grumoso (3.2) Nuclear grumoso (3.2) ü Agosto Nuclear moteado grueso (2.2.2) Nuclear moteado grueso (2.2.2) ü Septiembre Centromérico (2.2.6) Centromérico (2.2.6) ü Octubre Negativo (6.1) Negativo (6.1) v Noviembre Granulado tipo Scl70 (2.2.4) Negativo (6.1) X Diciembre Nuclear homogéneo (2.1) Nuclear homogéneo (2.1) ü 10 resultados correctos, 2 incorrectos, 0 no reportados El laboratorio es SUFICIENTE* en sus prestaciones *Correcto: cuando no hay más de un resultado incorrecto o no reportado. *Suficiente: cuando el número de resultados correctos alcanza o supera la cifra de 7. *Mejorable: cuando el número de resultados correctos es inferior a la cifra de 7. *Datos insuficientes: cuando el número de resultados reportados es menor de 7. 22

Servicio global de calidad INFORMES FINALES ANTICUERPOS ANTI ndna (DNA) Centro: CLINICAL DIAGNOSTIC LABORATORY OF CITY HOSPITAL Código: XXXXXX Isotipo: IgG (BioSystems) Fabricante Sustrato: BioSystems RESUMEN DE RESULTADOS: Mes Título reportado Título esperado Concordancia Enero 1/20 1/20 ü Febrero 1/40 1/80 x Marzo Negativo Negativo ü Abril 1/1280 1/1280 ü Mayo 1/640 1/640 ü Junio 1/20 1/20 ü Julio 1/10 1/40 x Agosto 1/80 1/80 ü Septiembre 1/10 1/10 ü Octubre Negativo Negativo ü Noviembre 1/40 1/40 ü Deciembre 1/20 1/20 ü 10 resultados correctos, 2 incorrectos, 0 no reportados El laboratorio es SUFICIENTE* en sus prestaciones *Correcto: cuando no hay más de un resultado incorrecto o no reportado. *Suficiente: cuando el número de resultados correctos alcanza o supera la cifra de 7. *Mejorable: cuando el número de resultados correctos es inferior a la cifra de 7. *Datos insuficientes: cuando el número de resultados reportados es menor de 7. 23

Servicio global de calidad INFORMES FINALES ANTICUERPOS ANTI-ENDOMISIO Determinación por Inmunofluorescencia Centro: CLINICAL DIAGNOSTIC LABORATORY OF CITY HOSPITAL Código: XXXXXX Fabricante Sustrato: BioSystems Isotipo: IgA (BioSystems) RESUMEN DE RESULTADOS: Mes Título reportado Título esperado Concordancia Marzo 1/20 1/20 ü Junio 1/1280 1/1280 ü Septiembre 1/80 1/80 ü Diciembre 1/20 1/20 ü 4 resultados correctos, 0 incorrectos, 0 no reportados El laboratorio es CORRECTO* en sus prestaciones *Correcto: cuando no hay ningún resultado incorrecto. *Suficiente: cuando el número de resultados correctos alcanza la cifra de 3. *Mejorable: cuando el número de resultados correctos es de 3. *Datos insuficientes: cuando el número de resultados reportados es de 3. 24

Servicio global de calidad INFORMES FINALES ANTICUERPOS ANTI-tTRANSGLUTAMINASA IgA Determinación por ELISA Centro: CLINICAL DIAGNOSTIC LABORATORY OF CITY HOSPITAL Código: XXXXXX Isotipo: IgA (BioSystems) Fabricante Sustrato: BioSystems RESUMEN DE RESULTADOS: Mes Título reportado Título esperado Concordancia Marzo Positivo elevado Positivo elevado ü Junio Negativo Negativo ü Septiembre Positivo bajo Positivo bajo ü Diciembre Positivo elevado Positivo elevado ü 4 resultados correctos, 0 incorrectos, 0 no reportados El laboratorio es CORRECTO* en sus prestaciones *Correcto: cuando no hay ningún resultado incorrecto. *Suficiente: cuando el número de resultados correctos alcanza la cifra de 3. *Mejorable: cuando el número de resultados correctos es de 3. *Datos insuficientes: cuando el número de resultados reportados es de 3. 25

Servicio global de calidad INFORMES FINALES ANCA Determinación por Inmunofluorescencia Centro: CLINICAL DIAGNOSTIC LABORATORY OF CITY HOSPITAL Código: XXXXXX Fabricante Sustrato: BioSystems Isotipo: IgG (BioSystems) Dilución inicial: inferior a 1/20 RESUMEN DE RESULTADOS: Mes Su resultado Resultado real Concordancia Marzo c-anca c-anca ü Junio p-anca p-anca ü Septiembre Negativo Negativo ü Diciembre c-anca c-anca ü 4 resultados correctos, 0 incorrectos, 0 no reportados El laboratorio es CORRECTO* en sus prestaciones *Correcto: cuando no hay ningún resultado incorrecto. *Suficiente: cuando el número de resultados correctos alcanza la cifra de 3. *Mejorable: cuando el número de resultados correctos es de 3. *Datos insuficientes: cuando el número de resultados reportados es de 3. 26

INSTRUCCIONES PARA CUMPLIMENTAR LOS FORMULARIOS Identificación del laboratorio Tras indicar la fecha, llenar los primeros campos con el nombre del laboratorio. También debe indicarse el nombre del director o responsable del laboratorio, así como el responsable del Programa de evaluación externa de la calidad. El tipo de laboratorio marcar con una cruz las respuestas que correspondan Indicar finalmente el promedio aproximado de muestras que se reciben semanalmente en el laboratorio. Codificaciones Codificación Programa ANA: Codificación sustrato y conjugado: se selecciona el sustrato/conjugado de trabajo y se anota el nombre del fabricante. Codificación dilución inicial: se selecciona la dilución inicial de trabajo de las tres opciones que se muestran. Codificación Programa ANCA: Codificación de sustrato y conjugado: se selecciona el sustrato/conjugado de trabajo y se anota el nombre del fabricante. Codificación dilución inicial: se selecciona la dilución inicial de trabajo de las tres opciones que se muestran. Codificación del procedimiento: se selecciona el tipo de procedimiento de trabajo y se anota el instrumento Codificación Programa DNA y Celíaco: Codificación sustrato: se anota el nombre del fabricante del sustrato de trabajo Codificación conjugado: se selecciona el tipo de conjugado de trabajo y se anota el nombre del fabricante. Codificación procedimiento: se selecciona el tipo de procedimiento de trabajo y se anota el nombre del instrumento. Para determinaciones ELISA: Rango de trabajo: se indica el rango normal de trabajo del fabricante 27

Servicio global de calidad FICHA DE INSCRIPCIÓN Fecha: IDENTIFICACIÓN DEL LABORATORIO Nombre del Laboratorio: Dirección Teléfono e-mail Nombre del responsable del laboratorio Nombre del responsable control de calidad Tipo de laboratorio: Privado Publico Número de muestras semanales 29

BioSystems S.A. Costa Brava 30, 08030 Barcelona (España) www.prevecal.net prevecal@biosystems.es 30

Servicio global de calidad CODIFICACIONES Fecha: Nombre del laboratorio: PROGRAMA ANTICUERPOS ANTINUCLEARES (ANA) Sustrato: HEp-2 Fabricante / Marca Hígado Conjugado: IgG Fabricante / Marca Polivalente Dilución inicial: inferior a 1/80 entre 1/80 y 1/160 1/320 o superior Procedimiento: Manual Instrumento Automático Fabricante sustrato: PROGRAMA ANTICUERPOS ANTI n-dna (ndna) Conjugado: IgG Fabricante / Marca Polivalente Procedimiento: Manual Instrumento Automático 31

BioSystems S.A. Costa Brava 30, 08030 Barcelona (España) www.prevecal.net prevecal@biosystems.es 32

Servicio global de calidad CODIFICACIONES PROGRAMA ANTICUERPOS ANTI-ENDOMISIO Fabricante sustrato: Conjugado: IgA Fabricante / Marca IgG Procedimiento: Manual Instrumento Automático PROGRAMA ANTICUERPOS ANTI ttg Fabricante sustrato: Conjugado: IgA Fabricante / Marca IgG Procedimiento: Manual Instrumento Automático Rango de trabajo: 33

Servicio global de calidad CODIFICACIONES PROGRAMA ANTICUERPOS ANTI-GLIADINA Fabricante sustrato: Conjugado: IgA Fabricante / Marca IgG Procedimiento: Manual Instrumento Automático Rango de trabajo: PROGRAMA ANTICUERPOS ANTI-GLIADINA DEAMINADA Fabricante sustrato: Conjugado: IgA Fabricante / Marca IgG Polivalente Procedimiento: Manual Instrumento Automático Rango de trabajo: 34

Servicio global de calidad CODIFICACIONES PROGRAMA ANTICUERPOS ANTI-NEUTRÓFILO CITOPLASMÁTICO (ANCA) Sustrato: ANCA-EtOH Fabricante / Marca Conjugado: IgG Fabricante / Marca Polivalente Dilución inicial: inferior a 1/20 entre 1/20 y 1/40 1/80 o mayor Método: Manual Instrumento: Automático 35